工程化肌腱修复肌腱缺损后力学特性的组织学基础

探讨组织工程化肌腱修复肌腱缺损后体内愈合过程中力学特性的组织学基础。取罗曼鸡肌腱细胞 ,经体外培养、扩增 ,与可降解生物材料聚羟基乙酸筛网构建工程化肌腱 ;将其植入修复 2 0只罗曼鸡第二趾深屈肌腱0 .5～ 0 .8cm缺损。术后第 2、4、6、8周取材 ,对标本进行大体、组织学及生物力学测定。植入 2、4、6、8周 ,新生肌腱在大体形态、细胞及胶原纤维排列方式上与正常肌腱相似 ,但新生肌腱的胶原纤维束并未形成较多的沿肌腱长度方向的致密结构 (“塑形”) ,导致其最大张力增加缓慢 ,到 8周时为 15 .4 0± 10 .6 3N,仅达正常肌腱的 2 3 ;8周时最大张应变为 2 2 .4 9± 10 .2 1 ,比正常肌腱大 10。结果表明 ,单纯聚羟基乙酸作支架 ,材料降解过快 ,新生肌腱失去了正常的力学刺激 ,“塑形”能力差 ,其生物力学强度低。提示 ,保持新生肌腱形成过程中正常的力学刺激对新生肌腱的“塑形”可能是至关重要的。     

人胎海马生长抑素和神经生长因子免疫阳性神经元的研究

人胎海马生长抑素和神经生长因子免疫阳性神经元的研究李永红保天然李秀群（华西医科大学组织胚胎学教研室）大量证据表明，中枢神经系统（ＣＮＳ）中含生长抑素（ＳＳ）或神经生长因子（ＮＧＦ）的细胞、纤维及其受体广泛地分布于脑的各部，它们在ＣＮＳ的生长发育和生理...     

石蜡油辅助男性患者导尿管插管的临床应用

目的:探讨石蜡油辅助男性患者导尿管插管的应用价值。方法:620例行导尿管插管的患者按照入院时间不同分为观察组(n=338例)与对照组(n=282例),对照组患者将导尿管浸润石蜡油后插管,观察组患者采用无菌注射器抽吸3ml无菌石蜡油注入男性尿道内,后将导尿管浸润石蜡油插管,比较两组患者的插管反应、一次性插管成功率、尿道损伤及插管操作时间。结果:观察组插管轻度反应255例(71.2%),中度插管反应70例(16.0),重度插管反应13例(2.4);对照组插管轻度反应58例(20.6%),中度插管反应164例(58.2%),重度插管反应60例(21.2%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组的一次性插管成功率分别为(95.0%vs70.2%),尿道损伤率为(0.59%vs3.90%),插管操作时间分别为(12.46±2.13 minmin vs16.84±1.50),两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:石蜡油通过全程润滑男性患者尿道,使尿道插管更加顺利,有效地降低插管反应、尿道损伤率,提升一次性插管成功率,减少插管操作时间。     

脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分，观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱，获取髓核，0．2％Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组（A组）及脊索细胞、软骨样细胞（1：1）共培养组（B组）。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况，测定两组原代及传代细胞成活率，MTT法测定两组第2代细胞增殖曲线，并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察，原代脊索细胞直径10～15gm，胞浆内富含大小不等的囊泡；原代软骨样细胞直径4～6gm，胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89．0％～95．3％，B组为91_3％～96．3％，各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。A组细胞培养3～4d进入对数生长期，B组细胞培养2d后进入对数生长期；培养4d后，B组细胞增殖能力高于A组，差异有统计学意义（P〈0．05）。A组3代以内细胞表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原，B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持；脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。     

