激光扫描共聚焦显微镜在国内脑胶质瘤研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)在形态、荧光定位、定量分析测定以及功能作用的研究中都是强有力的辅助工具,现已广泛应用于生物医学研究的各个领域.对国内LSCM在脑胶质瘤研究中的应用进行了综述.     

脑胶质瘤中端粒酶活性及P-gp糖蛋白表达的相关性

目的 :观察不同恶性级别脑胶质瘤中端粒酶活性及P gp糖蛋白表达的相关性。 方法 :采集手术中切除的不同级别脑新鲜胶质瘤标本 2 6例 ,脑外伤内减压脑组织 8例 ,用TRAP法及免疫荧光染色流式细胞仪法检测不同级别脑胶质瘤端粒酶活性以及P gp糖蛋白表达。结果 :端粒酶活性阳性表达率为 88.5 % ,P gp糖蛋白阳性表达率为 6 5 .4 % ;端粒酶活性阳性病例中 ,P gp糖蛋白阳性表达率 6 9.6 % (16 / 2 3) ,端粒酶活性阴性病例中P gp糖蛋白阳性表达率 33.3% (1/ 3) ,两者差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。对照组脑组织端粒酶活性及P gp糖蛋白阳性表达均为阴性。结论 :脑胶质瘤中 ,端粒酶活性和P gp糖蛋白阳性表达具有相关性 ,可将二者结合起来评估脑胶质瘤恶性程度和预测化疗效果。     

脑胶质瘤动物模型中血脑屏障紧密连接的变化

目的 探讨脑胶质瘤对血脑屏障内皮细胞间紧密连接的影响及其分子机制. 方法 60只Wistar大鼠采用随机数字表法分为正常组(n=30)和脑肿瘤组(n=30),脑肿瘤组按常规方法 制作C6脑胶质瘤模型,造模后第21天行MRI检查后,取正常脑组织、肿瘤中心、肿瘤边缘及肿瘤远隔部位(边缘外2mm以上)组织,采用透射电镜观察两组大鼠血脑屏障紧密连接的超微结构特征,应用免疫组织化学染色和RT-PCR分别检测脑组织中紧密连接蛋白Claudia-5和Claudin-5 mRNA表达的变化. 结果 C6肿瘤细胞接种21 d后,MRI可见大鼠右脑形成肿瘤.在透射电镜下,正常脑组织微血管相邻内皮细胞间可见连续条带状的紧密连接,细胞间未见裂隙;在肿瘤中心组织,仅有22.23%微血管相邻内皮细胞间可见条带状紧密连接.其余内皮细胞间可见明显裂隙.部分内皮细胞间连接为缝隙连接;在肿瘤边缘组织中,有57.15%微血管内皮细胞间存在紧密连接,其余内皮细胞间局部可见裂隙.部分内皮细胞间可见缝隙连接.免疫组化染色显示正常脑组织微血管内皮细胞Claudin-5呈强阳性表达;肿瘤中心组织微血管内皮细胞Claudia-5表达呈阴性;肿瘤边缘微血管内皮细胞Claudin-5呈弱阳性表达.RT-PCR结果 示肿瘤中心Claudia-5 mRNA表达较肿瘤边缘、肿瘤远隔部位、正常组脑组织降低,差异均有统计学意义(P均<0.05). 结论 在胶质瘤的发生、发展过程中,胶质瘤细胞可以导致血脑屏障内皮细胞紧密连接蛋白Claudia-5的表达下降及血脑屏障紧密连接结构的破坏.     

