Gene Transfection Mediated by Ultrasound and Pluronic P85 in HepG2 Cells

In order to assess whether gene transfection could be mediated by ultrasound in associa- tion with P85 and find the appropriate parameters of ultrasound irradiation, the effects of ultrasound with or without P85 on gene transfection of HepG2 cells were examined. The HepG2 cells were irra- diated by ultrasound at 1 MHz, 0.4-2.0 W/cm2 and 50% duty cycle with plasmid encoding enhanced green fluorescent protein (EGFP) as a report gene. Forty-eight h later, the expression of EGFP was detected under the fluorescence microscopy. Transfection efficacy was quantitatively assessed by flow cytometry, and cell viability was evaluated by trypan blue exclusion. The results showed that the transfection efficacy was increased with the increases in ultrasound output power and the ideal trans- fection efficacy was achieved in HepG2 cells irradiated by ultrasound at 0.8 W/cm2 for 30 s. The transfection efficacy in ulstrasound P85 group was three times higher than in single ultrasound group [(17.63±1.07)% vs (5.57±0.56)%, P<0.05]. The cell viability was about 81% and 62% in ultrasound group and ultrasound P85 group respectively. It was concluded that ultrasound in combination with P85 could mediate the gene transfection of HepG2 cells, ideal transfection efficacy was achieved by ultrasound irradiation at 0.8 W/cm2 for 30 s, and P85 could somewhat increase the damage to cells caused by ultrasound.     

Ultrasound and Microbubbles： Their Functions in Gene Transfer In Vitro

To examine the role of ultrasound in gene delivery in vitro, three cells lines were exposed to the low-frequency ultrasound of varying intensities and for different durations to evaluate their effect on gene transfection and cell viability of the cells. Microbubble （MB）, Optison （10%）, was also used to observe the role of the microbubbles in gene transfection. The results demonstrated that as the ultrasound intensity and the exposure time increased, the gene transfer rate increased and the cell viability decreased, but at high energy intensities, the cell viability decreased dramatically, which caused the transfer rate to decrease. The most efficient ultrasound intensity for inducing gene transfer was 1 W/cm^2 with duration being 20 s. At the same energy intensity, higher ultrasound intensity could achieve maximal gene transfer rate earlier. Microbubbles could increase ultrasound-induced cell gene transfer rate by about 2 to 3 times mainly at lower energy intensities. Moreover, microbubbles could raise the maximum gene transfer rate mediated by ultrasound. It is concluded that the low-frequency ultrasound can induce cell gene transfer and the cell gene transfer rate and viability are correlated with not only the ultrasound energy intensity but also the ultrasound intensity, the higher ultrasound intensity achieves its maximal transfer rate more quickly and the ultrasound intensity that can induce optimal gene transfer is 1 W/cm^2 with duration being 20 s, and microbubbles can significantly increase the maximal gene transfer rate in vitro.     

几种共聚物对小鼠骨骼肌超声介导基因转染表达的影响

目的 探讨超声和共聚物在质粒DNA对小鼠骨骼肌基因转染中的影响.方法 应用三种水溶性不同的共聚物F127,L61和P85,与DNA混合后直接小鼠胫前肌注射,并超声辐照.超声频率为1 MHz,脉冲重复频率100 Hz,占空系数为20%,用3 W/cm2声强辐照1 min.实验1周后取出胫前肌并快速冰冻切片,荧光显微镜计数表达GFP的转染肌纤维数,苏木精和伊红染色评价肌肉损伤情况.结果 三种共聚物均可显著提高质粒DNA的基因转染(P＜0.01),P85的基因转染效率高于其他两种共聚物(P＜0.05).超声虽对单纯质粒、F127和L61组的基因转染无显著促进作用,但与P85有协同作用,可显著提高P85组的基因转染效率(P＜0.01).在给定超声剂量和共聚物浓度下,二者在提高质粒DNA基因转染的同时,并不显著增加对组织的损伤作用.结论 共聚物P85不但可显著提高质粒DNA在小鼠骨骼肌的基因转染,且与超声具有协同作用.     