兔骨膜成骨细胞与肾血管内皮细胞间接共培养的体外实验研究

目的　探讨兔骨膜成骨细胞 (RPOB)和肾血管内皮细胞 (RRVEC)不同比例下间接共培养对成骨细胞增殖及功能的影响 ,优选细胞间接共培养的适宜比例。方法　取 RPOB和 RRVEC,采用细胞嵌盒培养系统 ,对照组、试验 1、2、3组分别以 RPOB和 RRVEC按 1∶ 0、2∶ 1、1∶ 1和 1∶ 2间接共培养 4天。通过细胞计数、碱性磷酸酶 (AL P)活性测定及 3H-脯氨酸掺入试验观察 RPOB和 RRVCE增殖分化能力及功能状态。结果　试验 1组 RPOB较对照组、试验2、3组增殖活跃 (P<0 .0 5 ) ,且 3H-脯氨酸掺入较高 (P<0 .0 5 ) ;试验 1组 AL P活性较对照组和试验 3组高 (P<0 .0 5 ) ,但与试验 2组无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论　 RPOB和 RRVEC以 2∶ 1进行间接共培养时 RPOB增殖能力强、功能活跃 ,适宜进一步组织工程研究     

胎儿先天性心脏病的超声筛选分析

目的　探讨超声在筛选胎儿心血管异常中的应用价值。方法　采用彩色多普勒超声检查 7166例16～ 42周胎儿心脏 ,产前超声诊断的复杂心内畸形与胎儿尸解或分娩后超声复查对照。结果　①产前超声发现46例胎儿心血管异常 ,异常率为 6.42‰ ,其中复杂性先心病 10例经引产后尸解证实。复杂性先心病多合并体表畸形或多系统畸形。②单纯室间隔缺损 2 0例 ,其中 10例因合并其他畸形引产尸解证实 ,4例产后证实 ,6例室间隔缺损 <5mm者为超声漏诊。③单纯房间隔缺损 6例 ,其中 4例合并巴氏水肿及多系统畸形 ,引产证实。④卵圆孔过大 10例 ,2例产后证实为房间隔缺损 ,8例正常。⑤超声发现心包积液 8例 ,心律失常 9例。结论　胎儿心脏异常并非少见 ,超声及早确诊利于优生     

大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,间歇加药方法将不同浓度0,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L甲状旁腺激素作用于大鼠成骨细胞(0mol/L作为空白对照组),经碱性磷酸酶染色及钙结节茜素红染色证实培养的成骨细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖能力,蛋白免疫印迹测定护骨素的分泌量。结果:①成骨细胞的形态变化:倒置相差显微镜下可见培养的成骨细胞呈短梭形、三角形和多边形。碱性磷酸酶染色光镜下可见成骨细胞胞浆中分布特征性蓝紫色细颗粒;成骨细胞的钙结节在镜下可见部分细胞聚集一起呈"集落状"生长。②成骨细胞增殖率:10-6～10-9mol/L浓度甲状旁腺激素对成骨细胞增殖均显示刺激作用,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05),增殖率以10-8mol/L甲状旁腺激素组最高。③成骨细胞护骨素的表达:甲状旁腺激素下调成骨细胞中护骨素的分泌,与空白对照组相比,10-6mol/L甲状旁腺激素组抑制作用最明显(P<0.01),无显著剂量依赖性。结论:甲状旁腺激素对体外培养成骨细胞的增殖具有明显促进作用,通过下调成骨细胞中护骨素的分泌,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

掌侧与背侧钢板固定关节外桡骨远端背侧粉碎性骨折的生物力学研究

目的 探讨掌侧与背侧钢板固定桡骨远端背侧粉碎性骨折时的抗压缩、抗扭转差异性.方法 将12侧新鲜成人尸体桡骨标本制成桡骨远端背侧粉碎性骨折模型,随机分为2个大组,分别进行掌侧与背侧钢板螺钉固定;再将每个大组分为2个亚组,分别进行轴向压缩试验和水平扭转试验.检测指标:轴向压缩强度、轴向压缩刚度、水平扭转强度和水平扭转刚度.结果 在轴向压缩试验中,掌、背侧两组之间轴向压缩强度差异有统计学意义(P＜0.05),背侧组大于掌侧组;在生理压缩载荷下,掌、背侧两组刚度值差异有统计学意义(P＜0.05),背侧组高于掌侧组.在水平扭转试验中,两组水平扭转强度与扭转刚度差异都没有统计学意义,但数据显示,掌侧组都略强于背侧组.结论 在抗压缩方面,两组的压缩强度以及压缩刚度差异均有统计学意义,背侧组要优于掌侧组;而在抗旋转方面,两组的扭转强度与扭转刚度差异均无统计学意义,但掌侧组在数据上均稍大于背侧组.     

