骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.     

肿瘤坏死因子α诱导的胰岛素抵抗对糖脂代谢相关细胞因子的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的胰岛素抵抗（IR）对小鼠糖脂代谢相关细胞因子的影响。方法用静脉葡萄糖耐量试验和3-[^3HI葡萄糖为示踪剂的扩展胰岛素钳夹技术评价不同TNF-α剂量组及对照（NC）组小鼠胰岛素敏感性和糖脂代谢的变化,用RT-PCR、western blot和ELISA测定脂联素和内脏脂肪素表达水平的变化。结果HTNF-α组小鼠FBG、Ins、FFA水平及糖耐量和胰岛素释放水平变化较MTNF-α和LTNF-α组更明显。胰岛素钳夹术中,与NC组相比,HTNF-α组Ins对FFA的抑制作用明显障碍,葡萄糖输注率明显降低,基础葡萄糖清除率（GRd）和肝糖输出率（HGP）明显升高。钳夹稳态时,HTNF-α组GRd的增加明显低于NC组,NC组HGP被完全抑制,而HTNF-α组仅被部分抑制。HTNF-α组脂肪组织脂联素和内脏脂肪素mRNA表达及血浆脂联素和内脏脂肪素水平也明显低于NC组。结论脂联素、内脏脂肪素的变化在TNF-α诱导的IR中可能具有重要作用。     

血小板活化因子在病毒性肝炎中的变化及意义

目的　探讨血小板活化因子 (PAF)、血清肿瘤坏死因子α(TNF α)、丙二醛 (MDA)和血浆内毒素 (ET)等指标在病毒性肝炎中的变化和意义。方法　分别采用反相高效液相色谱测定法(rHPLC)和生物学法、双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)、鲎试验 (LLT)、硫化巴比妥酸法 (TBA)对 6 0例健康对照者、2 1例急性肝炎、85例慢性肝炎、2 6例重型肝炎患者进行血PAF、TNF α、ET和MDA等指标的测定、分析。结果　rHPLC法与生物学法比较 ,两者呈较好的相关性 (r =0 .912 )。肝炎患者血PAF、TNF α、内毒素和MDA值均明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)。重型肝炎患者血中PAF水平与ET、TNF α水平呈显著正相关 (r =0 .892 ,P <0 .0 1;r =0 .76 7,P <0 .0 1) ;血清TNF α水平与内毒素水平成正相关 (r =0 .86 3,P <0 .0 1)。结论　rHPLC法测定PAF可靠 ,能正确地反映血中PAF水平 ;联合测定血PAF、MDA、ET、TNF α有助于检测病毒性肝炎的进行性损害程度及预后判断 ,有助于推动病毒性肝炎的基础与临床研究。     

成纤维细胞生长因子-21表达变化对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子受体及脂肪细胞因子的影响

目的 探讨FGF-21表达变化对FGF相关受体(FGFRs)和脂肪细胞因子表达的影响.方法 设计并构建2条针对小鼠FGF-21基因的短发夹状RNA(shRNA)序列,运用双荧光蛋白检测系统初步验证其有效性,筛选出抑制有效的pGenesil-FGF21重组质粒,分别用FGF-21过表达质粒pcDNA-FGF21和FGF-21 RNAi表达载体pGenesil-FGF21转染3T3-L1脂肪细胞,采用荧光定量PCR法检测FGF-21、FGFRs、脂联素、Visfatin以及瘦素(Leptin) 的mRNA表达水平.结果 成功构建2条FGF-21-shRNA重组质粒.转染上述重组载体的细胞内,两组pGenesil-FGF21 GFP平均荧光强度/RFP平均荧光强度均低于阴性对照组(均P<0.05),且pGenesil-FGF21-1组更低.转染pcDNA-FGF21的3T3-L1脂肪细胞内FGF-21 mRNA表达明显增加(P<0.01),转染pGenesil-FGF21-1的细胞内FGF-21 mRNA表达降低77.8%(P<0.05).FGF-21过表达的脂肪细胞内以β-klotho和FGFR1 mRNA表达明显升高,而Leptin mRNA表达明显降低;而FGF-21表达缺陷时则相反(均P<0.05).结论 FGF-21可能主要通过β-klotho和FGFR1途径激活受体后信号系统,并且可能通过影响脂肪细胞因子表达从而对代谢发挥其调控作用.     

