肝素-ELISA法检测血清中期因子及其对肝癌诊断的初步应用

目的:建立中期因子(midkine,MK)的测定方法,初步探讨血清MK浓度测定对肝癌的诊断价值.方法:根据MK可结合肝素的特点,应用肝素-抗体双夹心原理,建立肝素-ELISA,并检测20例健康献血者、20例良性肝占位性病变患者、20例肝硬化患者以及104例肝细胞癌(HCC)患者血清MK的质量浓度.结果:肝素-ELISA检测MK的最小值为15 ng/L,可测范围为15～1 000 ng/L,＜500 ng/L时呈线性关系(r=0.97).测定结果表明,正常献血者、良性肝占位性病变患者和肝硬化患者血清MK浓度分别为(56±11)、(74±19)和(89±43)ng/L,而HCC患者血清MK浓度为(199±87)ng/L,与前3组之间有显著差异(P＜0.05).HCC患者血清MK阳性率达83.7%,与其他3组之间具有显著性差异(P＜0.001).结论:应用肝素-ELISA测定血清MK的质量浓度对肝癌具有诊断价值.     

重组病毒rAAV2-PD-L1的构建及其转染小鼠血管内皮细胞的生物学效应

目的:构建腺相关病毒rAAV2介导的PD-L1表达系统,检测感染rAAV2-PD-L1的血管内皮细胞共刺激T细胞分泌细胞因子的作用.方法:以鼠肝脏组织来源的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增PD-L1 cDNA,克隆入穿梭质粒pSNAV1,脂质体法转染包装细胞BHK21,筛选获得重组病毒rAAV2-PD-L1.以rAAV2-PD-L1感染小鼠血管内皮细胞株2F-2B后,与活化的小鼠T 细胞共培养,ELISA法检测培养上清IFNγ浓度.结果:测序结果表明,克隆的小鼠PD-L1 cDNA和重组质粒pSNAV-PD-L1序列正确.重组病毒rAAV2-PD-L1经PCR扩增出目的基因片段,在SDS-PAGE电泳上显示AAV2三条特征带,纯度大于98%.病毒物理滴度为4×1012 virus genome/ml;蛋白浓度为0.355 mg/ml.感染rAAV2-PD-L1的血管内皮细胞高表达PD-L1.活化T细胞与其共培养后,培养上清IFNγ浓度显著降低.结论:构建的重组病毒rAAV2-PD-L1可感染血管内皮细胞,并且共刺激可抑制活化T细胞分泌IFNγ.     

益气活血方通过Ghrelin对机械通气肺损伤大鼠肺组织的保护机制研究

摘 要: 目的:通过观察益气活血方对机械通气肺损伤大鼠血清、肺泡灌洗液及肺组织中Ghrelin、AngII、肾素、IL-6、TNF-α表达的变化还有其对肺组织的影响,试发现其对肺组织的保护作用及机制。方法:将40只SD大鼠随机分成空白组,模型组、中药组和阳性药物干预组,乙醚麻醉后用动物人工呼吸机通气的方式制备机械通气肺损伤大鼠模型,其中阳性药物干预组造模前腹腔给药Ghrelin,中药组在通气后给予益气活血方灌胃2周,观察肺组织结构及炎症细胞浸润程度,ELISA法检测Ghrelin、AngII、肾素、IL-6、TNF-α在各组大鼠血清和肺泡灌洗液中的表达,RT-PCR法检测肺组织 IL-6、TNF-αmＲNA表达。结果：与空白组比较,造模后,机械通气肺损伤模型组大鼠血清及肺组织中AngII、肾素、IL-6、TNF-α均有不同程度水平升高,Ghrelin表达水平降低（P＜0.05或P＜0.01）。给药2周后,和模型组相比,中药组AngII、肾素、IL-6、TNF-α表达水平略微下降,Ghrelin表达上调 (P＞0.05);HE染色病理提示两给药组大鼠肺组织形态结构明显改善。结论：益气活血方对VLLI大鼠肺组织有保护作用,可能与下调VLLI大鼠肺组织中AngII、肾素、IL-6、TNF-α,上调Ghrelin表达水平,减轻了炎症反应对肺组织的损伤有关。     

医药工业中4-甲氧基水杨醛分析检测的研究进展

4-甲氧基水杨醛属于羟基取代苯甲醛衍生物,作为应用活跃的医药中间体具有良好的药理活性。综述了近年来我国中药材、中成药等医药工业中4-甲氧基水杨醛的分析检测研究进展,报道了较为新颖的检测实例,对其发展前景进行了展望。     

