乳腺纤维囊性病性激素周期节律的变化

测定133例乳腺纤维囊性病(FCD)和17例正常人卵泡期、排卵期、黄体期、月经前期血和尿雌二醇(E_2)和孕酮(P)。根据性激素分泌类型不同分为5型:A型54例,E_2和P分泌峰提前出现,P分泌时相延长,E_2在排卵期分泌显著降低;B型16例,P分泌正常。但排卵期E_2浓变显著降低;C型16例,排卯期E_2分泌降低,黄体期出现P分泌峰,但其分泌延迟至月经前期,同时伴有E_2浓度增加;D型41例,虽然排卵期E_2和黄体期P分泌正常,但E_2和P分泌延迟消失,在月经前期均未能回复到正常;E型6例,没有P分泌,血尿E_2含量在月经周期中均处于低水平。对各型FCD患者与正常人血、尿E_2平均数进行比较,表明FCD的共同特点是卵泡期和月经前期血清E_2浓度增加和排卵期E_2浓度降低。     

姜黄素的微生物转化产物体外抗低密度脂蛋白氧化作用

目的 利用红曲霉菌对姜黄素进行微生物转化,研究姜黄素微生物转化总产物对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用,为进一步筛选新型高效的姜黄素类抗动脉硬化新药奠定基础.方法 利用红曲霉菌固体发酵法对姜黄素进行微生物转化,设立只加姜黄素不接种菌体的底物对照和只接种菌体不加入姜黄素的菌体对照,乙酸乙酯提取转化产物.从血浆中分离低密度脂蛋白,建立低密度脂蛋白在Cu2+诱导下的无细胞氧化体系和巨噬细胞氧化体系,姜黄素转化产物进行氧化干预,以低密度脂蛋白在琼脂糖凝胶电泳的迁移距离及硫代巴比妥酸反应物含量作为低密度脂蛋白氧化的指标.结果 姜黄素转化总产物在4～500 mg/L浓度范围内(相当于含姜黄素0.04～5 mg/L),能显著抑制Cu2+诱导下的低密度脂蛋白氧化,与菌体对照组相比差异有显著性(P<0.001);与底物对照比较在20 mg/L和4 mg/L浓度作用下差异有显著性(P<0.001).转化总产物作用小鼠巨噬细胞24 h能显著抑制低密度脂蛋白的氧化,其迁移距离比氧化对照组明显缩短(P<0.001);姜黄素对照组在5 mg/L时有明显的抑制作用;底物对照组和菌体对照组迁移距离与氧化对照组差异无显著性(P>0.05),基本无抑制作用.转化总产物在4～500 mg/L浓度范围内,能显著抑制小鼠巨噬细胞TBARS的产生,其抑制作用随着剂量的增大而增强.而底物对照组只在浓度为500 mg/L和100 mg/L(相当于含姜黄素5 mg/L和1 mg/L)、姜黄素对照组在浓度为5 mg/L和1mg/L时有一定的抑制,菌体对照组则无抑制作用.转化总产物对巨噬细胞氧化体系低密度脂蛋白氧化的抑制作用,与底物对照组、菌体对照组相比差异有显著性(P<0.001).结论 姜黄素经红曲霉菌转化后,对低密度脂蛋白的抗氧化作用显著增强,有望获得姜黄素类高效抗动脉硬化的新型化合物.     

IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞CD95表达及其凋亡率影响的实验研究

探讨IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞(CTL)CD95表达及其凋亡率的影响。分离 26例乙型肝炎患者(其中慢性乙型肝炎16例,慢性重型乙型肝炎10例)和20例健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC),在IFNα-2a作用前后通过流式细胞仪分别检测PBMC中CTL CD95的表达及其凋亡率。结果表明,乙型肝炎患者外周血CTL存在活化诱导的细胞死亡(AICD)现象,而IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血CTL CD95表达及 CTL凋亡率并无影响。     

低密度脂蛋白受体抑制剂对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

应用低密度脂蛋白受体抑制剂乳酸肝褐质和受体结合蛋白经刺猬腋下静脉注入，２ｍｉｎ后注射１２５Ⅰ－低密度脂蛋白或１２５Ⅰ－脂蛋白（３），６ｈ后处死，测定血、肝、肾、脾、胆汁和肾上腺的放射活性。实验发现：乳酸肝褐质和受体结合蛋白均能抑制低密度脂蛋白受体活性，使各组织摄取低密度脂蛋白分别降低１５％～８６％以上，但乳酸肝褐质和全体结合蛋白对脂蛋白（ａ）的组织摄取不但无抑制作用，反而能使脂蛋白（ａ）进入组织量增加，激活率分别达４０％～１２６％。实验结果说明：脂蛋白（ａ）虽然与低密度脂蛋白结构相似，含有７０％载脂蛋白Ｂ１００，但由于与载脂蛋白（ａ）以二硫键的形式连接，改变了空间结构，失去了与低密度脂蛋白受体结合的能力，并且推测乳酸肝褐质和受体结合蛋白在抑制低密度脂蛋白受体的同时，可能激活了细胞膜的其它机制，从而利于脂蛋白（ａ）进入细胞内。     

川贝母转录组中SSR位点信息分析

目的:通过分析川贝母转录组简单重复序列标记(SSR)信息,为其分子标记辅助育种及种质资源保护提供技术支撑。方法:采用Illumina Hi Seq2000技术平台对川贝母鳞茎及叶片进行高通量测序,采用MISA对Unigene进行SSR位点分析。结果:从转录组得到44 973条,Unigene中共检测到3 817个SSR位点,分布于3 367条Unigene序列中,出现频率为8.49%,平均每10.37 kb序列出现1个SSR位点。其中重复类型最多的为三核苷酸和二核苷酸,所占比分别为56.51%和27.06%。三核苷酸重复基序CCG/CGG所占比率最大,其次为二核苷酸重复基序AG/CT。6种SSR重复类型的重复次数主要集中于4~12次,24.55%SSR的序列长度20 bp。结论:川贝母SSR位点出现频率较高,类型丰富,多态性较高,为其遗传多样性分析和遗传图谱构建及分子辅助育种提供了丰富的候选分子标记。     

药用植物DNA标记辅助育种(一):三七抗病品种选育研究

药用植物DNA标记辅助育种以DNA多态性为基础,依据分子杂交、聚合酶链式反应、高通量测序等技术,筛选与高产、优质、抗逆等表型关联的DNA片段作为标记,辅助新品种的选育。该研究采用DNA标记辅助育种结合系统选育的技术,选育首个三七抗病新品种"苗乡抗七1号"。结果表明,基于RAD-Seq技术检测出抗病品种包含12个特异SNP位点,经验证record_519688位点与三七抗根腐病相关,包含此位点的基因片段可作为抗病品种的遗传标记辅助三七系统选育;与常规栽培种相比,抗病品种种苗根腐病及锈腐病的发病率分别下降83.6%,71.8%;二年生及三年生三七根腐病的发病率分别下降43.6%,62.9%。此外,依据与抗病关联的SNP筛选三七潜在的抗病群体,该模式扩大目标群体并提高选育效率。药用植物DNA标记辅助育种将加快药用植物新品种选育及推广的进程,保障中药材产业健康发展。     

