基于非病毒载体的mRNA疫苗递送系统研究进展

mRNA疫苗是一类新型核酸疫苗。它具有通用性、开发迅速以及制造成本低等优点,目前已被广泛用于传染性疾病防治和癌症治疗的研究。但mRNA在体内的不稳定性和低表达限制其在临床的应用,因此开发出能高效转染mRNA的递送载体十分关键。目前的基因递送载体分为病毒载体和非病毒载体。本文对现有递送mRNA的非病毒载体进行综述,并对mRNA疫苗及其非病毒载体的研究前景进行展望。     

中药AY注射液的主要药效学研究

目的评价中药AY注射液对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用.方法用扭体法、热板法致痛考察中药AY注射液镇痛作用,并且以剂量递增方法形成吗啡依赖模型,用纳洛酮催促戒断.结果中药AY注射液无显著镇痛效应,注射液大、中、小剂量(10.8g/kg、5.4g/kg、2.7g/kg)均能减轻小鼠注射纳洛酮后跳跃反应,但只有小剂量组可以减轻小鼠体重下降.结论中药AY注射液能明显抑制大鼠的戒断反应,其中中药AY注射液大、中、小剂量能明显抑制大鼠异常姿势、激惹、咬牙、流泪、腹泻、流涎等症状(评分值P＜0.05～0.001);均能明显抑制大鼠体重下降(P＜0.05～0.01).     

肺炎克雷伯杆菌在T24细胞内存活的动态观察

目的：了解肺炎克雷伯杆菌与膀胱上皮细胞的相互关系,观察肺炎克雷伯杆菌在人膀胱上皮细胞抹T24中生存的动态变化。方法：采用肺炎克雷伯杆菌临床分离抹03138侵袭T24细胞,并用庆大霉素杀死细胞外的细菌,分别于细菌进入细胞后的4、24、48及72h裂解细胞,释放出细胞内的活细菌,用平板菌落计数法计数胞内活菌数。结果：T24细胞内的肺炎克雷伯杆菌03138抹在实验48h内有一定生长,试验72h细胞内活菌数量明显减少。加入细胞因子（TNF-αd和INF-γ）可以促进上皮细胞清除胞内细菌。结论：膀胱上皮细胞清除进入细胞内的肺炎克雷伯杆菌,可能是泌尿道天然免疫的一种防御机制,而细胞因子可以调控上皮细胞的抗菌作用。     

甲基丙烯酰紫草素的抗肿瘤作用及其机制的研究

目的 研究甲基丙烯酰紫草素(MA)在体内外的抗肿瘤作用,并探讨其作用机制.方法 用MTT法和生长曲线法研究不同浓度的MA对SGC-7901细胞的生长抑制作用;应用S180荷瘤小鼠模型进行其体内抗瘤实验;免疫组化法检测凋亡相关蛋白NF-κB p50的表达.结果 MA对SGC-7901细胞具有抑制作用,且呈明显的量效和时效关系,其IC50=14.12±1.83 mg·L-1;0.375、0.750、1.500 mg·kg-1的MA对小鼠移植性肉瘤S180的抑制率分别为25.00%、41.20%、61.11%,呈剂量依赖性;随着MA浓度的增大,NF-κB p50蛋白的表达下调.结论 MA具有较好的体内外抗肿瘤作用,可能与诱导细胞凋亡和抑制NF-κB p5O的活性有关.     

带标签的高迁移率蛋白N2(HMGN2)重组质粒用于亚细胞定位分析

为进行HMGN2的亚细胞定位分析,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HMGN2cDNA,以pcDNA3.1-myc-his和pEGFP-N1为载体,成功构建出HMGN2真核表达载体,转染HeLa细胞,转染效率达70%~80%,用抗六组氨酸臂的单克隆抗体经免疫细胞化学染色显示经pcDNA3.1-myc-his-HMGN2转染的HeLa细胞除细胞核外,胞浆亦明显着色,未转染的Hela细胞无论细胞核还是细胞浆均显阴性;用兔抗人HMGN2多克隆抗体进行的免疫细胞化学染色显示转染的HeLa细胞与用抗六组氨酸臂的单克隆抗体检测结果相同,而未转染的Hela细胞核内和胞浆也均有着色。用两种抗体行ELISA分析在细胞培养上清亦检测到HMGN2。激光共聚焦显微镜下观察pEGFP-N1-HMGN2转染的HeLa细胞发现绿色荧光主要在核内,但核外也同样存在。本实验结果证明HMGN2不仅存在于细胞核中,而且分布于细胞浆,亦可分泌到细胞外。     

红花注射液对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和神经元凋亡相关蛋白bcl-2,caspase-3表达的影响