中药注射剂类过敏反应应急检验方法探讨

目的 探索适用于中药注射剂类过敏反应的应急检验方法。方法 考察豚鼠一次性静脉注射注射用丹参和清开灵注射液后类过敏反应的发生情况 ,并观察清开灵注射液对RBL-2H3细胞中β-氨基己糖酶释放率的影响。结果 豚鼠一次性静脉注射中药注射液后,部分批次的中药注射液可观察到类过敏反应;清开灵注射液 体外可诱导RBL-2H3细胞发生非免疫性脱颗粒,刺激β-氨基己糖酶释放,且呈浓度依赖性。结论 豚鼠体内类过敏反应检查法和RBL-2H3细胞β-氨基己糖酶释放率检查法结合 ,可作为中药注射剂类过敏反应应急检验方法,用于药品质量控制。     

K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及下游信号通路的影响

目的 探讨K-ras第12密码子突变对K-ras蛋白自身活性及其下游信号通路的影响。方法 选用本室已构建好的稳定高表达WT、G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株作为研究对象,通过GST-Raf-1 Ras结合域特异性结合Ras-GTP空间构象,免疫沉淀细胞内具有活性的K-ras蛋白,利用Western blot技术检测沉淀下来的Ras-GTP水平并进行比较分析;通过Western blot法检测K-ras下游信号通路中MER、ERK、ATK蛋白分子的磷酸化水平。结果 饥饿处理后表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平较低,而表达G12A、G12C、G12D、G12R、G12S和G12V型K-ras蛋白的cos7同源细胞株内RAS-GTP水平活性为WT型K-ras蛋白3.5~40倍不等;表达K-ras突变蛋白的cos7同源细胞株内MEK、ERK和AKT的磷酸化水平比表达野生型K-ras蛋白的cos7同源细胞高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 K-ras第12密码子突变导致K-ras蛋白自身永久活化,且不需要外源性生长因子的刺激;突变K-ras可以持续激活K-ras蛋白下游效应因子,使K-ras信号通路持久活化。     

胃癌的电镜诊断及分类

本文报告７０例胃癌的电镜观察结果,对其分类标准及超微结构特点进行讨论。１　材料与方法１１　７０例胃癌均系我院住院手术病人,男４１例,女２９例,年龄２６～６７岁。手术切除胃肿瘤组织,以２５％戊二醛和１％锇酸双重固定,Ｅｐｏｎ—８１２包埋,超薄切片,铀－铅染色,ＰＨＩＬＩＰＳ—ＣＭ１０透射电镜观察。１２　胃癌的组织学按照ＷＨＯ制定的肿瘤国际组织学分类标准分类。２　结果及讨论本文共７０例按照ＷＨＯ胃癌组织学分类标准。共有乳头状腺癌５例,管状腺癌４３例,粘液腺癌９例,印戒细胞癌４例,腺鳞癌２例,鳞…     

B超监视下输卵管通液术的诊断治疗观察

目的　探讨Ｂ超监视下输卵管通液术对不孕症诊断和治疗的价值。方法　选择３３ 例不孕妇女将通管液注入宫腔内,在Ｂ超监视下行输卵管通液术。观察输卵管腔的内径,形态及气液体通过输卵管的速度,宫腔液暗区分离宽度、附件区宫后区液体多少,术中液体注入时的阻力及患者的感觉等因素。结果　输卵管通畅情况为：一侧通而不畅一侧通畅８ 例,一侧通畅一侧梗阻６ 例,双侧通畅４ 例,双侧不通畅５ 例,一侧不通、一侧通而不畅９例,双侧通而不畅１ 例,术后半年怀孕５ 例。结论　对不孕妇女行Ｂ超监视下输卵管通液术,可达到诊断治疗双重目的,且方法简便,实用     

血透病人的饮食指导

透析疗法是根据半透膜的“膜平衡”原理,使用一定浓度的电解质和葡萄糖组成的透析液和血液中积累的代谢产物,水及电解质进行渗透交换,从而达到治疗的目的。临床上对。肾功能衰竭的病人多采用血液透析（又称人工肾）和腹膜透析两种方法。应用透析后的病人一般病情均可以得到改善,但要丢失一些营养素,     

归脾汤联合西药治疗巨幼细胞贫血30例

目的:观察归脾汤联合西药治疗巨幼细胞贫血的疗效。方法:60例患者随机分为治疗组30例给予归脾汤加减(白术、茯神、龙眼肉、炙黄芪、山药、人参、木香等)结合西药治疗;对照组30例给予西药治疗。观察两组患者治疗前后的疗效。结果:两组患者经过治疗后,总有效率均为100%。但治疗组在缓解临床症状方面明显优于对照组,两组之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论:中西医结合治疗巨幼细胞贫血疗效满意,不良反应小。