HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的调控

目的：构建带编码HA标签的hdac1基因真核表达载体，研究组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）对雌激素受体α和β（ERα和ERβ）蛋白水平的影响。方法：用提取的RNA产物进行逆转录合成cDNA，利用PCR技术扩增出hdac1基因完整编码区序列，通过DNA重组技术构建含编码hdac1 DNA片段的真核表达载体pcDNA3-HA—hdac1；利用GST沉降（pull-down）实验观察HDAC1是否能特异结合ERα或ERβ；又将pcDNA3—HA—hdac1重组质粒分别和ERα表达载体或ERβ表达载体质粒共转染293T细胞，观察HDAC1对ERα和ERβ蛋白水平的影响。结果：转染pcDNA3—HA—hdac1重组质粒的哺乳动物细胞表达了与预期相对分子质量大小一致的HDAC1蛋白；GST沉降实验表明，HDAC1蛋白与ERα和ERβ均结合；共转染实验观察到HDAC1可使ERα蛋白水平降低，而对ERβ没有影响。结论：HDAC1与ERα和ERβ均结合，但其对ERs的作用具有亚型特异性，ERα和ERβ蛋白水平可能受不同类型的组蛋白去乙酰化酶（HDACs）的调控。     

METT11D1抗体的制备与鉴定

目的:制备METT11D1(methyltransferase 11 domain containing 1.简称其为GA9)(GenBank:AK024512)的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:融合表达GST-GA9(1-228aa)和GST-GA9(229-456aa)蛋白,利用包涵体纯化蛋白方法纯化蛋白,常规免疫小鼠,制备多克隆抗体.利用转染带有FLAG标签的FLAG-GA9真核表达载体的293T细胞裂解物,Western blot检测抗体的特异性.结果:获得了GST-GA9(1-228aa)和GST-GA9(229-456aa)融合蛋白;利用这些融合蛋白得到的多克隆抗体可特异识别FLAG-GA9蛋白.结论:成功得到可特异识别GA9的多克隆抗体,为进一步研究GA9的功能奠定了坚实的基础.     

抗肿瘤转移相关蛋白Memo抗体的制备及组织表达谱分析

目的:制备抗Memo蛋白的特异性抗体,并鉴定其特异性,检测其在小鼠组织中的表达。方法:在大肠杆菌中表达GST-Memo融合蛋白,常规免疫小鼠制备抗体。构建了带有FLAG标签的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo。用Westernblot检测抗体的特异性。结果:构建了Memo的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo,制备的抗Memo抗体能特异性地识别Memo蛋白。Westernblot检测表明,Memo蛋白在不同的小鼠组织中都有一定程度的表达。结论:成功地获得抗Memo蛋白的特异性抗体并检测了其组织表达谱,为进一步研究其与恶性肿瘤的转移性、侵袭性的关系及其相关机理的研究提供了重要的制剂。     

boxA及上游序列缺失突变对λ噬菌体抗转录终止功能的影响

目的 研究λ噬菌体表达调控机理，阐明PL操纵了boxA及邻近序列突变对抗转录终止作用的影响。方法 利用体内同源重组技术，使大肠杆菌染色体DNA上携带了CI857，PL，nutL[boxA*(*代表不同的boxA及临近序列缺失突变）,boxB],N-lacZ,ttt,galK单拷贝基因，构建了含boxA及邻近序列突变（boxA*)的一系列新菌株，模拟了λ噬菌体感染宿主菌后的生理状态，利用抗转录终止报道基因galK分析研究了boxA及临近序列突变对PL操纵子抗转录终止作用的影响。结果 证明在缺失了boxA及部分上游序列的情况下，大肠杆菌RNA聚合酶不能通读转录终止子。结论 λ噬菌体左向操纵子具有与右向操纵子不同的转录调控现象。     

人粒细胞集落刺激因子（G－CSF）cDNA的克隆和序列测定

人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的克隆和序列测定崔立斌，马清钧，张京生，李杰之，石成华，刘传暄（军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）用Ｆｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ从正常中国人外周血中分离单个核细胞，在ＲＰＭＩ１６４０培养基（含１０％小...     

人前列腺癌相关基因pc—1表达产物在细胞内的定位研究

目的：研究pc-l基因表达产物在细胞内的定位。方法：采用巢式PCR技术,从原始克隆质粒中扩增出可编码蛋白分子的pc-l cDNA片段,分别将其克隆入含EGFP和MYC标签的真核表达载体中;用脂质体介导法将其转染入人前列腺癌细胞C4－2中;通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦显微镜技术检测pc-l表达产物在细胞内的定位。结果与结论：pc-l表达产物定位于细胞质中,为进一步研究其生理、生化功能奠定了基础。     

MMS-2型无菌运送器研制

无菌小鼠、悉生小鼠、SPF 小鼠等在各单位之间运往期间,应有一种特定的运送装置以保证动物途中不受微生物污染。作者研制出一种装置,推荐试用,报告如下。材料、方法和结果运送器(图1):底面直径14 cm、高20 cm、口的直径9 cm。外层盖的孔径为0.5 cm,孔面积占每个盖面积的70%。     

FHL1抗体的制备与特异性鉴定

目的:制备FHL1及其剪接体FHL1B、FHL1C的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:融合表达GST-FHL1蛋白,常规免疫小鼠,制备多克隆抗体。分别构建带有FLAG标签的FHL1-5、FHL1B、FHL1C以及FHL1N端和C端缺失突变体的真核表达载体。Westernblot检测抗体的特异性。结果:获得了FHL1-5、FHL1B、FHL1C及FHL1(1-169aa)和FHL1(168-280aa)的真核表达载体;得到的多克隆抗体可特异识别FHL1、FHL1B和FHL1C,而不识别FHL2-5;抗体与FHL1N端反应,而不与其C端反应。结论:成功得到可特异识别FHL1、FHL1B和FHL1C的多克隆抗体,为进一步研究FHL1及其剪接突变体的功能奠定了坚实的基础。