乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异研究

以乙型肝炎病毒（HBV）多聚酶（P）和逆转录酶（RT）区及表面抗原主蛋白（HBsAg)序列异质性来探讨HBV准种群状态。用多聚酶链反应（PCR）方法,自3例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体。随机挑选13株克隆测序,发现2株克隆出现大段缺失,另11株序列之间总差异率为5．1％;RT和HBsAg氨基酸序列差异率分别为4．9％和7．5％;并发现缺失突变、终止突变等多种突变类型。结果提示,HBV慢性患者体内有HBV准种群,并存在缺陷型HBV病毒。     

大鼠肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

根据大鼠肝再生增强因子(Augmenter of liver regeneration，ALR)cDNA序列设计特异性引物，采用多聚酶链反应(PCR)法自Wistar大鼠基因组DNA中扩增出大鼠ALR基因组DNA，全长为1508nbp，结构为3个外显子和2个内含子，外显子长度分别为18bp、197bp和163bp，各编码6个、64个和55个氨基酸残基，长度与小鼠、人类ALR的外显子一致。     

外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法 采用特异性引物设计,以多聚酶链反应（PCR）自身患者血清中扩增全S基因片段,测序以明确变异的部位,并与既往已发表的HBV adr亚型进行序列比较。结果 经测序发现慢性HBV感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因,并存有HBsAg和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论 在外周血中存在HBV截短型囊膜蛋白编码基因,可能与患者不良预后有关。     

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活SV40病毒早期启动子的研究

聚合酶链反应（PCR）扩增HBV X基因,克隆至真核表达载体pVR1012中,构建HBV X基因重组表达载体pVR102-X;以该质粒转染HepG2细胞,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞X蛋白的瞬时表达,与报告质粒pSV-lacZ共转染H G2爱细胞,用试剂盒法检测β-半乳糖苷酶表达活性。结果质粒pVR102-X在HepG2细胞瞬时表达X蛋白,共转染实验中pVR102-X组β-半乳糖苷酶的表达是空质粒对照的3．2倍。表明构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表,并能够反式激活SV40病毒早期启动子。     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）准种在慢性乙型肝炎患者中的存在状态。方法 以已知中国株HBV基因序列为依据。设计特异性聚合酶链反应（PCR）引物,自3例慢性乙型肝炎患者体内扩增HBV全S基因片段,克隆人pGEMTeasy质粒,用限制性片段长度多态性（RFLP）法确定HBV的变异现象,DNA测序确定病毒的变异程度。结果 分别自3例患者血清中克隆出29、28和8个阳性克隆,以EcoRⅠ酶切患者1和2的RFLP结果提示各有5种不同的长度带型,PCR产物XhoI酶切RFLP结果表现为高度保守,测序结果发现HBV体内毒株DNA序列高度一致,同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于97%。结论 慢性乙型肝炎患者体内有HBV准种共存,且呈现出一定的优势克隆现象。可能与患者预后有关。     

HCV非结构蛋白NS5A人源单链可变区抗体基因的筛选与鉴定

目的 筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS5A的人源单链可变区抗体（ScFv)的编码基因,为HCV NS5A蛋白质生物学功能的研究及抗HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法 采用噬菌体表面展示技术,以重组纯化的HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的HCVNS5A人源单链可变区抗体基因片段的阳性克隆,并对其进行免疫检测及序列测定,结果 筛选得到的ScFv片段基因核苷酸序列为789nt,编码由262个氨基酸残基组成的多肽,具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有HCV NS5A蛋白反应的免疫学活性和特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术,成功获得了HCV NS5A人单链可变区抗本ScFv编码基因,并获得了可溶性单链抗体的表达。     

CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT

INTRODUCTIONThegeneofaugmenterofliverregeneration（ALR）wasidentifiedbytwodifferentways．In１９９４，Hagiyaandhiscolleagues（１）clonedthecDNAofALRofrat，andtheyprovedthattheALRwasthekeycomponentofhep－aticstimulatorsubstance（HSS）．Basedonthehighho－mol     

HBsAg与抗-HBs同时阳性者体内S基因序列分析

目的 报告乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）／表面抗体（抗－HBs )同时阳性患血清中S区编码碱基序列及基氨基酸序列的为异特点。方法 以adr亚型的HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例HBsAg/抗－HBs均阳性的患体内扩增的HBV全S基因片段，克隆入pGEMTasy质粒，DNA测序确定病毒的变异特点。结果 测序结果发现双阳患与HBsAg阳性患血清中的HBV全S基因比较，核苷酸序列有4个核苷酸位点（0．3％）的替换突变，表面抗原氨基酸序列无特异性替换突变，但HBV多聚酶的间隔区氨基酸序列有3个位点的特异性替换突变。结论 HBV长期携带体内有HBV准种共存：HBsAg与抗－HBs同时阳性的原因不能归因于病毒的变异，应归结于患免疫系统的个体化反应。     

乙型肝炎病毒基因组准种与变异特点的研究

探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因组异质性及其生物学意义。以已知HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列，克隆入pGEM Teasy质粒，随机挑选克隆进行DNA测序并加以比较。测序结果发现，来源不同的5株HBV全基因组核苷酸序列的一致率为93．6％，不同克隆的4个开放读码框架长度有明显区别，氨基酸序列中存有移框、缺失、替换等多种变异类型。说明来源于同一患者的HBV基因组序列之间存在有较明显的变异现象，在患者体内构成了准种群。     

乙型肝炎病毒X基因准种与变异特点的研究

以乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｘ基因序列的异质性表现来探讨ＨＢＶ准种在慢性感染者中的存在状态。用中国株ＨＢＶ基因序列为依据 ,设计特异性聚合酶链反应 (ＰＣＲ)引物 ,自 3例慢性ＨＢＶ感染患者血清中扩增ＨＢＶＸ基因 ,克隆入 ｐＧＥＭＴｅａｓｙ质粒 ,随机挑选克隆进行ＤＮＡ测序以确定病毒的变异程度。测序结果提示 ,来源于不同患者ＨＢＶＸ基因序列高度保守 ,序列同源性为 98.9%～ 99.8% ,但每个序列均不一致 ,符合准种判断标准。Ｘ区存在广泛的点替换突变 ;缺失突变占测序克隆总数的 33.3% ,变异区域集中于 12 3位氨基酸编码核苷酸之后…