NF-κB p50亚基同源结构域相互作用多肽的筛选

目的：应用酵母双杂交技术筛选获得与核因子κB（NF-κB）p50亚基同源结构域（RHD）相互作用的多肽。方法：应用酵母双杂交技术，以NF—κBp 50 RHD为诱饵，筛选16肽cDNA文库，寻找与其相互作用的多肽，应用β-gal试验、酵母交配试验及一对-酵母回复性杂交等方法筛除假阳性克隆，确定阳性克隆。结果：经酵母双杂交及反复的排查，共获得8个阳性克隆。通过GenBank进行检索，未发现与之相匹配的蛋白序列。结论：获得8个与NF-κB p50 RHD相互作用的新型多肽，多肽的功能需进一步验证。     

2型糖尿病非收缩性难愈伤口模型的建立

背景：目前糖尿病创口的难愈性给临床的治疗增加了极大地困难。 目的：建立2型糖尿病状态下非收缩性难愈伤口的动物模型。 方法：高脂饮食喂养联合低剂量链脲佐菌素诱导形成大鼠2型糖尿病模型,在其背部造成圆形创面,用硅树脂固定伤口,模拟人类创面愈合过程,病理切片检查创面周缘肉芽组织皮肤厚度、微血管密度、胶原纤维及胶原蛋白水平的变化。 结果与结论：与正常组相比,链脲佐菌素注射72 h后高脂饮食喂养大鼠的空腹血糖、血清三酰甘油及胆固醇均明显增加,差异有显著性意义(P < 0.05~0.01);创伤后第1,3,5,7,14天,糖尿病组与正常组相比皮肤厚度、微血管密度、胶原纤维及胶原蛋白水平均有明显下降(P < 0.01)。提示高脂喂养联合链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病的方法简便有效;创伤后检测指标均证明糖尿病大鼠比正常大鼠创面难愈。     

核因子-κB圈套寡核苷酸对核因子-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响

目的 探讨核因子(NF)-κB圈套寡核苷酸(ODN)对NF—κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。方法 利用电泳迁移率改变实验(EMSA)，测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF—κB的DNA结合能力的竞争抑制作用；利用NF—κB反应性报告细胞株HEK-不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)，观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠96只，随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织NF—κB的DNA结合活性，用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测大鼠肝脏组织TNF—α、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平，酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF—α)、IL-6的蛋白水平。结果 设计的环状哑铃形圈套ODN对NF—κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用，1μg／ml和2μg／ml圈套ODN瞬时转染HEK—d2EGFP，可明显抑制p65蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后3h，肝脏NF—κB活性开始升高，伤后12h达高峰。肝脏组织TNF—α、IL-6mRNA水平和蛋白水平也明显上升，与NF—κB的活性改变一致。圈套ODN治疗后，大鼠肝脏组织TNF—α、IL-6的表达明显下降，肝脏功能明显好转，而无关ODN则没有治疗效果。结论 设计的靶向NF—κB的环状哑铃形圈套ODN可通过特异性抑制NF-κB活性，有效阻止创伤性炎症大鼠肝脏炎症介质TNF—α、IL-6的释放，从而改善肝脏功能。     

靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφTNFα表达的实验研究

目的　本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法　以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果　哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论　靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。     

mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖

目的 探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制.方法 采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～ 100 μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达.结果 与对照组比较,浓度为1～ 100 μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P＜0.05).用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P＜0.05),4E-BP1表达明显上调.p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P＜0.05).结论 黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖.     

CD14与TLR4相互作用的实验研究

目的探讨CD14与TLR4(toll-like receptor 4, TLR4)在介导LPS膜信号转导中的相互作用.方法通过PCR分别克隆CD14 cDNA和TLR4胞外区cDNA,构建其酵母表达载体,将载体共转化酵母细胞行酵母双杂交实验.同时,应用Pull-down和免疫共沉淀实验在体外及体内进一步鉴定CD14与TLR4的相互作用.结果 PCR扩增获得了CD14 cDNA和TLR4胞外区cDNA,并成功地构建了pGADT7 AD-CD14和pGBKT7 BD-TLR4酵母双杂交质粒.酵母双杂交系统检测显示pGADT7 AD-CD14和pGBKT7 BD-TLR4质粒均无自主激活报告基因LacZ表达的能力,在酵母细胞中CD14和TLR4之间存在相互作用.Pull-down结果也显示,在体外反应体系中,CD14和TLR4间存在相互作用.免疫共沉淀实验结果表明,在哺乳动物细胞(HEK 293)这一体内反应体系中,CD14与TLR4间也存在交互作用.结论在酵母细胞、体外反应体系和哺乳动物细胞(HEK 293)中,CD14与TLR4之间存在物理上的相互作用.     

肿瘤坏死因子-α在乳腺癌中的研究进展

作为一种多功能细胞因子,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与乳腺癌关系密切。近期国内外研究表明,在实验性乳腺癌研究方面,TNF-α通过调节血管形成、活性氧、趋化因子、NF-κB等多种途径在乳腺癌的侵袭和转移中发挥重要作用;临床应用方面,TNF-α在乳腺癌治疗中存在争议,但有潜力应用于乳腺癌预后检测。     

高空坠落伤院前急救护理3例

目的 分析高空坠落伤院前急救体会,提高伤员的抢救转运成功率。 方法 对某化工区发生的3例高空坠落伤伤者抢救资料做回顾性分析总结。 结果 院前处理过程中,采取正确的现场和院前急救措施,积极的骨折固定、搬运,并配合心理疏导及适时安全转运,3例高空坠落伤伤者均得到较好的急救护理。 结论 快速有效的院前急救和正确及时的转运护理,对减少漏诊,防止并发症和二次伤害的发生,提高生存质量,改善预后具有十分重要的意义。     

Relations of transcription expression of IL—2 with nuclear factor of activated T cells as well as changes of C—Fos and C—Jun after trauma

Objective:To observe the relations among expression of interleukin-2(IL-2)in spleen lymphocytes,DNA binding activity of nuclear factor of activated T cells(NFAT)and expression of the partly family members C-Fos,C-Jun after trauma.Methods:A murine closed trauma model was used,animals were sacrificed6,12hours and 1,4,7,10,14days,respectively after injury,Spleen lymplocytes were isolated from injured mice and stimulated with concanavalin-A,The culture supernatants were harvested and assayed for IL-2activity,Total RNA was extracted from spleen lymphocytes and assayed for IL-2mRNA.Nuclear protein was extracted,and the DNA binding activity of NFAT was measured using an electrophoretic mobility shift assay(EMSA),the expressions of C-Fos,C-Jun protein determined by Western blot analysis.Results:The expressions of IL-2 activity and IL-2mRNA in spleen lymphocytes were decreased in injured mice compared with those in control mice,and the most obvious decrease appeared on the 4th day after injury,The DNA binding activity of NFAT decreased gradually and reached the minimum that was only41%of the control on the 4th day after injury,which was cloely associated with the decline of IL-2activity and IL-2mRNA.An decrease in the expression ofC-Fos on the lst and 4th day after injury,trauma had no significant effect on the C-Jun expression.Conclusions:These results suggest that the inhibition of IL-2 expression is partly due to the impairment in the activation of NFAT in injured mice;and the decline in the DNA binding activity of NFAT is partly due to trauma block in the C-Fos expression.