miR-495-3p / WIF1 / Wnt 信号通路轴调节视网膜母细胞瘤细胞 增殖、 迁移和侵袭

目的 分析 miR-495-3p / Wnt 抑制因子 (Wnt inhibitor factor 1, WIF1) / Wnt 信号通路轴调节视网 膜母细胞瘤 (retinoblastoma, RB) 细胞增殖、 迁移和侵袭。 方法 生物信息学分析 WIF1 的差异表达及与 临床不良表型之间的关系, 并预测 miRNA 靶标; 双荧光酶素报告实验验证。 构建稳定过表达 WIF1 的 RB 细胞 (Vector 组、 WIF1 组)。 构建稳定过表达 miR-495-3p 的 RB 细胞 (miR-NC 组、 miR-495-3p 组和 miR495-3p + WIF1 组)。 Western 印迹检测 WIF1 蛋白及 Wnt 通路相关蛋白表达, 并进行体外功能试验。 裸鼠移 植瘤实验分析移植瘤体积重量。 免疫组化分析 WIF1 在 RB 组织中水平。 结果 WIF1 低表达, 与迁移、 侵袭 有关, 为 miR-495-3p 靶标, 双荧光酶素报告实验证实 WIF1 是 miR-495-3p 作用靶点。 WIF1 过表达抑制细胞增 殖、 迁移和侵袭, 影响细胞周期, 诱导凋亡。 体内实验显示 WIF1 在 RB 组织中过表达, 其过表达抑制瘤体生 长。 过表达 WIF1 下调 β-catenin、 c-Myc 蛋白水平 (P< 0. 05)。 过表达 miR-495-3p 下调 WIF1 蛋白水平, 上调 β-catenin 和 c-Myc 蛋白水平, 促进细胞增殖迁移、 迁移和侵袭, 抑制细胞凋亡 (P< 0. 05), 增加 WIF1 表达 可逆转 miR-495-3p 的作用 (P< 0. 05)。 结论 miR-495-3p 靶向 WIF1 通过 Wnt 信号通路抑制 RB 细胞增殖、 迁移和侵袭, 并诱导凋亡。     

海藻酸钠-维甲酸微球对激光视网膜损伤后视网膜下增生形成的影响

目的 观察海藻酸钠-维甲酸(AGS-RA)微球缓释系统对激光损伤模型中视网膜下增生反应区形成的抑制作用.方法 无水乙醇将维甲酸溶解,与1.5%的海藻酸钠均匀混合,用静电微囊发生器一次成型制作AGO-RA微球;建立激光损伤动物模型,激光照射时间0.20 s,光斑直径200μm,能量输出功率420 mw;30只青紫蓝灰黑兔随机分为激光损伤组、实验组和对照组.实验组和对照组分别在激光光凝后立即玻璃体腔注射AGO-RA微球和空白微球;激光光凝后1、2、3、4、6周分别做视网膜病理组织连续切片,每一时间亚组取6个激光斑,分别测量激光斑的高度、宽度和面积并进行统计学分析.结果 组织病理学检查发现激光损伤后视网膜全层细胞分布形态改变,局部成纤维细胞生长,增生形成;实验组局部也有增生反应,但程度较轻,与激光损伤组和对照组相比,激光损伤增生反应区的平均宽度差异无统计学意义(F=1.53,P>0.05);同一时间点对照组和激光损伤组激光增生反应区的平均高度和面积差异无统计学意义(F=1.17,1.02;P>0.05),分别与相应的实验组相比,差异均有统计学意义(F=61.22,56.53,P<0.01).结论 AGORA缓释系统可以减轻激光损伤后视网膜下增生反应的形成.     

小干扰RNA对人视网膜色素上皮细胞缝隙连接蛋白43表达水平的调节

目的 观察体外化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,cx43)基因和蛋白表达的影响.方法 设计合成针对人ex43基因的小干扰片段(siR-NA1、siRNA2、siRNA3)和1条阴性对照siRNA0,在脂质体的介导下转染培养的人RPE细胞,采用RT-PCR确定最有效的抑制片段;针对siRNA的有效片段,分为不同浓度(50～30nmolO·L-1)转染培养细胞,培养72 h后进行MTT增生试验,观察其对人RPE细胞增生能力的影响,确定最有效的浓度;siRNA转染细胞后,分别培养12 h、24 h、48 h、72 h后进行Weston blot试验.观察不同时间点其对cx43蛋白表达的影响.结果 体外合成的3条siRNA均在一定程度上抑制cx43基因的合成,其中 siRNA1是最有效的抑制片段,根据条带灰度比其抑制率达到72%;siRNA1可以显著促进人RPE细胞的增生,增生率达到146%;明显抑制其cx43蛋白的表达(P<0.01),抑制率达到61%;从浓度组间结果可以看出,siRNA的最佳作用浓度是250 nmol·L-1,在此浓度之前效率与浓度呈正比,超过此浓度后各浓度组间差异无统计学意义;比较不同时间点,siRNA转染人RPE细胞24 h后开始抑制cx43表达,48 h后对cx43蛋白合成抑制率最明显.结论 化学合成的siRNA可以有效抑制培养的人RPE细胞cx43基因的表达,促进细胞的增生.这种基因沉默作用可能对于视网膜色素上皮组织的再生有一定作用.     

