人C-反应蛋白的提取、纯化和测定

C-反应蛋白(CRP)是一种经典的急性时相的血浆蛋白质。正常健康人血清中CRP含量极低(1～3μg/ml),而在各种炎症(感染)、组织损伤,恶性肿瘤、心肌梗塞等情况下,在数小时内即急剧上升,超过正常值达数十至数百倍之巨。当病情缓解时又能迅速恢复正常。CRP浓度的变化虽仅反映了疾病的非特异性变化,但在临床上对疾病的诊断、鉴别诊断、治疗和转归均有重要的参考意义。因而近年来在国内、外又引起了人们极大的兴趣和重视。CRP的分离提纯方法,文献报道很多,有硫胺划分后C多糖(CPS)沉淀法,DEAE-纤维素离子交换法,用CRP的配基如磷     

人外周血淋巴细胞表面SRBC受体的研究 Ⅳ.人和猪SRBC受体的比较研究

人和猪的胸腺和外周血淋巴细胞都能和SRBC形成E-玫瑰花。如SRBC是以同样的配体和上述细胞结合,那末在上述细胞的表面应具有同样的SRBC受体。去年我们用亲和层析法提取人血清中SRBC受体,在PAGE上虽呈一条区带,但其中尚含有不     

HIV-1整合酶单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

将具有HIV－1整合酶结合活性的单链抗体重组噬菌体感染HB2151大肠杆菌,经IPTG诱导．在周质腔萃取物及培养基上清中,均检测到有较特异与整合酶结合的可溶性单链抗体的表达。利用HiTrapAnti－Etags对单链抗体进行了亲和层析纯化。Western-blot结果初步表明,单链抗体不仅可与整合酶的单体反应,而且也可与其二聚体结合。提示：研制的单链抗体可用于对HIV－1整合酶活性影响的研究。     

HIV-1整合酶单链抗体对整合酶生物学活性抑制作用的研究

从抗ＨＩＶ１ 整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ ,ＩＮ） 单链抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｆｒａｇ ｍｅｎｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ,ＳｃＦｖ） 的ＨＢ２１５１ 表达菌中选取３ 个克隆,进行ＳｃＦｖ 的可溶性表达与纯化,并观察ＳｃＦｖ 对ＩＮ 体外生物学活性的影响。结果显示,在ＳｃＦｖ ：ＩＮ摩尔浓度为８ ∶１ 时,３ 个克隆的ＳｃＦｖ 可明显抑制ＩＮ 的３′端加工、链转移及去整合活性; 而相同浓度的ＢＳＡ 及抗人交联纤维的ＳｃＦｖ 对ＩＮ 活性无明显影响。测序结果表明,此３ 个克隆的ＳｃＦｖ 基因序列完全相同,符合鼠抗体可变区序列。完全抑制３′端加工及去整合反应所需ＳｃＦｖ 的浓度高于链转移反应。研究结果提示,抗ＩＮ 的ＳｃＦｖ 可抑制ＩＮ 的体外生物学活性,此结论为进一步研究此类ＳｃＦｖ 对ＨＩＶ 在细胞内复制的影响及其机制奠定了基础。     

利用6× His/ Ni-NTA 表达纯化系统一步纯化乙型肝炎前S抗原

目的：利用 ６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统表达并纯化带有 ６ 个 Ｈｉｓ 纯化标签的乙型肝炎前 Ｓ抗原。方法：利用 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ 亲和层析,比较了 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白分别在非变性和变性条件下的各种纯化条件和产率,并用三种方式对 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白进行了复性。结果： Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白均存在于 ２５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ 咪唑洗脱峰中。从 １ Ｌ 诱导菌体中可以分别纯化 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白 １０～１５ ｍ ｇ,纯度达到电泳纯。三种复性方式中,在 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 柱上复性 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白的复性率达 ６０．５％ 。结论：６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统不仅可以使外源蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,而且可以通过简单的纯化步骤得到较高纯度的目的蛋白。该表达纯化系统为利用大肠杆菌制备重组蛋白提供了一种简便可行的方法。     

