麻疹血凝抑制试验中猴血球冷冻保存的研究

目的:延长新鲜猴血球保存期,解决麻疹血凝抑制试验中猴血球来源紧张问题.方法:猴子静脉无菌采血后置阿氏液中,将阿氏液保存的猴血球经500 r/min离心10 min,弃上清收取浓缩猴血球,与等量血球冷冻保存液混合,室温缓慢搅拌15 min后,分装保存于液氮中.结果:将液氮冷冻保存9个月的猴血球与新鲜猴血球比较,其对麻疹血凝素的敏感性和麻疹血凝抑制抗体的测定结果没有统计学差异(u=0.0123.P>0.5).结论:用液氮冷冻猴血球获得成功,并能替代新鲜猴血球.     

霍乱弧菌毒力基因检测与16S rRNA基因分型研究

目的：了解浙江省霍乱弧菌毒力基因携带情况和16SrRNA基因型状况，为霍乱防治提供科学依据。方法：利用16SrRNA基因探针分析了浙江省不同时期分离的88株霍乱弧菌经BglI消化的16SrRNA基因限制性酶谱，以多重PCR法对140株霍乱弧菌进行6种毒力相关基因（ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot）检测分析。结果：发现各菌株的杂交片断范围为2～12Kb，每个菌株有6～9条杂交带不等。88株霍乱菌株可分为9个16SrRNA基因型（ribotype，RT），其中埃尔托型霍乱弧菌（el tor vibrio cholerae，EVC）可分为6个RT，0139群霍乱弧菌（vibrio cholerae 0139，VC 0139）分为3个RT；所有VC0139菌株均携带3种以上毒力基因，86．3％的菌株携带全部6种毒力基因，所有EVC流行株均携带2种以上毒力基因，79．1％的菌株携带全部6种毒力基因。结论：认为霍乱流行菌株基因型的变迁可能是引起新一次流行的原因。结合毒素基因检测结果，我们认为VC0139与EVC在遗传特征上有相近的特点，但又有所区别。     

PCR快速检测甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原H-a研究

目的研究快速、特异、灵敏的检测甲型副伤寒沙门菌鞭毛特异相H-a的PCR法.方法选择甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原H-a基因的特异引物进行PCR扩增,检测甲型副伤寒沙门菌标准菌株和我省不同地区上送的57株甲型副伤寒沙门菌以及非甲型副伤寒沙门菌的其它菌株;将甲型副伤寒沙门菌标准菌株按10-1～10-9稀释后扩增比较PCR的检测灵敏度.结果所有甲型副伤寒沙门菌均在329bp处出现甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原基因产物,非甲型副伤寒沙门菌株PCR结果均为阴性;PCR检测下限为103cfu/ml.结论 PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏、简便,为临床诊断、实验室筛查以及流行病学快速查源、溯源提供了新的手段.     

浙江省1996—1997年伤寒,副伤寒病原学检测

伤寒、副伤寒在我省急性肠道传染病中占有特殊地位,严重影响人民群众的生活和健康。近几年来,我省局部地区发生多起伤寒、副伤寒的暴发流行,流行强度大,持续时间长,患者病情重,治疗费用高,给疫区的生产和经济造成重大损失。根据以往检测结果显示伤寒菌的耐药谱和噬菌体型别均有较明显改变,给伤寒的预防、治疗和控制带来许多新问题。为摸清近二年来伤寒、副伤寒菌株的耐药情况及伤寒菌的噬菌体分型情况,我们收集了各地菌株,对伤寒Vi阳性菌株进行vi噬菌体分型,并对所有菌株进行抗菌药物的敏感性测定,现将结果报告如下。     

12株疑似O157:H7大肠菌PCR鉴定研究

目的:对12株疑似O157:H7大肠菌采用PCR法进行鉴定。方法:利用单一PCR和多重聚合酶链反应(mPCR)检测不同来源菌株志贺样毒素(stx1和stx2)、溶血素(hly)、粘附抹平因子(eaeA)、β-葡糖醛酸糖苷酶(u idA)、O157抗原编码(rfbE)、H7鞭毛抗原编码(fliC)基因。结果:4株大肠菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157:H7,其中1株菌株扩增出全部毒力基因,另3株菌株扩增出除stx1外其它全部毒力基因;2株大肠菌rfbE基因检测阳性,确认为O157:H7-大肠菌;其它均为非O157:H7其它大肠菌。结论:PCR技术的应用能对可疑O157:H7大肠菌进行有效鉴定与分析,应成为今后病原学鉴定的主要技术手段。     