大鼠视网膜细胞间隙连接蛋白Cx43的表达

目的:探讨细胞间隙连接蛋白connexin43(Cx43)在BN大鼠视网膜中的分布特点.方法:以雄性挪威棕色大鼠(Brown Norway)为研究对象,应用免疫组化方法观察Cx43在BN大鼠视网膜中的分布特点.结果:正常视网膜内界膜,视神经纤维层以及神经节细胞层明显表达,神经节细胞表达的主要位置是细胞质和细胞膜,色素上皮细胞全层表达,内外颗粒层及内外层状层无表达.结论:正常视网膜的Cx43主要分布在内界膜,神经纤维层,视网膜节细胞层和视网膜色素上皮层.     

间充质干细胞来源外泌体对视网膜光感受器细胞PI3K/AKT通路及Ang-1蛋白水平作用的研究

目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)下外泌体对视网膜光感受器细胞PI3K/AKT通路及Ang-1蛋白水平的影响。 方法 应用免疫印迹检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)外泌体表面标志蛋白CD63及CD90 ,应用流式细胞仪检测光损伤661W细胞凋亡,应用免疫荧光检测Ang-1,应用免疫印迹检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。 结果 形态学及免疫印迹检测CD63、CD90表达结果证实h UCMSCs外泌体。线粒体膜电位检测结果以及细胞形态学鉴定661W细胞建立光损伤模型成功。流式细胞仪、免疫荧光检测结果显示,与正常组比较模型组细胞凋亡率及Ang-1阳性表达增加,在经过h UCMSCs干预后有所降低,且呈现出明显的浓度依赖性（P<0.05）。免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达降低,经过h UCMSCs干预后有所升高（P<0.05）,且高浓度组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达水平与激动剂组比较无差异（P>0.05）,模型组PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达水平高于抑制剂组（P<0.05）。 结论 间充质干细胞下外泌体可能是通过激活PI3K/AKT通路,抑制了视网膜光感受器细胞的凋亡以及Ang-1的水平,从而对光损伤视网膜起保护作用。     

眼外伤病人的心理分析和心理护理

眼外伤是眼科常见的一种急性创伤性疾病 ,也是眼部致残致盲的主要原因之一 ,多数患者发病突然[1] 。有的患者单眼失明 ,有的患者是双眼失明 ,给生活和工作带来很大不便 ,心身带来极大的痛苦。因此 ,针对病人的心理状态 ,进行分析并采取相应的护理措施 ,从而消除不良心理 ,对病人的治疗和康复 ,都是很必要的。1　外伤后病人的心理反应及心理护理眼外伤多是由于突如其来的意外事故造成的 ,伤后多数病人视力降低或失明 ,就诊时不知病情程度 ,多数心情紧张 ,情绪低落 ,焦虑不安有恐惧感。根据这一心理 ,我们医护人员要热情友好的接待安置好病人 …     

提高声像技术水平 为医院建设服务

随着现代医学的飞速发展,先进的医学声像技术以其图文并茂、形象直观、信息传递速度快而越来越多地引起各级领导和广大医护人员的重视。我们在医院全面建设的同时,遵循医学声像技术的特性,提高服务水平,拓展服务功能,促进了医院的医教研工作,取得了明显的社会效益和经济效益。 一、遵循医学声像技术必有的特性 医学声像技术是一门科学技术性很强的工作,一切声像     

浅谈责任制护理与职业道德

责任制护理是护理专业的主要课题,在责任制护理中,如何体现护理与职业道德?怎样评价护理与职业道德?都是值得探究的问题。 功能制护理和责任制护理,在护理体制上即有联系,又有区别;在职业道德上虽然没有本质的区别,但有程度上的深浅,层次上的不同。下面就医德规范在责任制护理中的特点,浅谈认识:     

玻璃体切除治疗老年性黄斑变性玻璃体积血的临床分析

且的：探讨老年性黄斑病变相关性玻璃体积血患者的临床特点、手术治疗效果及手术时机。方法：对31例老年性黄斑病变玻璃体积血患者，采用玻切治疗。并根据患者情况采取黄斑部剥膜3例、视网膜切开1例。结果：术后患者视力均有不同程度的提高；病程在12个月以上者，黄斑区形成黄斑前膜和固定皱折，术后视力提高较少，均低于0.01；视网膜切开行黄斑下积血冲洗1例术后并发新生血管青光眼；27例发生完全玻璃体后脱离并且玻璃体腔为降解的血块。手术无并发症发生。结论：玻璃体切除术对老年性黄斑变性玻璃体积血有一定疗效，但手术最好在出血后半年内进行；视网膜切开冲洗易出现并发症，效果不好；对老年性黄斑病变玻璃体积血的手术因玻璃体后脱离及血块的降解使得手术操作较容易，不易出现并发症。     

应用激光扫描共聚焦显微镜观察晶体上皮细胞听游离钙

用钙的荧光批示剂ｆｌｕｏ－３和激光扫描共聚焦显微镜观察大白鼠的晶体上皮细胞中的游离钙。方法 ｆｌｕｏ－３着染细胞后，应用ＬＳＣＭ观察细胞内ｆｌｕｏ－３在钙螯合后的荧光分布，最后用钙离子载体Ａ２３１８７和重金属离子Ｍｎ＾＋＋作校正，将ｆｌｕｏ－３与钙结合显示的荧光强度转换为「（Ｃａ＾＋＋）」值。