重组人胰岛素原的克隆表达及其在1型糖尿病检测中的初步应用

目的 构建人胰岛素原原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证重组人胰岛素原在1型糖尿病胰岛素自身抗体检测中的价值.方法 采用PCR逐步合成法获得目的 基因,构建原核表达质粒pBVIL1/INS,转化大肠埃希菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原,初步建立检测胰岛素自身抗体的ELISA方法.结果 获得了可被1型糖尿病患者血清识别的重组人胰岛素原.以重组人胰岛素原作为包被抗原初步建立的ELISA方法,其敏感度和特异度分别为54.5%和100%.结论 重组人胰岛素原具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原.     

国产丙肝诊断试剂质量可靠

由中国药品生物制品检定所祁自柏等人完成的“丙肝试剂系列国家标准参考品及高质量诊断试剂的研究”,获2003年国家科学技术进步奖二等奖。进行确证的抗HCV分片断确证试剂,以及直接检测丙肝病毒基因的HCVRNAPCR试剂。其中抗HCVEIA试     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法酶联免疫试剂的初步临床评价

目的对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）酶联免疫检测试剂进行临床评价。方法以克隆表达的HCV多表位嵌合蛋白作为包被抗原,经多表位嵌合蛋白修饰后用于标记抗原,研制HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂;检测血液筛查阴性标本440份,乙肝表面抗原阳性标本90份,HIV抗体阳性标本10份,梅毒螺旋体抗体阳性标本90份及丙型肝炎病毒抗体阳性标本259份。结果对259份HCV抗体阳性标本进行检测时,有3份标本未检出,应用Chiron RIBA确认试剂检测后,结果为阳性。其余标本的检测结果均为阴性。结论采用HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂共检测889份标本,其中只有3份标本结果不一致,总符合率99．7％,敏感性和特异性较好。     

乳腺生长抑制因子mammastatin表位抗原的克隆表达及初步血清学测定

目的:获得重组乳腺生长抑制因子(mammastatin)表位抗原蛋白,制备抗血清,以测定正常人及乳腺癌患者血清中mammastatin存在水平.方法:用BioSun生物软件对 mammastatin氨基酸序列进行分析,确定表位序列,PCR逐步延伸法合成表位基因,构建pBVIL1-mammastatin和pBVIL6-mammastatin表达质粒,转化于大肠杆菌HB101中进行表达,经纯化后免疫大耳白兔,制备抗血清,用双抗体夹心法检测乳腺癌及正常人的血清.结果:重组 mammastatin抗原在大肠杆菌中获得了高效表达,并获得了兔多抗血清.用双抗体夹心法检测,显示95例正常对照血清mammastatin表达水平显著高于95例乳腺癌(平均D值,正常组0.261,乳腺癌组0.135,Wilcoxon秩和检验P=0.000<0.01,差异显著).结论:正常人血清中乳腺生长抑制因子mammastatin 存在水平显著高于乳腺癌患者.     

人羧基肽酶H不同区段抗原的克隆表达及其初步应用

目的 构建人羧基肽酶H不同区段抗原的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,初步验证人羧基肽酶H不同抗原区段在羧基肽酶H自身抗体检测中的应用价值。方法 应用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠埃希氏菌诱导表达重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原建立人羧基肽酶H自身抗体的间接ELISA方法,评价羧基肽酶H抗原在检测新诊断2型糖尿病患者抗羧基肽酶H自身抗体中的应用价值。结果 获得了羧基肽酶H三种不同区段抗原,其中42～476氨基酸区段为较理想的抗原。以该全长抗原作为包被抗原检测95例新诊断2型糖尿病患者,羧基肽酶H自身抗体阳性率为8.42%。结论 原核克隆表达的人羧基肽酶H 42～476氨基酸区段抗原具有良好的抗原性,可作为成人隐匿性自身免疫性糖尿病鉴别诊断的候选抗原。