利妥昔单抗或他克莫司联合糖皮质激素治疗特发性膜性肾病的疗效比较

目的比较利妥昔单抗或他克莫司联合糖皮质激素治疗特发性膜性肾病的疗效及安全性。方法选取中间人民解放军总医院肾内科2014年3月至2018年3月分别使用利妥昔单抗联合小剂量激素(利妥昔单抗组)和他克莫司联合小剂量激素(他克莫司组)治疗的特发性膜性肾病患者。观察2组患者在治疗前、治疗1个月、3个月、6个月、12个月的24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、肌酐水平的变化,评估治疗总体有效率,观察不良反应发生情况。结果共纳入研究对象149例,其中利妥昔单抗组62例,他克莫司组87例,2组患者治疗前在年龄、性别、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血肌酐等方面均无显著性差异(P0.05)。治疗12个月后,利妥昔单抗组的总有效率(70.97%)与他克莫司组(64.37%)相比,差异无统计学意义(P0.05),但利妥昔单抗组复发率远低于他克莫司组(P0.01)。2组患者治疗后24 h尿蛋白水平较治疗前均有效降低(P0.01),血清白蛋白水平较治疗前均有所提升(P0.01),且2组对24 h尿蛋白和血清白蛋白水平的改善效果相近,差异无统计学意义(P0.05);而在血肌酐变化方面,利妥昔单抗组患者治疗后较治疗前无显著差异(P0.05),总体肾功能稳定,他克莫司组患者治疗后血肌酐较治疗前有所上升(P0.01),提示出现肾功能损害。在不良反应方面,利妥昔单抗组主要表现为感染、输注反应,他克莫司组则表现为感染、肝肾功能损害、血糖升高、胃肠道反应、脱发等,利妥昔单抗组的不良反应类型和出现不良反应的人数更少。结论利妥昔单抗与他克莫司均能有效缓解特发性膜性肾病,降低蛋白尿,但与他克莫司比较,利妥昔单抗具有不良反应低、复发率低、更经济便利的优点,有望成为一线治疗药物。     

人钠/二羧基转运蛋白2融合蛋白载体的构建及其原核表达

目的：观测和鉴定人钠／二羧基转运蛋白2(hSDCT2)在大肠杆菌中的表达，并分离、纯化其蛋白产物。方法：应用：DNA重组技术，构建重组表达质粒pGEX-hSDCT2；IPTG诱导其表达。采用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B亲和层析纯化GST-hSDCT2，经Factor Xa酶切和二次亲和层析后，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blotting进行鉴定。结果：成功构建hSDCT2基因融合蛋白载体，SDS-PAGE及Western Blotting显示GST-hSDCT2融合蛋白表达于原核细胞，蛋白产量约占菌体总蛋白量的25％。经酶切及二次纯化后，获得纯化的hSDCT2蛋白。结论：人钠／二羧基转运蛋白2可在大肠杆菌中稳定表达。     

GF-β1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响

目的 研究转化生长因子-β 1 （transforming growth factor beta-1 ,TGF-β 1 ） 诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F） 发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9 及其抑制因子TIMP-1 表达的变化及对分泌纤维连接蛋白（fibronectin,FN） 的影响。 方法 以不同浓度hTGF-β 1 （0 ng/ml 、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml） 刺激NRK-49F 细胞48 h,分别应用ELISA法检测细胞上清FN 的浓度,免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin 的表达,Western blot、Northern blotting 方法检测MMP-9、TIMP-1 的基因及蛋白质表达。 结果 0.5 ～ 10 ng/ml TGF- β 1 随刺激浓度增高NRK-49F 细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin 明显减少,细胞上清中FN 的含量显著增加（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;同时,TGF-β 1 浓度＞ 2 ng/ml 时显著上调TIMP-1 mRNA 及蛋白表达水平（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;以上效应均呈浓度依赖性,但对细胞MMP-9 mRNA 及蛋白表达无明显影响（P ＞ 0.05）。 结论 TGF- β 1 能诱导肾间质成纤维细胞活化,使FN 的分泌增多,该作用可能与TGF-β 1 上调了TIMP-1 基因及蛋白质水平,进而减少细胞外基质（extracellular matrix,ECM） 的降解有关。     

不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响

目的研究不同取材方式对透射电镜肾脏培养细胞样品超微结构的影响。 方法以大鼠肾小球系膜细胞(RMC)和人肾小管上皮细胞株(HK-2)为实验对象,采取5种不同的取材方式,分别为：刮取-离心-固定组、刮取-固定-离心组、固定-刮取-离心组、消化-离心-固定组、消化-固定-离心组。电镜下比较不同取材方式样品细胞超微结构的形态变化。 结果透射电镜下观察,消化-固定-离心组细胞形态呈圆形或近圆形,超微结构保存良好,易于观察研究;其次为固定-刮取-离心组,细胞呈长梭形,不利于低倍镜下观察,但超微结构保存良好;再次为刮取-固定-离心组,超微结构保存一般;细胞超微结构保存最差的为消化-离心-固定组和刮取-离心-固定组。 结论消化-固定-离心可能为透射电镜肾脏贴壁培养细胞样本的最佳取材方式。     