脑皮层创伤灶注射法移植神经干细胞实验研究

目的 观察食蟹猴自体骨髓源神经干细胞移植到大脑皮层创伤灶内的存活、生长情况.方法 取骨髓分离、纯化骨髓基质细胞,培养诱导成神经干细胞,nestin染色表达阳性后再加入细胞标记物BrdU进行共培养7d待移植用.移植前将BrdU标记的神经干细胞收集、离心,制成干细胞悬液,要求活细胞＞80%.食蟹猴在采用Allen's打击法制作皮层创伤灶后,分即时移植(术后即在创伤灶注入,n=3)和延迟移植组(术后30 d在创伤灶注入,n=3),用微量注射针将干细胞悬液注入到猴脑皮质损伤灶.同时设置对照组(n=1),在动物的左侧皮层制作创伤灶并按上述方法注射含同样浓度BrdU的神经干细胞培养液0.5 mL,右侧皮层注入干细胞悬液.移植后1、3、6个月即时移植组、延迟移植组各灌杀1只食蟹猴,移植后6月灌杀对照组食蟹猴,做移植区组织切片染色检查.结果 即时移植组和延迟移植组都可观察到脑皮层创伤灶内有棕褐色的BrdU标记阳性细胞,而对照组组织切片中则未见BrdU阳性表达细胞.移植后BrdU阳性表达细胞早期呈簇状分布,随后散在分布,6个月后细胞形态多样.移植后6个月在移植区邻近的脑白质内也可观察到有BrdU阳性表达的细胞.结论 移植的骨髓源性神经干细胞在脑皮层创伤灶内有存活并可向邻近区域迁移.     

头部电击伤九例

1995年 10月至 1999年 12月收治 9例电击造成头部损伤患者。临床资料　本组男 7例 ,女 2例 ;年龄 16～ 39岁。高压电击伤 7例 ,雷电击伤 2例。ＧＣＳ评分 3～ 8分 3例 ,9～ 12分 6例。ＣＴ检查 :脑挫裂伤 3例 ,颅内血肿 1例 ,脑肿胀 6例。治疗 :清创良好的中小创面用转移皮瓣覆盖创面 ,较大创面并有颅骨烧伤的创面早期坏死范围尚不明确 ,创面消毒后用无菌敷料包扎 ,分次清创 ,肉芽生长后以转移皮瓣或肌皮瓣覆盖创面。有血肿者开颅清除血肿。结果 :治愈 5例 ,死亡 4例 ,2例死于晚期脑疝 ,2例死于颅内感染讨论　 (1)致伤机制 :包括电击致心跳…     

脑损伤早期脑皮质神经细胞膜5-HT受体活性变化及其意义

目的探讨脑损伤早期脑皮质神经细胞膜5-HT受体活性变化规律及其对外伤性脑水肿的影响。方法采用放射配基分析方法检测脑损伤早期不同时间的脑皮质神经细胞膜5-HT受体活性,应用干湿重法检测同时限脑组织水含量。结果脑损伤后0.5h脑皮质神经细胞膜5-HT受体显著增加,伤后24h降至最低,48h仍未恢复正常,同时限的脑水含量明显增加。结论脑损伤早期脑皮质神经细胞膜5-HT受体活性变化是外伤性脑水肿发生发展的重要因素。     

光动力学手段检测和介入在脑肿瘤治疗中的价值

目的：在多种肿瘤治疗中应用光动力学检测和治疗技术取得了良好的效果。在神经外科领域，人们对光动力治疗脑肿瘤也进行了一些有益的尝试：虽然许多临床双盲实验的病例数还未达到统计意义，但近年国际上关于此方面研究较多，并有一定进展。关文章，检索词为photodynamic detection,photodynamic therapy和brain tumor，glioma，mallgnant，apoptosis，oxygenation分别组合进行检索，限定语言种类为英文。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库2002—01／2004—11期间的相关文章，检索词“光动力学检测，光动力学治疗，脑肿瘤，胶质瘤，凋亡，恶性，氧合”，限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，选取与脑肿瘤的光动力学检测和治疗进展有关以及与光敏剂及光动力作用基础研究进展相关的文章，对剩余的文献开始查找全文，选取最新进展性文献纳入研究。资料提炼：共收集到27篇英文全文，41篇中文全文，其中21篇英文和16篇中文符合较新进展性，其余为综述性或观念较旧文章。资料综合：针对光动力学检测和治疗在脑肿瘤治疗中应用的问题，对所检索出文献中的众多观点进行提炼综合．重点介绍国内外已经成功的经验，并提出最有希望的展望。结论：光动力学检测的术中应用可增加脑胶质瘤的手术切除率，延长患者生存期；光动力学治疗方案的改进，可减少治疗的副作用，增加肿瘤细胞的杀伤率。     

