酪氨酸受体激酶B在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化

目的确定酪氨酸受体激酶Ｂ（ｔｒｋＢ）在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１，３，５，７，１０，１５和３０天，用原位杂交、斑点杂交和免疫组化技术对ｔｒｋＢｍＲＮＡ与蛋白作定性和定量观察。结果定性观察表明，在正常大鼠脊髓内，ｔｒｋＢｍＲＮＡ杂交产物主要分布在神经元和胶质细胞，神经纤维杂交反应不明显；脊髓损伤后阳性神经元和胶质细胞都有所增加，但阳性神经纤维增加的数目略为突出；胚胎脊髓植入损伤脊髓后，上述各阳性反应成分进一步增加，尤其是阳性神经纤维的增加更为显著。定量观察显示的ｔｒｋＢｍＲＮＡ的分子杂交反应与定性观察结果大体一致。免疫组化显色的ｔｒｋＢ蛋白，无论分布还是反应强度都与其ｍＲＮＡ的变化大致相符。结论损伤脊髓在移植修复过程中能够以调整受体合成的方式来适应营养环境的变化，但胶质细胞受体合成增加可能起了与神经成分争夺神经营养因子的副作用     

钙通道阻断剂治疗外伤性脑水肿的机理

通过大鼠神经细胞培养模型及脑外伤模型，观察了钙通道激动剂及钙通道阻断剂对培养神经元钙离子通道电流（ICa）的影响，检测了外伤后脑组织含水率、脑脊液中兴奋性氨基酸（EAA）含量及分离神经元ICa的变化，以及尼莫地平对其影响。结果显示，BayK8644、Glu、Asp可使培养神经元ICa增加，并存在明显的剂量依赖关系。尼莫地平对ICa有明显抑制作用。外伤后脑组织含水率、脑脊液EAA含量均较对照组明显增加（P＜0．05），用尼莫地平治疗后两者均明显下降（P＜0．05）。尼莫地平使伤侧分离神经元ICa下降明显大于健侧（P＜0．05）。结果证明，尼莫地平能减轻脑水肿、抑制脑外伤后EAA释放及直接减少神经元钙通道电流（Ca2+内流），明确了钙通道阻断剂治疗外伤性脑水肿的部分机理。     

严重创伤早期大鼠下丘脑HSP70与iNOS表达分布及意义

目的研究严重创伤早期大鼠下丘脑热休克蛋白70(HSP70)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)转录表达变化分布和意义。方法采用BIM-Ⅲ型生物撞击机致大鼠胸部严重撞击伤,并造成单侧股骨骨折,运用S-ABC免疫组化、原位杂交技术测定下丘脑HSP70与iNOS及其mRNA的转录表达水平。结果正常对照组HSP70低水平表达,在伤后1h即开始明显增高(P<0.05),6h达到峰值为正常的18倍,12h后开始下降,24h时主要集中在室旁核内;iNOS无基础表达,在伤后1h开始出现,随HSP70同步增高,8h达到高峰,较1h时增加13倍。两者相关系数r=0.97601。结论严重创伤后早期下丘脑内HSP70和iNOS过度表达,在严重创伤应激时下丘脑的损伤与抗损伤机制中起重要作用。     

脂质体包裹mA20及其突变体质粒转染对内毒素血症小鼠的治疗作用

目的研究脂质体包裹A20及其突变体mA20-ZnF4-7(mA20Δ)质粒对脂多糖(LPS)攻击所致内毒素血症小鼠的治疗作用。方法用LPS攻击小白鼠制备内毒素血症动物模型。随机分为:生理盐水对照组(NS组)、单纯内毒素组、空质粒组、脂质体包裹mA20质粒治疗组(L-mA20组)、脂质体包裹mA20Δ质粒治疗组(L-mA20Δ组)。以ELISA检测各组血浆TNF-α、IL-1β表达,并于12h时间点观察组织病理变化。结果(1)L-mA20组和L-mA20Δ组的TNF-α在各时间点表达(pg/mL)分别为:6h(304.696±6.087)(、304.985±6.291),12h(321.217±10.579)、(256.580±33.524),24h(307.594±11.181)(、280.348±11.698);与单纯内毒素组、空质粒组的TNF-α表达比较有显著性降低(P<0.05)。(2)L-mA20组和L-mA20Δ组的IL-1β在各时间点表达(pg/mL)分别为:6h(256.989±3.921)、(263.655±5.645),12h(205.724±4.827)、(154.690±1.380),24h(165.724±7.772)(、101.816±3.259);依时间有显著性下降趋势;与单纯内毒素组、空质粒组的IL-1β表达比较有显著性降低(P<0.05)。(3)病理观察结果显示:L-mA20组和L-mA20Δ组的肝、肺损伤均较单纯内毒素组、空质粒组轻;与NS相比,肝、肺损伤无明显差别。结论尾静脉注射被脂质体包裹mA20及其突变体mA20-ZnF4-7质粒对内毒素血症小鼠有相似的治疗作用,为临床应用结构更简单的A20蛋白提供了一定实验基础。     

锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究

目的 探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用.方法 以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法 ,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-α、IL-1β水平以及肝脏病理损伤的保护.结果 A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均＜0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义.病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻.结论 A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤.     