雷洛昔芬对兔骨折愈合的影响

目的 研究雷洛昔芬(raloxifene,RLX)对兔骨折愈合的影响.方法 健康新西兰大白兔80只,雌性44只,雄性36只,体重1.9～2.1 kg.取72只动物制备左前肢桡骨中段0.5 cm骨缺损模型,按给药不同分为4组,每组18只(雌性10只,雄性8只).A、B、C组分别于术后第2天给予7.5、15.0、30.0mg/(kg·d)RLX至50d,D组不作处理.剩余8只不作任何处理,作为血清骨钙素检测正常对照.于术后不同时间点行骨密度、生物力学测定、X线片组织学和免疫组织化学染色观察,测定血清雌二醇、血浆胆固醇含量、血清骨钙素水平及子宫干重/体重比.结果 术后20 d各组骨密度达峰值,A、B、C组骨密度均高于D组(P＜0.05);但A、B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后30、50 d,A、B、C组最大破坏载荷和最大位移均较D组大(P＜0.05);A、B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后7、20、30d,A、B、C组骨折X线评分较D组高(P＜0.05);50 d时B、C组与D组间及A、C组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后30、50 d,A、B、C组骨折愈合处新骨面积百分比均高于D组(P＜0.05).术后30d,B、C组骨折愈合处Col Ⅱ蛋白分泌较D组增多(P＜0.05),A、D组差异无统计学意义(P＞0.05);50 d时各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).术后10、30及50 d各组血清骨钙素水平均较正常对照动物明显增高(P＜0.05);B、C组均较D组高(P＜0.05);A组与D组比较,A、B、C组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).术后30 d,各组血浆胆固醇含量无明显变化(P＞0.05);50 d时A、B、C组均明显降低,与D组比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后30、50 d,B、C组血清雌二醇含量与D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),余各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后30、50d,B、C组子宫干重/体重小于D组(P＜0.05),A、D组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 以7.5 mg/(kg·d)剂量口服RLX可安全有效促进兔桡骨缺损骨折模型骨折愈合.     

上皮细胞条件培养液对BMSCs分化的影响

目的 探讨上皮细胞条件培养液(epithelial cell conditioned medium,ECCM)体外诱导犬BMSCs向上皮细胞分化的可行性.方法 成年健康雄性比格犬1只,体重10 kg.于犬髂后上棘采用骨髓穿刺法取骨髓5 mL,分离培养BMSCs.取犬口腔黏膜下组织,剪成约4 mm×4 mm大小,制备ECCM.取第2代BMSCs以2×104个/孔细胞密度接种,实验组于ECCM中培养,对照组于低糖DMEM完全培养基中培养.观察两组细胞形态特征,MTT法绘制生长曲线,诱导培养21 d免疫组织化学染色鉴定上皮细胞特异性标志物--细胞角蛋白19(cytokeratinl9,CK-19)和细胞角蛋白AE1/AE3,透射电镜观察细胞超微结构.结果 倒置相差显微镜下见两组细胞均呈长梭形,均匀分布,折光性较强,增殖迅速.两组细胞生长曲线均呈"S"形,实验组生长曲线较对照组右移,提示ECCM对细胞增殖有抑制作用.实验组CK-19和细胞角蛋白AE1/AE3免疫组织化学染色均呈阳性反应,对照组呈阴性.透射电镜下实验组细胞胞浆内可见紧密连接.结论 ECCM体外有诱导同种BMSCs向上皮细胞分化的作用.