多巴胺受体功能与癫痫的相关研究前沿

多巴胺是中枢神经系统的单胺类神经递质之一,参与多种神经活动的调节。在过去30年中,多巴胺系统一直是许多研究的焦点,它参与了癫痫活动的调节。多巴胺的不同作用是由特异的受体来介导,多巴胺受体分为D1与D2两个亚群。D1亚群包括D1和D5,D2亚群包括D2,D3和D4。D1类受体的存在使兴奋性氨基酸如谷氨酸的神经毒性加强,使γ-氨基丁酸(GABA)浓度降低,同时,可能通过钙离子的内流增加,使动作电位后出现持续性去极化状态,从而使癫痫活动得以加强。D2类受体拮抗兴奋性氨基酸及毒蕈碱所致的兴奋性神经毒性从而降低癫痫的发生。D1与D2类受体参与癫痫的调控都与多巴胺在颅内的传导通路有关。     

光动力学治疗脑胶质瘤

目的 探讨术中及术后对18例恶性脑胶质瘤患者实行光动力学疗法的疗效。方法 于术前24小时静滴Photofrln(光敏素)，术中尽可能多的切除肿瘤并且在残留瘤腔内激光照射，术后24小时通过光纤照射。结果 能明显延长患者的生存期和改善生存质量。结论 是一种治疗恶性脑胶质瘤的有效方法。     

激光共聚焦扫描显微镜动态观察体外培养大鼠皮层神经元受氯化亚铁作用时过氧化物水平及膜电位的变化

目的:建立外伤性癫痫的铁离子诱导细胞模型,观察N-乙酰半胱氨酸及德巴金预处理对受氯化亚铁作用的皮层神经元过氧化物及膜电位的影响。方法:实验于2004-10/2005-06在南方医科大学珠江医院神经外科实验室完成。①培养的新生SD大鼠神经元细胞,随机分为5组:对照组,模型组(1mmol/L),N-乙酰半胱氨酸预处理组(终浓度0.08g/L);丙戊酸钠(德巴金)预处理组(终浓度0.1g/L);N-乙酰半胱氨酸 德巴金预处理组(终浓度分别为0.08g/L及0.1g/L)。②采用荧光探剂DiBAC4(3)和乙酰乙酸盐2’,7’二氯氢化荧光素分别标记,激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)断层光切扫描动态观察体外培养的大鼠脑皮层神经元受氯化亚铁作用时的细胞膜电位和过氧化物水平变化。③免疫组织化学检测核因子-κB的表达情况。结果:①大鼠脑皮层神经元过氧化物水平:与对照组比较,模型组过氧化物的相对荧光强度值著性增高(3.39±1.21,18.95±16.26,P=0.038<0.05);N-乙酰半胱氨酸预处理组及N-乙酰半胱氨酸 德巴金预处理组相对荧光强度变化呈负值(-19.66±10.40,-14.84±5.08),与模型组比较差异有显著性(P<0.01);德巴金预处理组(22.89±0.91)相对荧光强度变化与模型组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②各组细胞膜电位测定结果:德巴金预处理组及N-乙酰半胱氨酸 德巴金预处理组相对荧光强度值明显低于模型组(-11.18±3.12,4.45±1.69,25.15±8.84,P<0.01);而N-乙酰半胱氨酸预处理组相对荧光强度变化(23.13±18.92)与模型组差异无显著性意义(P>0.05)。③模型组较对照组核因子κB染色强度明显增加;N-乙酰半胱氨酸预处理组与N-乙酰半胱氨酸 德巴金预处理组较模型组染色强度明显降低。结论:氯化亚铁对皮层神经元的作用可导致过氧化物的生成,导致膜电位的改变,N-乙酰半胱氨酸预保护可减少其过氧化物等自由基的生成,德巴金可起到稳定皮层神经元膜电位的作用,两者共同预处理可显著减轻皮层神经元受氯化亚铁作用的损伤。抗氧化剂联合抗癫痫药可能有助于防治与铁剂诱发有关的癫痫发作。