Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilenc-er2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,最高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05)。结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

世界首报染色体异常核型四例

从1981年至1985年8月共作外周血淋巴细胞及羊水细胞G带染色体检查1155人次,发现异常核型62例,其中4例属世界首报。4例中,3例为染色体相互平衡易位携带者,皆有不良妊娠史,1例患原发闭经,有X染色体短臂重复。     

维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白转导途径调控作用的研究

目的：探讨维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白（Cx）43信号转导途径的调控作用。方法：应用特异性钙指示剂（Fluo-3 AM)在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察维甲酸作用后的细胞质内信号转导分子游离钙的分布及强度变化。采用流式细胞仪、结合蛋白印迹技术分析,检测外源信号分子对Cx43的表达以及蛋白酪氨酸磷酸化状态的影响。结果：HeLa细胞内游离钙经维甲酸作用后明显超载,细胞内游离钙浓度（[Ca^2 ]i)由静息状态下的35.73μmol/L上升至58.16μmol/L。流式细胞仪分析,Cx43阳性细胞表达率由1.9%上升至26.3%。蛋白印迹技术分析,HeLa细胞出现Cx43酪氨酸磷酸化。结论：维甲酸对HeLa细胞Cx43信号转导途径的调控是在细胞质内游离钙的参与下,使Cx43阳性细胞表达率上升,并在酪氨酸位点出现明显的磷酸化作用下实现的。     

核酸提取仪在肝炎病毒核酸定量检测中的应用研究

目的 比较核酸提取仪和手工法核酸提取对荧光定量PCR准确定量的影响.方法 血清样本分别用NP968核酸提取仪和手工法提取DNA和RNA,提取产物作为模板,用ABI 7500进行荧光定量PCR分别检测HBV和HCV,对比CT值,比较两种核酸提取方法的效率.结果 核酸提取仪提取的核酸PCR扩增的CT值明显低于手工法的CT值,处理大批量样本的时间也明显短于手工法.结论 核酸提取仪具有速度快、提取效率高的优点,值得在临床实验室推广应用.     

克拉霉素抑制b-FGF诱导血管生成的实验研究

目的:研究克拉霉素对动物体内血管生成的影响,为其抗肿瘤血管生成治疗的临床应用提供实验依据.方法:采用b-FGF诱导小鼠腹壁Matrigel种植体方法进行血管生成实验,500 μl Matrigel与 b-FGF 、肝素混匀后,小鼠腹部正中区域皮下注射,5 d 后取出,分别测量Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积.抑制实验在Matrigel种植前3 d开始,实验小鼠按10～70 mg/(kg*d)的不同剂量,经胃管灌注克拉霉素,1次/d ,直至实验结束.结果:克拉霉素剂量≥40 mg/(kg*d)后,可明显减少Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),并与克拉霉素服用剂量呈剂量-效应关系.结论:克拉霉素具有明显抗血管生成作用,在肿瘤和其他疾病的抗血管生成治疗中具有一定的应用价值.     

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系HO─8910细胞凋亡的诱导作用

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系ＨＯ┐８９１０细胞凋亡的诱导作用马向东陈必良叶永清郑维国王德堂（第四军医大学西京医院妇产科西安７１００３３）关键词细胞凋亡卵巢肿瘤流式细胞术顺铂中图号Ｒ７３７．３１细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种生理性细胞程序化...     

人原始生殖细胞的体外分离及培养

目的 :探讨人原始生殖细胞 (PGCs)的体外分离培养条件及相关影响因素 .方法 :以胎鼠成纤维细胞为滋养层 ,用1.2 5 g·L-1胰蛋白酶室温下消化胚胎组织 3～ 5min ,分离培养PGCs细胞并观察其克隆形成率 ;进而观察不同浓度白血病抑制因子 (leukemiainhibitoryfactor,LIF)对PGCs克隆在传代及未分化状态的维持等方面的影响 ;最后对PGCs克隆进行碱性磷酸酶活性鉴定及染色体组型分析 .结果 :采用胰蛋白酶消化法可对PGCs进行分离培养 ;PGCs在传代过程中其克隆形成率亦逐渐降低 ;培养基中无LIF时 ,PGCs克隆可分化为心肌样收缩细胞团 ;LIF在阳～ATP掺入法测得不同处理组的MAPK活性分别如下 :Con组 6 9.7± 2 .5 ,Non组 72 .8± 4 .6 ,Lip性 ,在传代过程中其染色体组型未见变异 .结论 :可从人类早期胚胎中分离培养PGCs细胞 ,培养基中LIF的浓度在 5～ 10 g·L-1时以利于提高PGCs培养的成功率并抑制其过早分化 .     

509例子宫发育异常患者染色体核型分析

目的通过细胞遗传学研究,探讨子宫发育异常与染色体核型的关系。方法取患者的外周血进行无菌培养、制片及G显带技术进行染色体核型分析。结果通过对509例患者核型分析,发现染色体异常59例(11.59%),其中先天性无子宫患者染色体异常率为11.70%(20/171);始基子宫患者染色体异常率为14.10%(11/78);幼稚子宫患者染色体异常率为10.77%(28/260)。59例染色体异常的患者中,X染色体数目异常占50.85%,X染色体结构异常占16.95%,常染色体异常占3.39%,含Y染色体占28.81%。结论 X染色体数目异常是导致子宫发育异常的主要原因之一。     

优化精子宫腔内人工授精20例

1　对象和方法1.1　对象　不孕夫妇 2 0对 ,女方 2 6～ 35 (平均 30 .2 )岁 ,男方 2 8～ 40 (平均 32 .6 )岁 .平均不孕 4.1(2～ 8) a.不孕原因 :精液异常 11例 ,免疫因素 5例 ,排卵障碍 3例 ,原因不明 1例 .女方半年内做过输卵管通畅试验 ,证实为通畅 .1.2　方法　 37个月经周期采用克罗米酚促排卵 ,8个月经周期采用人绝经期促性腺激素 (h MG)促排卵 ,当优势卵泡 >18mm时 ,im1次 h CG,5 0 0 0～ 10 0 0 0 IU,12及 36 h后各做1次人工受精 [1 ] .另 7个周期未用促排卵药物 ,采用自然周期 .男子禁欲 3～ 5 d,以手淫法将精液收集到 10 0 m L…     

宫颈癌细胞系SiHa中HPV16E6,E7蛋白的表达

我们应用免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜(ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＬＳＣＭ),观察了宫颈癌细胞系ＳｉＨａ中ＨＰＶ１６型(ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１６)Ｅ６,Ｅ７基因区产物Ｅ６,Ｅ７蛋白的表达。１材料与方法１．１材料含ＨＰＶ基因的宫颈癌细胞系ＳｉＨａ,由西安医科大学分子生物研究中心李旭教授提供。用含１００ｍＬ／Ｌ胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基(Ｇｉｂｃｏ公司)常规培养后,滴于盖玻片培养,制成单层细胞爬片。１．２方法免疫荧光染色用正常羊血清封闭…