白果注射液注射足三里对卵蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠的作用

[目的]检验白果注射液注射足三里对哮喘的治疗作用.[方法]用白果注射液对哮喘小鼠模型在足三里注射,检测肺质量白细胞.嗜红细胞以及IgE、白细胞介素（IL-4、IL-5、IL-13）等指标.[结果]白果注射液注射足三里显著降低哮喘小鼠模型肺质量,同时有效降低肺组织嗜红细胞和白细胞总数.降低血清BALF中IgE、IL-4、IL-5及IL-1 3的水平.[结论]实验结果提示白果注射液注射足三里时哮喘有治疗作用,可考虑临床应用.     

增龄对纤维蛋白急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1表达的影响

目的研究增龄对纤维蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1 (MCP-1)表达的影响,探讨老年大鼠对炎性刺激易感的可能机制。方法青年及老年大鼠均根据腹腔注射不同的药物随机分为4组:对照组、脂多糖组、氨甲环酸组、肝素组。应用免疫组化分析纤维蛋白沉积;应用Western blot和Northern blot方法分别检测肺组织MCP-1蛋白质和基因表达。结果(1)青年和老年对照组大鼠肺组织内均无纤维蛋白沉积,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组均比青年大鼠相同干预组纤维蛋白沉积明显,差别均有统计学意义(18．5％±3．1％对12．3％±2．1％,32．5％±5．4％对24．1％±4．5％和20．8％±3．6％对12．6％±1．8％,均为P<0．05);(2)青年和老年对照组大鼠肺组织内几乎无MCP-1表达,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组的MCP-1表达均较青年大鼠相同干预组上调,差异有统计学意义(0．40±0．02对0．20±0．03,0．60±0．05对0．25±0．04和0．30±0．01对0．20±0．04,均为P<0．05);(3)经纤维蛋白沉积增加量校正后,老年氨甲环酸组大鼠肺组织MCP-1的表达量仍显著高于青年大鼠氨甲环酸组(P<0．05)。结论纤维蛋白可上调急性肺损伤肺组织MCP-1基因及蛋白质表达,促进肺组织炎症反应;增龄能够促进肺组织纤维蛋白沉积,增强其上调肺组织MCP-1表达的作用。     

人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析

目的 获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法 从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果 成功扩增出980 bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论 成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。     

不同水平抑制肾素-血管紧张素系统对大鼠肾脏增龄性改变的影响

目的 研究长期抑制RAS对老龄大鼠肾脏的保护作用。方法 观察福辛普利纳及缬沙坦对老年大鼠肾脏病理、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)及转化生长因子(TGFβ—1)基因表达的影响。结果 两组治疗均可降低老年大鼠的尿蛋白，减少肾小球细胞外基质(ECM)面积、减轻肾小球硬化及肾小管间质损害；下调肾脏FN、PAI-1的基因表达，对TGFβ—1 mRNA的表达无影响，福辛普利纳与缬沙坦治疗效果无明显差异。结论 长期抑制RAS可减轻老年肾损害，血管紧张素转换酶抑制剂(ACEl)与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ATlRA)具有相同的作用。     

miR-34a调控高糖环境中HK-2细胞增殖作用的初步研究

目的探讨miR-34a对高糖环境中HK-2细胞增殖作用的影响。方法以miR-34a模拟物和miR-34a抑制剂分别转染HK-2细胞,定量PCR检测miR-34a的表达变化,MTT检测细胞增殖活性;Western印迹检测周期相关蛋白CyclinD1和CyclinE的表达变化。生物信息学分析miR-34a的靶基因,对其中的增殖相关转录因子E2F3进行双荧光素酶验证。结果 miR-34a模拟物组miR-34a表达显著上调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组miR-34a显著下调（P〈0.05）。与对照组相比,miR-34a模拟物显著抑制高糖环境中HK-2细胞的增殖作用（P〈0.05）,CyclinD1和CyclinE表达下调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组显著上调高糖环境中HK-2细胞的增殖作用,CyclinD1和CyclinE表达上调（P〈0.05）。TargetScan在线分析软件显示,增殖相关转录因子E2F3可能是miR-34a潜在的靶基因,双荧光素酶分析结果显示E2F3是miR-34a的直接靶基因。结论 miR-34a可以调控高糖环境中HK-2的细胞增殖,其机制可能是通过直接抑制E2F3基因的表达而实现。