HIF-1基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1活性的亚单位。HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF)依赖性的肿瘤血管形成。本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达。RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降。本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点。     

解甘露醇罗尔斯顿菌金属蛋白酶基因特征分析

目的 检测解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株的金属蛋白酶基因,并分析其编码蛋白结构特征.方法 采用Axygen细菌基因组提取试剂盒提取解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株DNA,建立基于金属蛋白酶基因的PCR检测方法,使用BLAST比对基因序列,使用CDD、MEROPS、SWISS-MODEL、CDTree、TMHMM和SignalP 4.1对编码蛋白进行在线分析.结果 在该解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株中分别检测出M48和S2P-M50家族金属蛋白酶基因RS-MP48和RS-MP50,与已报道的解甘露醇罗尔斯顿菌SN82F48株所携带的基因序列(WP_045785189.1和WP_045786756.1)相似度为100％.生物信息学研究表明,RS-MP48含有1个M48蛋白酶超家族保守功能域和4个跨膜结构,与芽孢杆菌M48肽酶家族、芽孢杆菌锌依赖蛋白酶、铜绿假单胞菌锌依赖蛋白酶同源性最高,相似度均为99％;与链霉菌热休克蛋白和铜绿微囊藻蛋白酶相似度分别为33％和32％;RS-MP50含有2个S2P-M50超家族保守功能域和4个明显的跨膜结构及少量的膜结合区;与解甘露醇罗尔斯顿菌RIP金属蛋白酶RseP同源性最高,相似度为99％,与罗尔斯顿菌属RIP金属蛋白酶RseP和蛋白酶调节因子相似度均为92％,与脑膜炎奈瑟菌和希瓦菌RseA锌金属蛋白降解酶RseP相似度分别为39％和38％.结论 解甘露醇罗尔斯顿菌是引起人类感染的新病原菌,本研究发现该临床株中存在金属蛋白酶基因,其编码蛋白可能是该类细菌潜在的毒力因子.     

伽利略呼吸机电源故障的检修

伽利略呼吸机由HAMILTON MEIDICAL瑞士哈美顿医疗公司生产,是用于新生儿、儿童和成人的功能齐全的ICU呼吸机。现将工作中遇到的该设备电源不能正常工作的故障检修及原理分析介绍如下,以供参考。     

基于高分辨率MRI的正常中国成人杏仁核体积测量

目的 应用高分辨率磁共振和三维体积分析软件(Aquariusws)测量中国正常成人杏仁核的体积.方法 对43例健康成年中国人行大脑T1加权三维磁化强度预备梯度回波序列扫描,应用Aquariusws软件确定和测量杏仁核边界和体积.结果 经Aquariusws软件对高分辨率MRI图像进行三维重建后,能清楚显示杏仁核的边界.杏仁核平均体积:右侧1596.525 mm3 (男1566.773 mm3女1604.877 mm3),左侧1564.318 mm3(男1623.987 mm3,女1545.244 mm3).双侧、男女杏仁核体积无统计学差异(P>0.05).结论 基于高分辨率磁共振图像和三维体积分析软件(Aquariusws)可以动态三维确认杏仁核轮廓,进而准确测定其体积.     

HIV感染者血浆、尿液巨细胞病毒检测的临床分析

目的 分析HIV感染者血浆、尿液中巨细胞病毒检出率的差异性及其临床意义。 方法 对2012年7月~2013年7月间在杭州市西溪医院住院的202例HIV感染者的血浆和尿液标本进行巨细胞病毒核酸检测,分析两种类型的标本检出巨细胞病毒的差异性,同时观察CD4⁺T淋巴细胞计数与巨细胞感染的关系并分析其临床意义。 结果 202份血浆检出巨细胞病毒60例,检出率为29.70%(60/202)。202份尿液检出巨细胞病毒95例,检出率为40.03%(95/202),两种类型标本巨细胞病毒检出率差异有统计学意义(P<0.05)。60例血浆中检出巨细胞病毒标本其CD4⁺T淋巴细胞计数均<250个/微升,其中CD4⁺T淋巴细胞计数在0~100个/微升者35例占58.33%(35/60),在101~250个/微升者25例占41.67%(25/60)。 结论 HIV感染者血浆、尿液巨细胞病毒检测存在差异,血浆巨细胞病毒检测更具有临床意义。外周血CD4⁺T淋巴细胞计数越低更易发生巨细胞病毒感染。     

