9L/Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型的建立

目的建立稳定的9L／Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型。方法构建稳定表达萤火虫荧光素酶PGL的9L细胞株9L^lvc，采用立体定向手术，在Wistar大鼠右侧尾状核接种DAPI荧光标记的9L^lvc细胞，分别于接种后第7，14，21天通过Xenogen活体动物体内成像系统检测肿瘤的生长情况，并断头取材，观察肿瘤的形态学变化，采用免疫组化的方法检测肿瘤细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（Vemintin）的表达。结果大鼠接种9L^lvc细胞后成瘤率100％。活体成像显示细胞接种后第7天到第21天肿瘤呈逐渐增大趋势。组织切片结果显示肿瘤与周围脑组织边界较清楚，未见包膜；瘤内新生血管丰富，可见出血。肿瘤组织免疫组织化学GFAP及Vemintin蛋白染色阴性。结论该方法建立的大鼠脑胶质肉瘤模型稳定可靠，符合恶性胶质肉瘤的生物学特征．是理想的脑胶质肉瘤实验研究材料。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测初步研究

目的 以乙型肝炎病毒（HBV）C基因启动子（CP）变异来探讨HBV准种的存在意义。方法 设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBVCP序列，克隆入pGEMTeasy质粒，随机挑战37个克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果 测序发现HBVCP序列是变异的高发区，在直接重复序列（DR）I上游存有一缺失突变高发（48．7％，18／37）区，缺失突变与替换突变在TATA样盒TA2、TA3区发生率较高，而TA4极为保守。结论 CP区内有一缺失高变区，TA2、TA3的变异影响前C蛋白的表达，但该区的变异不影响前基因组RNA的转录。结果提示，HBV长期携带者体内有HBV准种共存。     

人脑少突胶质细胞的培养与鉴定

少突胶质细胞是中枢神经的成髓鞘神经胶质细胞，它包绕神经纤维的轴突形成髓鞘，对轴突正常的电传导功能有重要作用。将少突胶质细胞移植人髓鞘形成障碍或脱髓鞘的中枢神经系统内，可揭示髓鞘形成和再生机制。由于体外培养的少突胶质细胞与其在体内的特性相关,因此通过体外培养研究可了解少突胶质细胞的存活、增殖、分化和发育过程中的细胞生物学变化。然而中枢神经系统具有细胞多样性，它包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞，所以必须对少突胶质细胞进行体外纯化。     

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒（HBV）前C／C基因异质性来探讨在慢性感染者体内是否存在HBV准种。以中国株HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自4例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV前C／C基因序列，克隆入pGEM Teasy载体，每例患者挑选5个克隆测序以比较病毒的变异程度。测序结果发现同一患者前C／C基因碱基序列之间的同源性大于98％，但存有G83→A替换、C抗原内部缺失、移框突变等多种变异类型。结果提示，HBV长期携带者体内有HBV准种共存，推测前C／C区的多种变异可能与感染慢性化有关。     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

采用噬菌体表面展示技术，以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原，从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附－洗脱－扩增”筛选过程，获得抗原行异性和结合活性较强的HCV E2人源单链可变区抗体（ScFv)片段，片段为771bp,阳性克隆，对其进行免疫学检测，并对HCV E2特异性ScFv的编码基因序列进行测定分析。结果筛选得到的HCV E2 ScFv片段（771bp)具有结合HCV E2抗原的生物学活性和特异性。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ基因启动子 (ＣＰ)变异来探讨ＨＢＶ准种在慢性感染者中的存在意义。以中国株ＨＢＶ基因序列为依据 ,设计特异性聚合酶链反应 (ＰＣＲ)引物 ,自 3例慢性ＨＢＶ感染患者外周血血清中扩增ＨＢＶＣＰ序列 ,克隆入 ｐＧＥＭＴｅａｓｙ质粒 ,随机挑选克隆进行ＤＮＡ测序以确定病毒的变异程度。测序结果发现ＨＢＶＣＰ序列高度保守 ,但在ＴＡＴＡ样盒 ( 1 3)可发生多种点突变 ,其中 184ｎｔ(Ｔ→Ｃ)位替换突变最为常见。在直接重复序列 (ＤＲ)Ｉ上游存有一缺失突变高发区。ＣＰ区内有一缺失高变区 ,ＴＡＴＡ样盒 3的变异…     

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白的人源单链可变区抗体（ＳｃＦｖ）的原核表达载体,并在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达可溶性的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ。以重组的ＨＣＶ核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经ＮｃｏⅠ／Ｎｏｔ Ⅰ酶切鉴定,该ＳｃＦｖ基因由７５０ｂｐ组成。将其亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ表达载体中,转化大肠杆菌ＪＭ１０９,提取质粒进行ＤＮＡ序列测定,符合ＳｃＦｖ的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。ＩＰＴＧ诱导转化的大肠杆菌ＪＭ１０９,在其培养上清中获得了可溶性ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ的表达。酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）证实表达的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡ     

乙型肝炎病毒囊膜中蛋白与白细胞介素18联合基因免疫

目的　构建HBV囊膜中蛋白核酸疫苗表达载体并免疫小鼠 ,观察白细胞介素 18(IL 18)对基因免疫的辅助作用。方法　构建质粒 pVR10 12 M、pcDNA 3 .1- IL 18,肌内注射法免疫 2 5只Balb/c小鼠 ,3组小鼠分别注射 10 0 μgpVR10 12 ,pVR10 12 M ,pVR10 12 M和 pcDNA 3 .1- IL 18质粒 ,每 2周 1次 ,共 3次。每次免疫 2周后眼眶采血 ,检测血清抗 HBs,第 3次免疫后 2周应用乳酸脱氢酶检测法验证特异性细胞杀伤率。结果　经注射上述质粒后 ,可观察到注射 pVR10 12 M组的小鼠随免疫次数的增加 ,抗 HBs阳性率、抗体滴度均逐步增高 ;同时联用质粒 pcDNA 3 .1- IL 18的小鼠抗 HBs阳性率、抗体滴度均较单独应用 pVR10 12 M组为低 (第 3次免疫后抗 HBs阳性率、抗体滴度两组比较P <0 .0 5 )。细胞毒性实验证实联用组的细胞杀伤率为 (89.0 2± 15 .5 4) % ,较单独应用pVR10 12 M组 (83 .0 8± 14 .0 2 ) %为高 ,但两组之间差异无显著性。 结论　注射质粒 pVR10 12 M可诱导小鼠产生足量的抗 HBs ,并可检测出特异性细胞免疫反应 ;联合应用IL 18对特异性体液免疫有抑制作用 ,对特异性细胞免疫可能有增强作用     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

探讨乙型肝炎病毒（HBV）在慢性患者中存在状态，以HBV基因序列为依据。设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例慢性患者体内扩增HBV全S基因片段，克隆入T载体。限制片段长度多态性（RFLP）法确定HBV的变异现象，DNA测序确定病毒的变异程度，质粒EcoRI酶切RFLP结果提示自2例患者血清中克隆出的29和28个阳性克隆中各有5种不同的长度带型，PCR产物XhoI酶切RFLP结果则表现为高度保守，测序结果发现HBV体内毒株碱基序高度一致，同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于97%。本结果提示HBV慢性患者体内有HBV准种共存，且呈现出一定的优势克隆现象。