目的:探讨红花注射液对神经元凋亡相关蛋白bcl-2、cas-pase-3表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为缺血对照组、红花大剂量组、红花中剂量组、红花小剂量组,采用大鼠大脑中动脉栓塞模型以及TTC染色和免疫组织化学染色方法,在不同时间点观察各组大鼠脑梗塞体积的变化以及bcl-2、caspase-3阳性细胞表达的不同。结果:在不同时间点各给药组大鼠的脑梗塞体积低于缺血对照组,有统计学意义(P<0.05);各给药组大鼠bcl-2阳性细胞表达的数目均高于缺血对照组,而caspase-3阳性细胞表达数目则低于缺血对照组(P<0.05)。结论:红花注射液可减少脑梗塞体积,…     

红花注射液对血栓性疾病的治疗作用研究

目的：观察红花注射液对缺氧、脑梗塞、心肌梗塞及“血瘀”证的治疗作用。方法：选用小鼠，豚鼠，SD大鼠分别复制缺氧、脑梗塞、心肌梗塞及“血瘀”模型，记录比较小鼠在密闭环境中的存活时间（秒），测量小鼠偏瘫恢复数，记录豚鼠不同时间心电图，比较给药前后心电图ST段和T波振幅变化的差异，测定血液流变学指标。结果：红花注射液高、中、低剂量组小鼠常压耐缺氧的生存时间明显延长，小鼠脑梗塞所致偏瘫的恢复率增高，红花注射液高剂量组的豚鼠因垂体后叶素所致0、30、60秒的心电图ST段高抬和0、15、60秒的T波升高均明显降低，中剂量组0秒的ST段和T波升高明显降低，“血瘀”证大鼠的全血黏度明显下降。结论：红花注射液对缺氧，脑梗塞，心肌梗塞，“血瘀”证有明显的治疗作用。     

人单核细胞株THP-1中HMGN2的分离纯化

目的:从人单核细胞株THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化组分的抗菌活性,对活性组分进行Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定分子量。结果:从人THP-1细胞中分离纯化出的HMGN2抗菌肽,对致病性大肠杆菌54080有抗菌活性。结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。     

大豆苷元对骨质疏松模型大鼠拔牙后牙槽窝骨修复的影响

目的:研究大豆苷元(Daidzein, Da)对骨质疏松模型大鼠拔牙后牙槽窝处骨修复的影响。方法:24只3月龄大鼠随机均分为4组:假手术组(Sham)、雌激素组(EG)、大豆苷元组(Da)(75 mg/kg·d^-1)和去卵巢组(Ovx)。摘除卵巢1周后,所有大鼠拔去双侧上颌第一磨牙,第12周检测血清钙、磷含量及总碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,制作左侧上颌骨拔牙窝处骨组织切片,于光镜下观察牙槽窝骨修复情况。结果:去卵巢后大鼠血清钙含量(2.10±0.04)及ALP活性(3.47±0.36)显著性降低(P<0.01),大豆苷元能显著提高去卵巢后大鼠血清钙含量(2.27±0.05)及ALP活性(4.49±0.38)(P<0.01)。骨形态观察表明大豆苷元对于牙槽窝的骨保存功能与雌激素相似,与Sham组骨形态结构较接近。结论:大豆苷元能有效改善骨质疏松模型大鼠拔牙后血清钙含量和ALP水平,减少牙槽窝骨吸收并恢复骨形态。     

重组人HMGN2多克隆抗体的制备及应用

目的制备人高迁移率非组蛋白N2(HMGN2)多克隆抗体,并用于HMGN2的亚细胞定位分析。方法提取人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)总RNA,应用RT-PCR从其总RNA中分离HMGN2cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMGN2基因大肠杆菌表达载体。应用GST亲合层析柱分离GST-HMGN2融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化。用ELISA法检测HMGN2抗体,免疫细胞化学染色法分析HMGN2的亚细胞分布。结果经酶切产物电泳分析和DNA序列测定证明成功构建出HMGN2基因重组原核表达载体pGEX-1λT-HMGN2。转化大肠杆菌经异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得相对分子质量约35×103的GST-HMGN2融合蛋白。该融合蛋白免疫所得免疫血清经ELISA检测显示获得滴度为1∶2000的较高效价的兔抗人HMGN2多克隆抗体。并应用此抗体对THP-1细胞进行的免疫细胞化学染色显示,经LPS刺激后除细胞核外,胞浆亦明显着色。而且用ELISA法在细胞培养液亦检测到HMGN2。结论本实验成功制备出HMGN2特异多克隆抗体,免疫细胞化学分析初步证明在LPS刺激下HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核,还分布于细胞浆,并可释放到细胞外。