大鼠delta阿片受体短发卡RNA干扰真核表达载体的构建和鉴定

背景：长期应用阿片受体治疗疼痛会导致药物耐受或成瘾,可能与delta阿片受体密度上调有关。 目的：设计及构建大鼠delta阿片受体短发卡RNA真核表达载体并鉴定。 方法：根据大鼠delta阿片受体mRNA序列设计并体外合成短发卡RNA寡核苷酸片段,退火形成双链,克隆到线性化质粒pGenesil-1,然后进行酶切和测序鉴定。 结果与结论：酶切证明delta阿片受体-短发卡RNA已经插入到质粒载体pGenesil-1里,测序结果证明均为插入正确的克隆质粒,而且质量均符合设计标准,证实靶向大鼠delta阿片受体基因的短发卡RNA真核表达载体构建成功。     

四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定

目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。     

胰十二指肠切除胰腺空肠端侧吻合156例分析

目的:探讨胰十二指肠切除术中胰腺空肠端侧吻合技术。方法:回顾性分析山东大学齐鲁医院肝胆外科2004年3月—2012年6月156例胰十二指肠切除术行胰腺空肠端侧吻合患者的临床资料。根据胰腺的质地、厚度、胰管直径、胰管后壁胰腺组织的厚度、有无炎症,结合空肠的直径、空肠壁的厚度选择胰管-空肠黏膜-黏膜吻合、端侧套入式吻合等不同的吻合方式。结果:术中胰肠重新吻合8例。术后胰瘘3例、胆瘘2例、死亡2例。结论:胰十二指肠切除术中胰腺空肠吻合应根据患者的胰腺和空肠情况进行个体化选择。     

类风湿关节炎手术后自体引流血回输技术的应用

目的评价类风湿性关节炎(RA)患者手术后自体引流血回输的作用和使用安全性。方法93例RA患者随机分为两组。实验组(53例)术后使用自体引流血回输装置,对照组(40例)使用负压吸引瓶。记录引流量、回输血量及输血不良反应。结果实验组平均回输引流血759ml,其中6例平均输入库血165ml;对照组平均术后输库血824ml。两组患者手术前后的血红蛋白差异无显著性。两组中接受异体输血的患者有7例出现输血不良反应:荨麻疹4例(实验组2例,对照组2例),寒战、高热反应3例(均为对照组)。结论自体引流血回输是RA患者术后安全有效的输血方法。在术前没有自体血储备的情况下,该技术减少了输注库血的机会,避免血液传播疾病的发生。     

髋关节骨折脱位合并坐骨神经损伤及腘静脉血栓1例

正笔者于2017-06诊治髋关节骨折脱位合并坐骨神经损伤及腘静脉血栓1例,报道如下。1病例报道患者,男,51岁,因车祸外伤导致左髋部疼痛及活动受限约1 h入院。伤者为驾驶员,驾驶大货车追尾。查体:左髋屈曲内收,弹性固定,左小腿肿胀畸形。主要诊断:左髋臼粉碎性骨折,左髋关节脱位,左Pilon骨折,左腓骨下段及上段粉碎性骨折,右桡骨远端骨折,左胫骨下段骨折畸形愈合,左侧坐骨神经     

氯胺酮对体外培养大鼠神经干细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨氯胺酮对体外培养夫鼠神经干细胞(NSC)增殖与凋亡的影响。方法采用无血清培养和单细胞克隆技术,在大鼠海马分离培养具有单细胞克隆能力的细胞群,采用免疫荧光细胞化学技术证实为NSC。将NSC以5×10~4/孔接种于96孔培养板中,分别加入浓度为0(未加氯胺酮)、5、10、20、50、100、200、500、1000 mmol·L~(-1)氯胺酮,每个浓度5孔。采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测NSC光密度(OD),并计算生长抑制率(RI)。采用流式细胞仪测定氯胺酮浓度为0、10、100、500、1000 mmol·L~(-1)时NSC凋亡率。结果与氯胺酮浓度0时比较,200、500、1000 mmol/L氯胺酮可降低NSC OD,升高RI,10、100、500、1000 mmol·L~(-1)氯胺酮可升高NSC凋亡率(P＜0．05或0．01)。结论氯胺酮对体外培养大鼠NSC增殖有抑制作用,并能诱导NSC凋亡,且该作用与氯胺酮浓度有关     

难治性癫痫显微外科治疗的疗效分析

目的 报道应用显微外科治疗难治性癫痫的临床效果。方法应用三维痫灶定位诊疗计划对163例顽固性癫痫患者进行术前、术中致痫灶三维精确定位，然后在显微镜下采用几种术式结合的方法手术处理致痫灶、致痫网。术后随访1～2年，回顾性分析显微外科手术治疗的临床效果。结果结果发现术后癫痫发作完全消失52例（31．90％），发作显著改善83例（50．92％），改善较好10例（6．13％），改善较差15例（9．20％），发作无改善3例（1．84％），手术总有效率为88．96％，无效率为11.04％，术后88．96％以上的患者生活质量均有一定程度的提高。结论应用显微外科技术切除癫痫病灶可以明显减少术后并发症，提高临床疗效。     

迷走神经刺激治疗幼儿癫痫1例

1临床资料患儿,男,3岁11个月。因发作性意识丧失、肢体抽搐3年入院。患儿于9月大时因感冒高热突发意识丧失,双眼向上凝视,四肢强直阵挛,持续时间约10min后缓解。之后反复无诱因出现上述发作,在外院诊断为“癫痫”,接受正规抗癫痫药物治疗（丙戊酸钠、拉莫三嗪、左乙拉西坦、卡马西平）未见明显好转,每月发作4次左右,每次持续5～10min。     

人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控

背景：研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或神经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用。 目的：探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用。 设计、时间及地点：开放性实验,于2005-01/2007-03在解放军第三军医大学新桥医院完成。 材料：人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供。U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠;CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠。 方法：取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133+脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2 h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色。 主要观察指标：人脑胶质瘤干细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达。 结果：在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24~48 h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4 h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24 h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层。肿瘤球能同时表达干细胞标志物CD133和巢蛋白,CD133+脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3~3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点。NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织（P < 0.01）,在CD133+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP+和MAP2+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中呈弱表达或不表达。在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA及NOTCH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱。 结论：NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达。NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控。