三维超声最大透明成像技术对胎儿颅骨解剖结构的检查

目的 探讨三维超声立体直观检测胎儿颅骨解剖形态和结构的方法。方法 采用静态最大透明回声成像模式，对64例12—40孕周胎儿颅骨的形态和解剖结构进行三维重建，以直接显示胎儿颅骨的总体解剖结构、各组成部分的特征和相互关系。结果 颅骨前方、侧后方和顶部的三维重建显像率分别为93．75％、84．34％和60．94％。孕21～32周为胎儿颅骨整体三维重建成像的最佳时段，前方和侧后方的成像率可达100％，顶部成像率高于70％。重建成功后可以显示具备眼眶、鼻腔、上下颌骨间隙的颅面部外观，颅骨形态立体直观，解剖层次分明，颅顶大小囟门，各骨骼的边界和相互连接亦清晰易辨。结论 三维超声能全面、直观、形象地显示胎儿颅骨的总体和各组成部分的生长发育状况、解剖形态和相互关系，对颅部疾病的形态表达和空间定位诊断优于二维超声。     

彩色多普勒超声评价肝移植术后肝动脉血流动力学改变及其临床意义

目的 探讨肝移植术后肝动脉血流动力学改变及其临床意义。方法 回顾性分析术后接受了系列多普勒超声检查的42例肝移植患者，依肝右动脉阻力指数（RI）不同分为低阻力型（RI＜0．5）、阻力正常型（0．5≤RI＜0．8）、高阻力型（RI≥0．8）。分析术后肝右动脉收缩期峰值流速（PSV）和RI的变化及其与患者术后2月内病情转归的关系。结果 肝移植术后第1～3d肝右动脉RI测值中，64．3％为阻力正常型，26．2％为高阻力型，9．5％为低阻力型。肝右动脉PSV术后早期测值偏低，之后逐渐上升。RI值于术后早期测值偏高，之后逐渐减低。肝移植术后2月内死亡或危重的患者共9例，其中6例（66．7％）术后第1～3d肝右动脉PSV％30cm／s和（或）RI＜0．5。结论 肝移植术后早期肝动脉RI增高是一种常见的表现，与临床表现无关；术后早期肝右动脉PSV＜30cm／s和（或）RI〈0．5会导致术后早期高死亡率。     

超声造影在小肝癌诊断中的应用

肝癌是较常见且恶性程度很高的恶性肿瘤之一,早期诊断主要依赖各种影像学方法和血清甲胎蛋白的检测,但是由于小肝癌的超声表现缺乏特异性,即使应用彩色多普勒超声诊断仍存在较多困难。近年来,由于新型声学造影剂及其     

超声造影对少罕见局灶性肝病变的诊断价值

目的探讨超声造影对少罕见局灶性肝病变（FLL）的诊断价值及“快进快出”造影模式对少罕见FLL超声造影的诊断价值。 方法回顾分析2012年1月至2019年8月在华中科技大学同济医学院附属同济医院就诊的FLL患者的超声造影资料，人群发病率＜0.05%的病变纳入本研究少罕见FLL组，共纳入61个少罕见FLL病灶，其中33个病灶经MRI/CT检查。以病理结果为金标准，采用四格表评价超声造影、MRI/CT检查以及两者联合对少罕见FLL良恶性的诊断效能，并采用χ²检验比较不同检查方式之间诊断准确性的差异。 结果61个少罕见FLL中，超声造影正确诊断病灶良恶性的敏感度为51.9%（28/54）、特异度为85.7%（6/7）、阳性预测值为96.6%（28/29）、阴性预测值为18.8%（6/32）、诊断准确性为55.7%（34/61）。33个同期行MRI/CT检查的少罕见FLL，超声造影良恶性诊断的诊断准确性略高于MRI/CT检查（48.5% vs 39.4%），但差异无统计学意义（P＞0.05）。超声造影+MRI/CT联合对少罕见FLL良恶性诊断的准确性（69.7%）高于单独MRI/CT检查或超声造影，差异均具有统计学意义（χ²=6.111，P=0.013；χ²=3.070，P=0.046）。对于呈现“快进快出”造影模式的少罕见FLL，超声造影诊断符合率为18.8%（6/32）。实际工作中，超声医师结合临床表现与实验室检查后超声诊断原始报告的诊断符合率为56.3%（18/32），高于单独超声造影诊断，差异具有统计学意义（χ²=9.600，P=0.002）。 结论超声造影对少罕见FLL具有一定诊断价值，与MRI/CT联合应用可提高诊断准确性。对于“快进快出”造影模式的少罕见FLL的诊断，结合临床表现与实验室检查有助于提高诊断符合率。     

