快速检测IL-28B rs12979860基因多态性双色荧光PCR法的建立

目的建立一种适合临床常规检测白细胞介素28B(interleukin-28B,IL-28B)rs12979860基因多态性的快速实验方法。方法随机收集我院223例丙型肝炎住院患者外周血标本,设计针对IL-28B rs12979860基因多态性位点的特异性引物和荧光探针,直接通过双色荧光PCR法检测IL-28B rs12979860基因多态性,以基因测序法进行验证,同时初步探讨IL-28B rs12979860不同基因型在本研究人群中的分布频率。结果双色荧光PCR法能很好地鉴别IL-28B rs12979860 3种基因型,与测序法结果一致率为100%。IL-28B rs12979860基因多态性中T/T、C/T和C/C基因型在本研究人群中的分布频率分别为1.79%(4/223)、23.32%(52/223)和74.89%(167/223)。结论根据IL-28B rs12979860单核苷酸多态性基因型特异性探针和引物所建立的双色荧光PCR法能快速有效地进行rs12979860基因多态性分型,方法快速、可靠,为丙型肝炎患者抗病毒个体化治疗效果的预测提供了一种有效的检测方法。     

慢性乙肝患者HBV反转录酶区新变异rtL180M+A181C+M204V的鉴定及表型耐药特点分析

目的鉴定经核苷(酸)类似物序贯治疗的慢性乙肝患者HBV反转录酶(RT)区的新变异rtA181C,并分析其表型耐药特点。方法 2010年6月解放军302医院确诊的慢性乙肝患者1例,提取血清HBV DNA,巢式PCR扩增HBVRT全基因,采用PCR产物直接双向测序结合克隆测序分析HBV RT区12个耐药相关突变位点。构建代表性克隆重组表达载体pTriEx-HBV1.1,瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,转染4h后加入不同浓度拉米夫定(LAM,终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L)、阿德福韦(ADV,终浓度为0、0.033、0.1、0.33、1、3.3μmol/L)、恩替卡韦(ETV,终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)和替诺福韦(TDF,终浓度为0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L),4d后采用实时荧光定量PCR检测不同药物浓度作用下培养细胞上清中HBV DNA的复制水平并分析其表型耐药特点。结果此例慢性乙肝患者序贯接受LAM治疗36个月→ADV治疗14个月→ETV治疗29个月,而后发生病毒学突破,HBV DNA由阴性升高至1.1×106IU/ml,ALT由正常升高至235U/L。直接测序显示HBV RT基因rtL180M+A181V+M204V变异,克隆测序得到18个克隆,其中9个为rtL180M+A181V+M204V变异株,7个为rtL180M+A181C+M204V变异株,1个为rtV173L+L180M+A181V变异株,1个为野生株。病毒复制力检测结果从高到低依次为:野生株>rtV173L+L180M+A181V>rtL180M+A181C+M204V>rtL180M+A181V+M204V。表型耐药分析显示,与野生株比较,rtL180M+A181V+M204V变异株和rtV173L+L180M+A181V变异株对LAM和ADV不敏感,rtL180M+A181C+M204V变异株对LAM和ETV不敏感。结论长期核苷(酸)类似物序贯治疗可引起多重耐药;rt181位点新的变异rtA181C与ETV长期用药有关,可能是新的ETV耐药变异位点。     

三七护肝胶囊的遗传毒性评价

摘 要 目的：对三七护肝胶囊的急性毒性和遗传毒性进行研究,评价其毒理学安全性。方法: 对三七护肝胶囊进行小鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验。结果: 三七护肝胶囊对小鼠的急性毒性最大耐受剂量（MTD）大于20 g·kg^-1,属无毒物质;各剂量组Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性。结论: 在本试验条件下,三七护肝胶囊属于无毒级物质,未显示有遗传毒性作用。     

海藻酸钠凝胶对骨髓间充质干细胞生物学效应的初步研究

目的：初步探讨海藻酸钠凝胶对骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, bMSCs）的生物学效应。方法：将在海藻酸钠凝胶上培养的细胞设为实验组,在塑料培养板上的细胞设为对照组。以MTT法检测细胞在两种材料上的增殖;采用甲苯胺蓝染色观察细胞在凝胶上的生长形态;RT-PCR检测bMSCs生长6天后的成骨相关基因。结果：两组的bMSCs均能迅速贴附、铺展进入增殖期;在实验组,细胞成集落样生长较明显,且形态发生改变,伸出较多的伪足,细胞间接触更为紧密;培养至第6天,进行成骨相关基因检测,发现对照组和实验组均有Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶表达,但它们在实验组的表达量高于对照组;同时,实验组骨连接蛋白为阳性表达,而对照组为阴性。结论：bMSCs可能具有自发向成骨细胞分化的趋势;海藻酸钠凝胶具有促进干细胞向成骨细胞分化的生物学活性。提示海藻酸钠凝胶可能是比较适合的骨组织工程支架材料。     