急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达及其与TNF-α和IL-6的相关性

目的 调查急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达及其与血液TNF-α和IL-6水平的相关性,初步探讨锌指蛋白A20在急性脑梗死缺血性炎症损伤中的作用.方法 采用流式细胞学分析技术和适时荧光定量PCR技术分别测定42例急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达,并用ELISA技术测定血液TNF-α和IL-6浓度,与50例同期健康对照组进行比较.结果 急性脑梗死组患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平较健康对照组明显增高,且以发病后第1天锌指蛋白A20表达水平最高(P＜0.01),之后快速降低,与血液TNF-α和IL-6浓度呈现正相关关系.结论 锌指蛋白A20可能参与了急性脑梗死缺血性炎症损伤的自我保护过程,其机制可能是抑制核转录因子NF-κB和NF-IL-6,进而下调促炎细胞因子的表达干预脑组织的炎症损伤.     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在豚鼠卡那霉素慢性中毒耳蜗螺旋神经细胞凋亡中的作用

目的:探讨在天冬氨酸残基后进行裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡中的作用。方法:实验于2004-01/12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。20只豚鼠随机分为正常对照组10只和卡那霉素耳慢性中毒组10只。卡那霉素耳慢性中毒组连续14d肌肉注射硫酸卡那霉素200mg/(kg·d),正常对照组连续14d等量肌肉注射生理盐水;用药前后测试听力,停药14d处死动物后制作耳蜗标本,透射电镜、原位末端标记技术观察螺旋神经节细胞凋亡情况及免疫组化法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。结果:实验豚鼠20只均进入结果分析。①听性脑干反应:卡那霉素耳慢性中毒组听脑干反应阈值较正常对照组明显上升(43.20±6.73,5.60±1.78,P<0.01),听力下降明显。②透射电镜观察结果:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重,核变形,线粒体肿胀,粗面内质网增多;正常对照组螺旋神经节细胞核无变化,核仁基本居中,线粒体结构正常。③原位末端标记显示:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞出现凋亡现象,愈近底回愈多,愈近顶回则愈少,正常对照组无凋亡现象。④免疫组化显示:卡那霉素耳慢性中毒组螺旋神经节细胞有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性反应,与正常对照组比较,有显著性差异。结论:卡那霉素耳慢性中毒可致螺旋神经节细胞发生凋亡并半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性表达,导致听力下降。     

听力阈值变化与卡那霉素耳慢性中毒豚鼠耳蜗细胞凋亡

目的：探讨卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法：实验于2003-01／12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。75只豚鼠随机分为正常对照组(n=15)，卡那霉素耳慢性中毒组(n=60)。卡那霉素耳慢性中毒组进行硫酸卡那霉素200mg／(kg&;#183;d)连续肌肉注射14d，根据停药时间分为卡那霉素停药1，3，7，14d组，每组15只。分别处死正常对照组及卡那霉素停药1，3，7．14d组豚鼠，处死前检测其听脑干反应的变化，处死后以原位末端标记技术及耳蜗毛细胞核荧光染色计数等检测耳蜗细胞凋亡情况。结果：①豚鼠连续应用卡那霉素14d，停药1d耳蜗细胞即出现凋亡现象(原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器0．69&;#177;0．57，螺旋神经节1．22&;#177;0．51．血管纹1．01&;#177;0．67)，随停药时间延长，耳蜗细胞凋亡数增多(14d组原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器4．91&;#177;0．94，螺旋神经节8．84&;#177;1．35，血管纹7．39&;#177;1．63)，且愈近底回愈多，愈近顶回则愈少．对照组无凋亡现象。②豚鼠卡那霉素耳慢性中毒后，随停药时间延长，听脑干反应阈值14d组为43，20&;#177;6．73，正常对照组为5，60&;#177;1．78，14d组较正常对照组明显上升(P&;lt;0．01)。结论：①卡那霉素耳慢性中毒可引起耳蜗细胞发生凋亡，细胞凋亡是豚鼠耳蜗损伤的一条途径。②耳蜗细胞凋亡可能是卡那霉素耳慢性中毒听力损伤的形态学基础之一。     

谷氨酰胺酶生物合成的研究进展

本文概述了肾型和肝型谷氨酰胺酶蛋白质结构、分离及特性，并着重介绍了谷氨酰胺酶生物合成及其调节与加工的研究进展。     

高原与平原冲击波物理参数和生物效应的比较研究

目的比较高原冲击波与平原冲击波的物理参数和生物效应。方法实验猪25只，随机分为高原组15只和平原组10只，分别布放于距离爆心5．0m和6．0m处，用10kg TNT爆炸致空气冲击伤，用压力传感器测定冲击波物理参数，观察伤后28h动物存活情况和大体形态学改变。结果高原组与平原组相比，冲击波传播速度两组间差异未见显著性，高原组超压峰值总体趋势稍低于平原组，但正压持续时间和冲量总体趋势略高于平原组。伤后28h高原组动物存活12只，平原组存活8只。病理形态学改变主要表现为不同程度的肺出血和肺水肿，部分动物有肠道浆膜下出血和心内膜下出血，高原组与平原组相比，肺损伤程度更重，可加重1个等级。结论高原环境下冲击波传播速度未见明显改变，超压峰值有所降低，持续时间和冲量有所增加，肺损伤程度更重。