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31.
人胰腺α-淀粉酶的cDNA克隆和原核表达的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 获得人胰腺α-淀粉酶(AMY2A)基因并进行原核表达。方法 采用基因工程技术,根据人AMY2A基因序列设计并合成特异性引物;从人胰腺组织中提取总RNA,反转录成CDNA第一链;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺AMY2A基因,经BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切、连接并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX-5T-AMY2A重组表达载体,在大肠杆菌BL21中异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达AMY2A蛋白。包涵体经尿素变性、复性及谷胱苷肽琼脂糖柱亲和层析纯化、AMY2A酶活性测定和免疫印迹分析。结果 重组质粒测序和酶切结果显示AMY2A基因已正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在84 000处有一条明显的蛋白表达条带,AMY2A检测具有酶活性,免疫印迹分析表明重组蛋白具有人胰腺淀粉酶抗原性。结论 作者已克隆并在大肠杆菌中初步表达并获得纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-AMY2A融合蛋白。 相似文献
32.
目的克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T-ALT1,并转入大肠杆菌进行表达.SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物.表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1, 重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体.SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性.抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2. 结论重组人ALT1得到高效可溶性表达.用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高. 相似文献
33.
家系1 患儿,男,1岁.面容特殊:斜视,眼眶深陷,睑裂倾斜,跟距过宽.瞳孔偏心靠近虹膜的内缘。眉毛紧皱,嘴向下倾斜:颧骨前突,不能坐立,不能行走,手掌与手指相比过长,指间关节异常。智力发育迟缓,语言发育迟缓最为明显。父母非近亲婚配,结婚3年.孕期无毒物及有害物质接触史,细胞遗传学检查:分别取患儿及其父母外周血行染色体核型分析, 相似文献
34.
35.
例1 患男,1岁。面容特殊。斜视,眼眶深陷。睑裂倾斜,眼距过宽,瞳孔偏心靠近虹膜的内缘。眉毛紧皱。嘴向下倾斜。额骨前突,不能坐立。不能行走,手掌与手指相比过长,指间关节异常。智力发育迟缓,语言发育迟缓最为明显。父母非近亲婚配,结婚3年,孕期无毒物及有害物质接触史。细胞遗传学检查:分别取患儿及其父母外周血行染色体核型分析。 相似文献
36.
肾上腺随白质营养不良(adrenoleukodystmphy,ALD)是一种主要侵犯大脑白质、肾上腺等器官的X-连锁隐性遗传病。根据临床表现和发病时间,可将ALD分成儿童随型、肾上腺脊髓神经病型等7种表型。各型的共同特征是极长链饱和脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFA)在体内蓄积,引起大脑白质脱髓鞘、肾上腺功能不全等病理改变。其致病基因定位于染色体xq28,称ABCD1基因。ALD的病程呈进行性发展,预后不良,尤以儿童大脑型为甚,患者发病后的平均生存时间仅为3年左右。到目前为止,对ALD尚无效果确切的治疗手段,也无法逆转中枢神经系统损害。因此,对ALD携带者所怀胎儿进行产前诊断。防止携带ABCD1突变的婴儿出生,提高人口素质,有重要的意义。我们于2003年和2004年分别对2个ALD家系实施了产前分子诊断。 相似文献
37.
患者 ,女 ,37岁。因被人咬掉鼻子 1h伴疼痛、出血 ,于 2 0 0 0年 1 1月 1 0日急诊入院。约 2 0min后由他人送离体鼻组织来院。检查 :鼻尖、鼻柱、左右各一半鼻翼缺如 ,鼻部皮肤、鼻腔粘膜断裂 ,断缘不整齐 ,断面有活动性出血 ,无异物 ,无明显感染征象 ,鼻背皮肤齿状裂痕。鼻中隔软骨及鼻翼软骨撕断 ,部分裸露。离体鼻组织呈不规则棱形 ,约 1 .5cm× 1 .6cm× 1 .7cm× 1 .9cm ,边缘不整齐 ,与残留鼻创缘吻合 ,断面粉红色 ,皮肤及粘膜色白 ,局部青紫色 ,温度低于正常。鼻腔无脓性分泌物及新生物 ,有新鲜血痂附着 ,通气可。迅速、… 相似文献
38.
目的对3名来自不同家系的肾上腺脑白质营养不良(ALD)携带者所怀胎儿进行产前分子诊断。方法在采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,分别应用变性高效液相色谱和DNA测序方法对3个胎儿的羊水基因组DNA进行分析。结果胎儿1和携带者1的分析结果完全一样,均出现洗脱双峰,并经DNA测序证实,该胎儿为S108X突变携带者;胎儿2、胎儿3和正常对照一致,均为洗脱单峰,经DNA测序证实,这两个胎儿的基因组DNA上均不存在基因突变(R617C突变和1801.02del AG突变)。结论胎儿1带S108X突变,为ALD携带者;胎儿2不带R617C突变,为正常纯合子;胎儿3不带1801—02del AG突变,为正常半合子。 相似文献
39.
目的为了分析10例性腺发育不良患者细胞遗传学和分子遗传学特征。方法采用染色体核型分析和多重PCR技术,扩增Y染色体长臂AZF区域序列标签位点(STS)即AZFa区sY84、sY86,AZFb区sY127、sY134,AZFd区sY152.AZFc区sY254、sY255,Yq12sY160(DYZ1)和短臂sY14(SRY)9个位点。结果1例染色体核型分析为46,X.del(X)(q13)的女性和1例45,X/46,X,min的女性,均未扩增出SRY及Y染色体AZFa、b、c区域位点。1例染色体核型为46,XX男性和1例46,X,-Y,+min的男性患者仅SRY基因扩增阳性,AZFa、b、c区域位点均缺失;2例染色体核型分析为46,XY女性和1例染色体核型分析47,XYY的女性患者不仅SRY基因扩增阳性,而且Y染色体AZFa、b、c区域多个位点扩增阳性。1例染色体核型为46,X,del(Y)(q11)的男性患者,Y染色体AZFb、c区域多个位点的缺失,1例染色体核型为46,X,de1(Y)(q12),Yq12sY160(DYZ1)缺失。结论染色体核型分析和Y染色体微缺失检测是辅助诊断性腺发育不良的重要方法。 相似文献
40.
目的 分析导致无精子因子区域(azoospermia factor,AZF)缺失的Y染色体断裂的特点.方法 在272例无精子症、240例严重少精子症患者进行Y染色体AZF微缺失筛查基础上,对筛查发现大片段缺失的49例患者,选择AZFa、AZFb、AZFc区23个序列标签位点(sequence tagged site,STS),对断裂点进行定位分析.颖有无精子症缺失基因家族(deletedin azoospermia,DAZ)、基因部分拷贝缺失病例进行单核苷酸多态性(single nuecleotide varians,SNV)缺失分析以确定DAZ基因的拷贝数.结果 6例AZFb+C缺失患者,1例为sY98/sY1206缺失,4例为P5/P1远端重组,1例为P4/P1远端重组.3例筛查发现AZFb区缺失患者,1例为P5/P3缺失,2例为P5/P1近端重组,伴有DAZ1、DAZ2拷贝缺失.40例AZFc区全缺失患者,均为b2/b4同源重组.部份AZFb、AZFb+c缺失患者,睾丸穿刺活检发现精子生成减少或精子成熟障碍.结论 对Y染色体AZF大片段缺失断裂点的大致定位有利于判断缺失发生机制,进而分析丢失的生精相关基因拷贝性质与数量,以评价其与生精障碍表型之间的关联. 相似文献