无创血流动力学监测在急性心衰中的诊断及预后价值

目的 探讨无创血流动力学监测对急性心力衰竭(心衰)患者的诊断及预后价值。方法 选取45例急性心衰患者作为观察组,选取同时期的45例非急性心衰患者作为对照组。两组均实施无创血流动力学监测,分析血压、呼吸频率、心率、心排血量(CO)、心脏指数(CI)、每搏量(SV)、每搏量指数(SVI)、校正流动时间(FTC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞计数(WBC)、pH值、中性粒细胞比例(NEUT%)、动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)、动脉血氧分压(PaO₂)、碳酸氢根(HCO₃^-)、住院时间、治疗后7 d及30 d死亡情况。结果 两组收缩压、舒张压、呼吸频率及心率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组CO、CI、SV、SVI、FTC比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组RBC、HGB、WBC、pH值、NEUT%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组PaCO₂、PaO₂、HCO₃^...     

FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡

目的研究上皮生长因子受体和FAK的相互作用以及对下游信号的影响。方法建立聚集粘连激酶(FAK)缺失突变和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP和FAK-GFP稳定表达细胞系。结果同野生型FAK-GFP相比,N-端1-100氨基酸残基的缺失突变体,缺失1-693氨基酸残基的突变体结合在黏附点的能力被完全抑制。应用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳证明,EGF和纤维连接蛋白诱导FAK磷酸化的位点不同,进一步证实del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP,抑制MAPK的磷酸化,增强Akt的磷酸化;而FAK-GFP增强MAPK磷酸化,抑制Akt磷酸化。结论FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡。     

磁共振成像在鉴别可逆性胼胝体压部病变综合征与胼胝体压部梗死中的应用价值

目的对可逆性胼胝体压部病变综合征与胼胝体压部梗死患者病灶的表观扩散系数进行分析,探讨磁共振成像在两者中的鉴别价值。方法回顾性分析2016年10月至2018年11月经临床和影像确诊的可逆性胼胝体压部病变综合征患者11例和胼胝体压部梗死患者14例,测量病灶表观扩散系数,分析两组患者表观扩散系数的差异。结果 11例可逆性胼胝体压部病变综合征患者病灶位于胼胝体压部中央,DWI呈高信号,ADC呈低信号,表观扩散系数平均为(291.59±48.30)mm~2/s;14例胼胝体压部梗死患者病灶分布不均匀,DWI呈高信号,ADC呈低信号,表观扩散系数平均为(328.43±53.70)mm2/s。两组ADC值差异无统计学意义(P=0.089)。结论可逆性胼胝体压部病变综合征和胼胝体压部梗死的表观扩散系数之间无显著差异,但稍低的表观扩散系数可辅助诊断,两者鉴别还需结合病灶位置及形态。     

西安市食管癌的分子流行病学研究

目的　探讨西安地区食管癌与 p5 3和 H- Ras高表达的关系 .方法　应用分子流行病学研究方法 ,调查分析了西安地区 6 1例病例、43例对照的基础资料并检测组织中 p5 3和H- Ras高表达情况 .结果　病例组 p5 3和 H- Ras的高表达率(分别为 80 .3% ,41.0 % )均高于对照组 (30 .2 % ,16 .3% ,P<0 .0 1) .p5 3高表达的危险因素是 H- Ras高表达与肿瘤家族史且二者具有协同作用 .结论　 p5 3和 H- Ras高表达是西安地区食管癌重要的生物学标志     

关于我院《生理学实验》课程考核方法的改革及实践初探

《生理学实验》是一门重要的医学基础必修课程,其教学目标不仅是巩固和加深学生对基础理论知识的理解和掌握,更重要的是培养学生实际的动手能力、综合分析和解决问题的能力.文章介绍了贵阳中医学院中西医结合专业和医学心理学双学位专业的学生学习《生理学实验》课程之后的考核方法改革,包括建立系统的考核评分体系、制定评分细则、多种考试形式等,既考查了学生运用理论分析问题的能力,又重视学生的实际动手能力.结果表明,通过改革,既提高了学生兴趣,又提升了教学质量.     

人S100A6-GST融合蛋白的原核表达和纯化

目的:制备人S100A6-GST融合蛋白,为研究人S100A6((hS100A6)蛋白的功能奠定基础.方法:从pHAHA-hS100A6中双酶切获取hS100A6基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A6,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达hS100A6蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达产物,Glutathion-Sepharose 4B球珠分离纯化.结果:重组菌株表达出与理论预测值相符的一个约36ku的hS100A6融合蛋白,纯化后的融合蛋白的产量为3mg/L菌液,纯度约92%.结论:成功构建了hS100A6-GST原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的hS100A6-GST融合蛋白,为hS100A6蛋白功能的研究打下了基础.