黄芪种子中总黄酮、总蛋白质和氨基酸的含量测定

目的检测黄芪种子中总黄酮、总蛋白质及氨基酸的含量,为开发利用黄芪种子资源提供依据。方法将黄芪种子用适量石油醚脱脂后,以80％的乙醇为提取溶剂,采用索氏提取法从黄芪种子中提取总黄酮,以芦丁为对照品,采用比色法测定黄芪种子中总黄酮的含量;按照中华人民共和国国家标准（GB5009．5—2010）法测定黄芪种子中总蛋白质含量;按照中华人民共和国国家标准（GB／T5009．124—2003）法狈4定黄芪种子中所含氨基酸的种类及含量。结果黄芪种子中总黄酮的含量为5．168mg·g-1,总蛋白质的含量为41．78％;黄芪种子中含有16种不同的氨基酸,分别是天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸,其总含量为36．15％。结论黄芪种子中总黄酮、蛋白质及氨基酸含量较高,具有良好的开发利用前景。     

补中益气汤对脾气虚证模型大鼠手术切口肌肉组织炎症反应和肉芽组织增生的影响

目的观察补中益气汤对脾气虚证大鼠手术切口愈合的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、脾气虚模型组、补中益气汤组,每组20只。除正常组外其余各组采用苦寒泻下法制备脾气虚动物模型,各组造模第19d于背部做长约4cm并平行脊柱的切口,补中益气汤组手术当天大鼠每日灌服7g/kg的补中益气汤水煎剂;脾气虚模型组和正常组大鼠每日给予等体积蒸馏水灌胃。各组分别于术后3d、7d各处死10只大鼠,取距手术切口两侧肌肉组织行HE染色,光镜下观察手术切口处炎症反应和肉芽组织增生情况,高倍镜下对切口肌肉组织成纤维细胞进行计数。结果补中益气汤组术后7d切口处可见新生肉芽组织,其间有大量新生血管,并有巨噬细胞、淋巴细胞浸润。与正常组术后3d、7d比较,脾气虚模型组成纤维细胞数量显著降低(P0.01);与模型组术后3d、7d比较,补中益气汤组术后同时间点的成纤维细胞数量显著升高(P0.05或P0.01)。结论补中益气汤通过改善手术切口局部肌肉组织炎症反应和肉芽组织增生情况,可促进切口愈合。     

骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎软骨细胞凋亡及胞外基质降解的影响

目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡及胞外基质降解作用的研究,探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法：选用60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏、骨膏、灵膏、塞来昔布、模型及正常组6组,每组10只,采用冷固法建立骨关节炎模型,造模成功后,骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41 mL·kg^-1·d^-1（相当于生药量33.31 g·kg^-1）灌胃,塞来昔布20.83 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常、模型组给予等量生理盐水灌胃,给药10周后,取大鼠膝关节软骨组织,分别以苏木精-伊红（HE）、番红-固绿（SA/FG）、番红-阿尔辛蓝（SA/AB）进行组织病理观察,根据改良的Mankin关节软骨病理评分标准进行分级评分,采用Western blot法检测基因153（CHOP/GADD153）蛋白的表达,通过荧光定量PCR检测软骨细胞B细胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,基质金属蛋白酶-3（MMP-3）,基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达。结果：与正常组比较模型组能显著减低Bcl-2,TIMP-1 mRNA表达（P<0.01）及增加Bax,MMP-3 mRNA表达（P<0.01）。与模型组相比骨灵膏能明显下调ERS相关CHOP/GADD153蛋白的生成（P<0.01）、促进抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达及降低促凋亡基因BaxmRNA表达（P<0.01）,进而上调Bcl-2/bax,抑制软骨细胞的异常凋亡;同时,骨灵膏较模型组能显著降低MMP-3 mRNA的表达（P<0.01）、升高TIMP-1 mRNA的表达（P<0.01）,降低MMP-3 mRNA/TIMP-1 mRNA。结论：骨灵膏可能通过降低ERS途径相关蛋白GADD153的异常生成,进一步调控相关凋亡靶基因的表达而抑制软骨细胞的异常凋亡和阻止细胞外基质异常降解而阻止OA关节软骨退行性变,保护了关节软骨,其作用明显优于其拆方制剂骨膏、灵膏。     

五子衍宗丸对ATRA诱导的神经管畸形防治作用初探

目的初步研究五子衍宗丸对全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导的神经管畸形(neural tube defects,NTDs)的防治作用,并筛选出五子衍宗丸防治NTDs的最佳给药方式。方法 BALB/c雄鼠和雌鼠以1∶2比例合笼,有阴栓者为孕鼠。将110只孕鼠随机分为正常组、模型组、五子衍宗丸先给组、五子衍宗丸和ATRA同时干预组、五子衍宗丸后给组,后3组又各分为五子衍宗丸高(4.20 g/kg)、中(2.10 g/kg)、低(1.05 g/kg)剂量3个亚组。孕11 d时处死各组孕鼠,解剖取出子宫,显微镜下分离胚胎,光镜鉴定神经管畸形,计算发生率。结果与正常组比较,除五子衍宗丸高剂量先给组的差异无统计学意义(P>0.05),其余各组均有统计学差异(P<0.05)。与模型组比较,五子衍宗丸中、高剂量先给组,五子衍宗丸中、高剂量和ATRA同时干预组神经管畸形发生率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);但是五子衍宗丸中、高剂量后给组和五子衍宗丸低剂量各组神经管畸形发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。分别与五子衍宗丸中、高剂量和ATRA同时干预组比较,五子衍宗丸中、高剂量先给组神经管畸形发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。分别与五子衍宗丸中剂量先给、同时给予组比较,五子衍宗丸高剂量先给、同时给予组神经管畸形发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论五子衍宗丸对ATRA诱导的神经管畸形有防治作用;本实验中4.20 g/kg五子衍宗丸预先给药是防治神经管畸形的最佳给药方式。     