RNAi介导的脂联素基因沉默对ApoE基因敲除小鼠糖脂代谢的影响

探讨脂联素基因表达缺陷对ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠糖脂代谢的影响.注射短发卡RNA(shRNA)腺病毒后高脂喂养的ApoE~(-/-)小鼠(ADI组)血浆脂联素水平明显低于普食喂养(NF)、单纯高脂喂养(HF)和空载腺病毒高脂对照组(GF,均P<0.01).3组高脂喂养的APOE~(-/-)小鼠体重、空腹血糖、血浆游离脂肪酸、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血浆胰岛素水平明显高于NF组(均P<0.01),而ADI组与HF和GF组相比,游离脂肪酸、总胆同醇、甘油三酯、LDL-C、HDL-C和血浆胰岛素水平增高更为明显(P<0.01或P<0.05),提示长期高脂饲养和脂联素基因表达缺陷使ApoE~(-/-)小鼠具备较为典型的糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗的病理生理表现.     

草铵膦和百草枯混合中毒1例报告

报道1例口服标注“草铵膦”农药出现口腔溃疡、顽固性低氧血症、肝肾功能衰竭等与百草枯中毒症状相似患者的临床诊治经过,最终从该农药中检出百草枯成分。建议临床医生接诊中毒患者后,对于毒物不明或临床症状与患者所提供的毒物不符者,应尽早进行毒物检测,以免贻误最佳救治时机。     

多氯联苯、苯并(a)芘及其联合作用对人胚肺细胞热休克蛋白70表达的影响

目的 研究多氯联苯1254(Aroclor 1254)、苯并(a)芘(BaP)及其联合作用下人胚肺(HEL)二倍体细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达规律及其可能的意义.方法 培养HEL细胞,作如下处理:Aroclor 1254处理组:细胞接受不同剂量Aroclor 1254(6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L)处理24 h;Aroclor 1254 BaP联合作用组:细胞先按Aroclor 1254处理组方案预处理,24 h后37℃恢复1 h,再以50 μmol/L BaP染毒2 h;同时设立苯并(a)芘(50 μmol/L,染毒2 h)和DMSO(10 mL/L)分别作为阳性对照组和溶剂对照组.利用免疫印迹方法(Western-blot)检测HEL细胞中HSP70、β-actin的表达水平,采用灰度比(HSP70/β-actin)定量分析.结果 Aroclor 1254处理组,不同浓度多氯联苯1254(6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L)处理后,灰度比分别为0.98±0.05、0.97±0.09、0.99±0.06、0.95±0.08,与溶剂对照组(0.99±0.05)及阳性对照组(1.01±0.06)相比无明显变化(P＞0.05);联合作用组,灰度比随多氯联苯1254浓度的增加而逐渐下调,分别为0.89±0.03、0.83±0.02、0.81±0.05、0.72±0.03,与溶剂对照组及阳性对照组相比均明显下调(P＜0.05).结论 HSP70表达下降可能与多氯联苯1254增强BaP代谢活化产物的遗传毒性作用有关.     

新产程标准实施后对产程中剖宫产率、剖宫产指征及母婴并发症的影响

目的探讨新产程标准实施后剖宫产率、剖宫产指征及母婴并发症发生情况。方法回顾性分析2015年南京市高淳人民医院实行传统产程管理分娩的1 100例产妇(对照组)与2016年5月至2017年4月采取新产程标准管理分娩的960例产妇(研究组)的临床资料,比较两组产妇分娩方式、剖宫产率、剖宫产指征及母婴并发症发生情况。结果研究组剖宫产率明显低于对照组(20. 94%vs 37. 91%,P <0. 05);阴道分娩产妇中,研究组人工干预率低于对照组(P <0. 05)。研究组产妇潜伏期时间及第一产程时间均长于对照组(P<0. 05);研究组潜伏期延长、活跃期停滞、相对头盆不称、会阴撕裂等发生率低于对照组(P <0. 05);研究组产后出血、产褥感染、新生儿窒息发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论新产程标准实施下充分评估可有效减少产前干预,有助于促进产妇自然分娩。     

血小板活化因子反相高效液相色谱法测定及其在老年性疾病中的应用

目的 建立血小板活化因子(PAF)的反相高效液相色谱(rHPLC)检测法,与生物学检测法比较,探讨其在老年脑梗死、高血压、冠心病等疾病中的意义。方法 采用rHPLC对100例健康对照者、23例脑梗死、28例高血压病、65例冠心痛患者血PAF进行分析。结果 rHPLC法与生物学法相关性较好,操作简便,重复性好,灵敏度高,干扰因素少。脑梗死、冠心痛患者血PAF值显著高于参考值（P＜0．01);高血压病组与对照组比较,无显著性差异(P＞0．05)。结论 rHPLC法测定PAF更具可靠性,更能正确地反映血中PAF水平;有助于进一步推动PAF的临床与基础研究。