内毒素对大鼠牙髓组织形成修复性牙本质的影响

目的：探讨局部内毒素刺激对大鼠牙髓形成修复性牙本质的影响。方法：以内毒素注射于火鼠牙阍组织，内f蟮豢试剂盒检测血液中及逆行进入牙髓组织中的内毒素浓度，HE染色观察修复性牙本质形成情况。结果：血液中实验组勺埘照纰间内毒素的含量差别有统计学意义，P〈0．001。牙髓中实验组与阴性对照组，以及与窄白对照组问内毒素的含量麓川仃统计学意义，P〈O．001。HE染色可见注射位点附近修复性牙本质形成明显，髓腔变窄，牙本质小管排列紊乱。结论：内薄素仡一定条件下能刺激夫鼠牙髓组织，使其发生保护性反应，从而促进其矿化作用，加速修复性牙本质形成。     

灭蚊真菌Pythium sp.GY1938“菌丝体-1/4KPYG2凝胶剂”的剂型研制与应用

目的探索灭蚊真菌Pythiumsp.GY1938菌株凝胶剂剂型的制备方案。方法根据蚊虫的变态发育特点和Pythiumsp.GY1938菌株的生物学特性,结合保藏、运输和使用的便捷性,以含海藻糖抗逆保护剂的1/2KPYG2定型固体培养基为载体、以菌丝体为活性物质,加工制成"菌丝体-1/4KPYG2凝胶剂"新剂型,在实验室和模拟野外环境下观察其灭蚊效果。结果在实验室和模拟野外环境,每100ml水体使用2块1.51.5×1.0cm3凝胶剂,7d致倦库蚊幼虫致死率均可达到28%。4～8℃条件下凝胶剂品相稳定,储存6个月药效无明显变化。结论 Pythiumsp.GY1938菌株"菌丝体-1/4KPYG2凝胶剂"具有杀灭蚊幼虫作用。该凝胶剂生产工艺简单,独立包装,贮存方便,使用时不需要专用器械,拆开包装袋直接投放或捏碎后投入水体中,不污染环境,具有较好的应用前景。     

老年脑卒中合并院内获得性肺炎的疗效分析

目的 分析多学科整合治疗老年脑卒中合并院内获得性肺炎(HAP)的疗效.方法 观察组为2010年1月-2012年8月卒中单元收治的85例脑卒中合并HAP的老年患者,进行多学科整合治疗;对照组为同期神经内科收治的80例脑卒中合并HAP老年患者,进行单纯药物治疗,对两组的临床资料进行回顾性分析.结果 治疗后观察组卒中量表(NIHSS)和Barthel Index(BI)评分分别为(8.99±3.25)分和(18.31±2.24)分较对照组疗效明显,脑卒中合并HAP临床特征以中低发热为主,咳嗽、咳痰、呼吸困难、食欲不振、淡漠无力等为主要临床表现,病原学检查以革兰阳性菌多见占65.45％,其次为革兰阴性菌占27.88％;观察组与对照组HAP主要症状消失时间、实验室检查正常时间、胸片正常时间、住院天数,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 多学科整合治疗老年脑卒中合并HAP减少了并发症,缩短住院时间,取得了较明显的治疗效果.     

手足口病病原体实时荧光RT-PCR反应体系的建立与临床应用

目的 建立一种快速、准确、特异件高的方法 检测手足口病病原体.方法 根据引起手足口病常见致病原肠道病毒71(EV71)、柯萨奇病毒A16(CA16)及肠道病毒(EV),设计相应的引物、探针对35例临床诊断的手足口病患儿及20例正常健康婴儿的粪便进行EV、EV71、CA16三种病原体实时荧光RT-PCR检测,同时对55分标本进行EV71病毒培养分离.结果 35例临床诊断手足口病患儿粪便中EV全部阳性,EV71阳性25例,CA16阳性8例,其中3例为EV71、CA16同时阳性,与临床诊断符合率为85.71%,20例健康体检婴儿粪便中EV病毒5例阳性,EV71、CA16均阴性.结论 荧光RT-PCR对手足口病病原体检测准确性高、特异性强,具有快速、廉价等特点,适合于手足口病的早期诊断.     

高糖诱导血管内皮细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的观察高糖对血管内皮细胞表达结缔组织生长因子（connective tissue growth faeotr, CTGF）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（human umibilical vein endotheial cells,HUVECs）,分别在含正常葡萄糖（5．5mM）、高糖（25mM葡萄糖）、25mM甘露醇及高糖加转化生长因子β1（transforming frowth factorβ1,TGFβ1）中和抗体的培养基中培养24、48或72小时,并在相应时间点收集细胞总RNA及总蛋白。分别用半定量RT-PCR及Western Blot方法检测CTGFmRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常葡萄糖培养及25mM甘露醇对照组相比,高糖刺激24小时后,HUVECs的CTGFmRNA及蛋白表达水平均显著增加,并且这种作用持续到48小时。TGFβ1的中和抗体能部分阻断高糖的这种刺激作用。结论高糖能诱导HUVECs表达CTGF,而内皮细胞CTGF的表达增加可能是高糖参与动脉粥样硬化等心血管疾病发生的机制之一。