Fasudil联合骨髓源神经干细胞对EAE小鼠的神经保护作用

目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)联合骨髓源神经干细胞(bone marrow-derived neural stem cells,BM-NSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经保护作用。方法:32只雌性C57BL/6小鼠(8~10周龄),用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫,制备EAE,随机分为对照(dd H_2O)组、fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组,并分别给予相应处理。免疫后检测小鼠临床症状和相关神经营养因子的表达,Image-Pro Plus 6.0软件进行阳性细胞计数,Graph Pad Prism 5软件统计分析。结果:与dd H_2O组比较,fasudil+BM-NSCs处理组明显延迟小鼠的平均起病时间,降低最高临床评分,并缓解EAE小鼠的临床症状;fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组中脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养因子3和睫状神经营养因子阳性细胞数均有不同程度的增加,其中,fasudil+BM-NSCs组上述神经营养因子的表达明显多于dd H_2O组、fasudil组和BM-NSCs组(P0.01)。结论:Fasudil联合BM-NSCs通过协同和叠加效应促进神经营养因子表达,改善中枢神经系统微环境,发挥神经保护作用,从而缓解EAE的临床症状。     

归脾汤对雷公藤醇提物致肝损伤大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性的影响

目的:建立一个快速、准确的测定大鼠肝微粒体中CYP3A4酶活性的HPLC,研究雷公藤醇提物对肝损伤大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性的影响,进而探讨归脾汤对其保护机制。方法:50只大鼠随机分为正常组、模型组、归脾汤组、P450诱导组、P450抑制组。正常组、模型组灌服生理盐水,归脾汤组灌服归脾汤(9g·kg-1),P450诱导组、P450抑制组分别腹腔注射地塞米松(100mg·kg-1)和酮康唑(80mg·kg-1),连续ig 4d后,再以雷公藤醇提物(3.25mg·kg-1)ig 3d造模。选用HPLC以咪达唑仑为探针药物,检测各组大鼠肝微粒体中CYP3A4酶活性。结果:在所建立的HPLC条件下,咪达唑仑的出峰时间在8.960min,能够完全分离,且无其他生物基质峰干扰;线性范围是0.25~20μmol·L-1(r=0.9999),符合检测要求,方法可靠。结果显示,与正常组比较,模型组大鼠CYP3A4活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,归脾汤组、CYP450诱导组大鼠CYP3A4活性亦明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);归脾汤组与CYP450诱导组之间比较,大鼠CYP3A4活性差异不明显,无统计学意义。结论:本方法能够对CYP3A4活性进行准确评价,雷公藤对大鼠肝微粒体CYP3A4酶活性有一定的抑制作用,归脾汤可能通过诱导CYP3A4活性而降低雷公藤的毒性从而发挥对肝脏的保护作用。     

法舒地尔(Fasudil)抑制脂多糖诱导的小鼠星形胶质细胞活化和炎性反应及其机制

目的探讨法舒地尔(Fasudil)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞活化和炎症反应及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞分为PBS对照组、1μg/m L LPS刺激组、1μg/m L LPS联合15μg/m L盐酸法舒地尔处理组,Griess法检测培养细胞上清液一氧化氮(NO)的水平,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10和IL-4的水平,免疫荧光细胞化学染色检测星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及TLR4的表达,Western blot法检测GFAP、TLR4和磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白水平。结果与PBS组比较,LPS组NO、TNF-α和IL-6水平显著升高,IL-10和IL-4水平降低;法舒地尔能抑制LPS诱导的NO、TNF-α和IL-6的分泌,增加IL-10和IL-4的分泌。法舒地尔处理组星形胶质细胞GFAP表达显著降低,同时TLR4和NF-κB蛋白的水平也降低。结论法舒地尔阻断TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化及炎性反应。     

空心钉治疗股骨颈骨折230例预后影响因素分析

目的 分析影响股骨颈骨折中空加压螺纹钉内固定术后股骨头缺血坏死及晚期塌陷的相关因素. 方法 对我院收治的230例股骨颈骨折行中空加压螺纹钉治疗患者的临床资料进行回顾性分析,应用秩和检验方法分别对患者年龄、性别、骨折类型、复位方式、骨折复位情况、受伤至手术时间等6种因素对于股骨头缺血坏死发生的影响进行统计分析. 结果 230例患者中58例发生股骨头缺血坏死或晚期塌陷,总坏死或晚期塌陷率25.2%.Logistic多因素回归结果显示,Garden指数、骨折类型、手术时间与复位方式,其方程分类能力依次为75.00%、77.40%、76.50%与77.00%,总回归系数为7.738,方程有效性经χ^2检验,χ^2=67.560,P=7.43×10^-14.影响股骨颈骨折后股骨头缺血坏死及晚期塌陷的相关因素和顺序依次为骨折移位程度、骨折复位质量、受伤至手术的时间、复位方式、患者年龄. 结论 骨折移位程度是影响预后最为关键的因素.骨折复位质量及受伤至手术的时间明显影响预后.