铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌，能通过不同的机制产生药物耐受性，特别是多重耐药和对临床上应用最广的β-内酰胺类抗生素的耐药，给临床抗感染治疗带来极大困难，从分子水平研究阐明其对β-内酰胺类抗生素的耐药机制具有重要临床意义。     

快速检测重症肌无力患者的抗乙酰胆碱受体抗体的研究

目的：建立一种简便，快速的方法以及检测血清中的抗乙酰胆碱受体抗体（AchR-Ab）。方法：分别用本法和常规ELISA对90份临床确诊标本进行检测，并对两种检测结果进行比较分析。结果：60例重症肌无力患者经本法和常规ELISA检测后，AchR-Ab阳性率分别为88．3％和86．7％。本检测法的敏感性达88．3％，特异性为93．3％，重复性较好（CV＜7．94％）。结论：与常规ELISA相比，本检测法具有方便，快速，敏感的特点，在重症肌无力患者的AchR-Ab检测中有较好的应用价值。     

RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定

目的原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带。结论成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础。     

鼠β-防御素2抗宫颈癌的实验研究

目的:建立BALB/c小鼠U14宫颈癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,探讨mBD2对小鼠机体免疫功能的影响.方法:采用无内毒素质粒大抽试剂盒抽提pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2和pcDNA3.1(+)质粒DNA.将荷瘤小鼠随机分为5组,分别采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2质粒治疗,同时设立pcDNA3.1(+)、顺铂和PBS组对照;观察肿瘤生长状况、荷瘤小鼠存活时间,绘制小鼠生存曲线.结果:成功建立了BALB/c小鼠U14移植瘤模型.采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2、pcDNA3.1(+)治疗造模成功的荷瘤小鼠, 结果显示:pcDNA组及PBS组肿瘤生长迅速,出现大范围出血、坏死,并于治疗后7 d全部死亡;mBD2组与rmBD2组小鼠肿瘤生长相对缓慢,出现局部出血坏死等现象,至治疗2周,出现死亡,至治疗结束时,每组仍有3只小鼠存活,而Pt组小鼠肿瘤生长慢,小鼠生长较为活跃,至治疗21 d,开始出现死亡,pcDNA和PBS组与mBD2组和rmBD2组及Pt组与mBD2组和rmBD2组生存时间比较,结果有统计学意义(P<0.05),mBD2组和rmBD2生存时间比较,也具有统计学意义(P<0.05).结论:mBD2能够抑制移植瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存时间.在抑瘤效果上,mBD2优于外加信号肽重组mBD2作用.     

白藜芦醇对小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化的干预作用

目的：目前研究认为白藜芦醇能改善病毒性心肌炎(VMC)急性期小鼠心功能及心肌损伤,在体外也具有抑制小鼠心肌纤维化的作用,但在VMC慢性期小鼠模型上,是否具有抑制心肌纤维化的作用尚未见报道。该研究旨在探讨白藜芦醇对VMC慢性期心肌纤维化干预的效果,从而为临床治疗VMC提供一定的实验依据。方法：柯萨奇病毒B3(CVB3)感染BALA/c小鼠建立VMC慢性期动物模型,30 d后将小鼠随机分为VMC模型对照组, 白藜芦醇小剂量组(10 mg/kg),中剂量组(100 mg/kg)及大剂量组(1 000 mg/kg),并设正常对照。30 d后,处死小鼠摘取心脏及提取血液,酶联免疫吸附法测各组小鼠胶原前肽(PINP,PICP及PIIINP)的血清浓度,心脏切片行苏木精-伊红染色及苦味酸天狼猩红胶原组织化学染色并计算胶原容积积分。结果：白藜芦醇大剂量组（0.74±0.19）及中剂量组（1.07±0.12）心肌胶原容积积分较小剂量组(2.17±0.19)和VMC模型对照组(2.33±0.18)明显减少,差异有显著性(P<0.05)。 大剂量组和中剂量组比较差异无显著性,小剂量组和VMC模型对照组比较差异无显著性。与VMC模型对照组比较,白藜芦醇高剂量组及中剂量组血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽（PICP）及Ⅲ型前胶原氨基端前肽（PIIICP）含量明显减少,差异有显著性（P<0.05）,而Ⅰ型前胶原氨基端前肽（PINP）含量明显增多,差异亦有显著性（P<0.05）。结论：VMC慢性期小鼠模型上,白藜芦醇能抑制VMC心肌胶原的增生,具有抗心肌纤维化的作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：291-295］     

中药外敷熏洗治疗中老年膝关节痹症200例分析

中老年膝关节痹症,是临床常见、多发病,治疗方法很多,本文着重介绍以中药外敷、熏洗结合的治疗方法。我院门诊从1990年至1996年8月对中老年膝关节痹症治疗200例,疗效满意,报告如下。     

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.     

王新志教授论治外感与心悸经验

此文旨在总结王新志教授所认识外感与心悸的联系。文章从心悸的历史源流、病因演变、证候研究及治疗等方面入手,进而总结王新志教授所认为的风、寒、暑、湿、热等外邪侵袭引起心悸的机制,并概括其治法治则。王新志教授为第五批全国老中医药专家学术经验指导老师及中医药传承与创新“百千万”人才工程(岐黄工程)—国家中医药领军人才支持计划人才,临床经验丰富,并善于发现疾病产生原因,总结常见疾病的规律。     

非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白的分离纯化

目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,优化Hap。蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值（D280）,用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液l洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol／L NaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化Haps蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol／L NaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。     

肝肾综合症临床研究现状

严重肝病当其有大量腹水时,出现有效循环血容量不足等,可出现功能性肾衰竭称为肝肾综合症（HRS）。本文综述肝肾综合征（HRS）10年国际、国内在基础研究、临床诊断和治疗上的进展。