慢性肾功能不全肾内血流的彩色多普勒研究

目的　通过对慢性肾功能不全患者肾内血流的彩色多普勒研究 ,为临床评估肾功能损害程度提供新的指标。方法　 40例患者按血清肌酐水平的不同分为Ⅰ组 (氮质血症期 )和Ⅱ组 (尿毒症期 ) ,均行彩色多普勒检查 ,测量肾内叶间及弓状动脉的收缩期峰值流速 (PS)及阻力指数 (RI) ,并记录血清肌酐 (Cr)值。结果　①Ⅱ组患者叶间及弓状动脉的RI比Ⅰ组高 ,而PS比Ⅰ组低。②两组患者叶间及弓状动脉的PS均与Cr呈负相关 ,而RI均与Cr呈正相关。③RI较高的患者 ,Cr下降缓慢 ,甚或持续在一个较高的水平。结论　彩色多普勒测定肾内叶间及弓状动脉的血流参数 ,可为慢性肾功能损害程度的判断及预测其恢复速度提供一项新的有价值的方法。     

正常胎儿咽、喉、气管的超声研究

目的探讨超声对不同孕周正常单胎胎儿咽、喉、气管的显像能力，确定产前超声检查胎儿咽、喉、气管的最佳时期。方法对401例孕16～36“周正常单胎胎儿进行产前超声检查，将胎儿按孕周的不同分为A、B、C、D4组。其中，A组为16～20周^＋6，共93例；B组为21～25周”，共104例；C组为26～30周^＋6，共108例；D组为31—36周^＋6，共96例。记录并统计每组超声清晰显示胎儿咽、喉、气管的例数。结果401例正常单胎胎儿，超声清晰显示胎儿咽、喉、气管的例数分别为241例（60．1％）、314例（78．3％）、329例（82．0％），超声对喉、气管的显示率高于咽（P〈0．05）。超声清晰显示胎儿咽，A组44．1％，B组76．9％，C 70．4％，D组45．8％；超声清晰显示胎儿喉，A组58．1％，B组95．2％，C组94．4％，D组61．5％；超声清晰显示胎儿气管，A组65．6％，B组97．1％，c组95．4％，D组66．7％。超声清晰显示胎儿咽、喉、气管B、C两组明显高于A、D两组（P〈0．05）。结论超声可清晰显示胎JL＂N、喉、气管，其中喉、气管的显示率高于咽，超声观察胎儿咽、喉、气管的最佳时期为21～30周^＋6。     

声学造影剂联合野生型P53质粒治疗大鼠肝癌的实验研究

目的　探讨超声破坏造影剂微气泡介导裸质粒DNA治疗大鼠肝癌的有效性。方法　将 2 4只肝癌模型Wistar大鼠分成 4组。第 1组 ,瘤体内直接注入造影剂和野生型P5 3质粒的混合物 ,立刻用超声照射 ;第2组 ,注射混合物后不用超声照射 ;第 3组 ,注入裸质粒后用超声照射瘤体 ;第 4组 ,仅注入裸质粒而不行超声照射。 2d后 ,用半定量逆转录 -聚合酶链式反应法检测野生型P5 3mRNA在肝癌组织中的表达。结果　第 1组的P5 3mRNA表达明显增强 ,高于其他 3组 (P <0 .0 0 1) ,是第 4组的 6.88倍。第 3组高于未行超声照射组 (P<0 .0 5 ) ,是第 4组的 2 .16倍。第 2组与第 4组在基因表达上的差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　瘤体内直接注射造影剂和野生型P5 3质粒混合物后行超声照射 ,可明显增加裸质粒DNA的转录 ,是一种高效、安全的基因治疗方法。