嗜肺军团菌基因检测及分子特征研究

目的:了解外环境水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征及遗传背景。方法:40株分离株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为LP1型嗜肺军团菌后,利用普通PCR技术对军团菌属5S rRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增,应用实时荧光定量PCR技术扩增嗜肺军团菌mip基因,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics Version 4.0软件进行聚类分析。结果:所有的菌株均带有属特异性5S rRNA基因及mip毒力基因,PFGE聚类分析结果显示大多数菌株的遗传相似度有一定差异。结论:所有菌株经普通PCR或定量PCR均相应扩增出其特征基因,PFGE聚类分析结果提示浙江省散在水系中分离的嗜肺军团菌菌株存在遗传多样性。     

浙江省台州市区中央空调冷却水军团菌污染调查分析

目的：初步了解台州市区中央空调冷却塔水中军团菌污染状况和血清型别,为制定控制措施提供依据。方法：采集台州市区25家公共场所集中式中央空调冷却塔水30份,经酸处理,以GVPC、BCYE、血平板进行菌落筛选,并应用生化反应、PCR鉴定,最后进行血清学分型。结果：30份冷却塔水军团菌检出率达56.67%（17/30）,其中酒店、办公楼、医院、商场的阳性率分别为68.75%、50.00%、42.86%、33.33%。17份水样中分离到25株军团菌,嗜肺军团菌占80.00%（20/25）,博杰曼军团菌占20.00%（5/25）,血清型别多样化,但以LP1为主,同一份水样同时检出2个或3个型别的占总检出水样的41.18%（7/17）。结论：台州市区公共场所中央空调冷却水中军团菌污染严重,血清型别多样化,对人群健康构成潜在威胁。     

浙江省人源猪链球菌鉴定及毒力基因检测分析

目的 鉴定浙江省2005-2020年散发猪链球菌感染者分离株血清型并检测其毒力基因,了解该地区临床致病株毒力基因的分布情况与分子流行病学特征。方法 收集猪链球菌感染者临床分离株,采用传统细菌学方法及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定的同时,利用聚合酶链(PCR)技术检测其链球菌属(tuf)、猪链球菌种(16S rRNA)、猪链球菌7型(Cps7H)、猪链球菌9型(Cps9D)与2型猪链球菌(Cps2J)/兼荚膜毒力基因以及毒力基因:溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、毒力相关序列(orf2)、纤连蛋白(fbps)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)等24种毒力基因携带情况。结果 28株人源分离株经综合鉴定均为2型猪链球菌,毒力基因群检测结果显示,除salKR毒力基因以及1株ZJ-31菌株外,96.43% (27/28) 的菌株均携带23种毒力基因;16S rRNA基因测序构建系统发育树,结果显示除来自2018年的ZJ-31菌株单独在另一分枝外,其它菌株同源性极高均在同一分枝。结论 浙江省十几年来散发猪链球菌病的人源分离株大多为2型猪链球菌强毒力株,遗传进化显示近年来已出现个别不同来源分枝群菌株。     

浙江省猪链球菌人源感染株的耐药检测分析

目的了解浙江省猪链球菌人源感染株在体外对抗菌药物的耐药性和耐药基因携带状况。方法收集2005年至2021年浙江省31株猪链球菌人源感染散发株, 通过微量稀释法测定15种抗菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度, 利用聚合酶链反应检测四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类等70种耐药基因。结果 31株菌株对头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、氯霉素、达托霉素、厄他培南、左氧氟沙星、利奈唑胺、美罗培南、青霉素、万古霉素11种抗菌药物均敏感, 敏感率达到96.8%及以上, 对四环素、克林霉素、阿奇霉素、红霉素均耐药, 特别是对四环素的耐药率达93.5%(29/31), 多重耐药株共14株(45.2%)。70种耐药基因检测中, 共检出14种(20.0%)耐药基因。耐药基因检出率高的主要为耐四环素类基因, 依次是tet(O) [58.1%(18/31)]、tet(M) [48.4%(15/31)]、tet(40) [35.5%(11/31)];其次是耐大环内酯类ermB基因[41.9%(13/31)];14株(45.2%)同时检出3种以上耐药基因, 其中8株(25.8%)检出10种耐药基因。耐药基因结果与序列分型结...     

霍乱弧菌几肿肠毒素基因的检测研究

目的：了解我省分离的霍乱弧菌中几种主要肠毒素基因的携带情况。方法；以地高辛标记基因探针，对我省历年分离的91株霍乱弧菌（包括EVC和VC O139）作霍乱肠毒素基因探针杂交检测。结果：EVC流行株和VC O139菌株中，普遍ctxAB,Zot,Ace等毒素基因，该3种基因的携带率分别达到100％，98．86％，96．59％，而EVC非流行菌株则均不携带上述3种毒素基因。结论：提示EVC流行株和VC O139菌株具备较强的产毒能力，流行性强，应重点加强监测与研究。从ctxAB原RFLP杂交图谱分析，EVC以流行株和VC O1390在遗传特征上具相近的特点，结果均显示2条阳性杂交带。