姜黄素及其衍生物抑制肿瘤作用的实验研究

目的:观察姜黄素及其衍生物抑制肿瘤作用.方法:中药姜黄经85%酒精渗漉,石油醚脱脂,氯仿处理后获得纯度为85%的总姜黄素,进一步用硅胶薄层层析法分离得到姜黄素、一脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素,应用上述三种姜黄提取物观察对人胃癌细胞SGC-7901、人脐静脉内皮细胞ECV-304和牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响,观察对人内皮细胞迁移的影响.采用灌胃和腹腔注射两种方法对姜黄素和总姜黄素对小鼠肉瘤抑瘤作用进行观察.结果:姜黄素及其衍生物对牛主动脉平滑肌、人脐静脉内皮细胞ECV-304和人胃癌细胞SGC-7901增殖有不同程度的抑制作用,对内皮细胞的抑制率明显大于对肿瘤细胞和平滑肌细胞的抑制率;姜黄素及其衍生物能显著抑制牛血清培养液中人脐静脉内皮细胞ECV-304的迁移,其迁移抑制程度随浓度增加而增加;姜黄素和总姜黄素腹腔注射抑瘤作用大于灌胃给药,而姜黄素单体的抑瘤作用又大于总姜黄素的抑瘤作用.结论:姜黄素及其衍生物具有抑制内皮细胞迁移和特异性地抑制内皮细胞增殖作用,能够起到抑制血管生成的作用,具有抗肿瘤和抗动脉粥样硬化作用.     

Taqman实时荧光定量PCR快速检测白斑综合症病毒的方法研究

目的：建立一种快速、特异、灵敏的实时荧光定量PCR方法用于检测白斑综合病毒DNA，为控制对虾白斑综合症提供科学依据。方法：根据GenBank登录的白斑综合病毒株序列，使用生物学软件进行序列对比，在白斑综合症病毒保守区序列设计引物和Tagman探针并进行筛选。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化，提高了该方法的特异性、灵敏度和重现性等，并与标准方法(核酸探针点杂交)进行比对，对现场32份虾样进行了检测。结果：Tagman实时荧光定量PCR与标准方法的特异性符合率为100％，灵敏度超过标准方法的10000-100000倍，检测时间为标准方法的1／24，重现性良好(s=0．1-0．49，CV=0．78％-3．72％)，并能准确定量。结论：本研究建立的Taqman实时荧光定量PCR方法用于白斑综合症病毒检测具有特异、灵敏、快速、定量、重现性好等优点。     

丹参酮对爪蟾卵母细胞外源清道夫受体-AⅠ基因表达的影响

 目的从基因调控水平探讨丹参酮对清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)基因表达的影响以及抗动脉粥样硬化的作用机制。方法将人SR-AⅠ基因构建在其调控元件SRad-SRap的下游,并经显微核注射导入爪蟾卵母细胞,建立SRad-SRap元件调控的SR- AⅠ表达系统；氧化低密度脂蛋白(OXLDL)刺激培养牛主动脉平滑肌细胞,制备平滑肌细胞条件培养液(SCM)；分别用SCM和含有丹参酮的SCM培养注射后的卵母细胞,用荧光标记配体法和ABC-Elisa法定性、定量检测卵母细胞膜上SR-AⅠ的表达。结果丹参酮可以抑制卵母细胞膜SR-AⅠ表达,且有量效关系。结论OXLDL可通过诱导平滑肌细胞产生相关因子,经SRad-SRap调控途径的作用上调SR-AⅠ的表达；丹参酮可以阻止SR-AⅠ的过量表达,可能是治疗As的作用机制之一。     

血府逐瘀汤对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响

目的为探讨血府逐瘀汤对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响。方法应用培养的乳鼠心肌细胞造成缺血再灌注损伤的动物模型,观察心肌细胞中超氧化物岐化酶(SOD)的水平,推断细胞内活性氧的生成量;观察培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性改变以判断细胞损伤情况;并进行DNA琼脂糖凝胶电泳及末端脱氧核苷酸介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL),以判断细胞死亡类型及程度。结果血府逐瘀汤可显著升高缺血再灌注时SOD的水平,显著降低LDH的水平。DNA电泳图谱表明:血府逐瘀汤可使DNA的拖尾基本消失;TUNEL显示血府逐瘀汤可显著减少缺血再灌注所致的心肌细胞死亡。结论血府逐瘀汤有保护缺血再灌注时心肌细胞免于死亡之功效。