血管内皮细胞生长因子与P53在卵巢上皮性肿瘤中表达的定量分析

[目的]定量比较血管内皮细胞生长因子(VEGF)与P53蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达的差别和关系。[方法]用细胞图象分析技术和免疫组化法分别检测VEGF和P53蛋白在61例上皮性卵巢良恶性肿瘤组织中表达的积分吸光度(IA)和平均吸光度(MA)。[结果]良性、交界性及恶性肿瘤组织中VEGF和P53蛋白表达的IA与MA值依次增大,良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤分别两两相比,其IA和MA值差异有统计学意义(P﹤0.01)。VEGF表达与P53蛋白表达结果相互间有联系(P﹤0.05)。[结论]VEGF和P53蛋白在上皮性卵巢肿瘤的形成和发展中有重要影响,可以作为卵巢肿瘤生物学行为恶化的一项指标。     

聚乙醇酸生物支架与胰岛的共培养

背景:以往的研究表明,胰岛细胞体外培养的时间不宜过长,否则会出现纤维组织过度增生,使胰岛大量死亡,而导致移植失败,所以改善胰岛细胞体外培养环境是非常重要的.目的:将大鼠胰岛种植在聚乙醇酸生物支架上,并进行胰岛与支架共培养,观察支架上胰岛细胞的生长状态、胰岛细胞的形态和胰岛细胞的分泌功能,以寻找胰岛细胞体外生存的良好环境.设计、时间及地点:体外培养,对比观察实验,于2005-06/2008-12在哈尔滨医科大学附属第一医院,卫生部细胞移植重点实验室完成.材料:聚乙醇酸支架纤维直径15 μ m,网孔100～150 μ m,空隙率为97%,厚度为1.0～2.0 mm.细胞培养前将支架浸泡入体积分数为75%乙醇溶液中 30 min,PBS冲洗3次,吹干后放入2 g/L多聚赖氨酸中浸泡30 min,消毒后备用.方法:采用胶原酶V分离和消化大鼠胰岛,对照组胰岛加入含体积分数20%胎牛血清、10 g/L肯霉索-链霉素-两性霉素、10 mmol/L Hepes的RPMI-1640培养液;支架组胰岛放在多聚赖氨酸包被的聚乙醇酸支架上,再加入同样的培养基,每个培养肌中细胞浓度为0.6×103,将两组细胞置于体积分数5%CO2、37℃的恒温培养箱中培养.主要观察指标:应用双硫腙胰岛特异性染色,计算胰岛的数量及检测胰岛的纯度;MTT法检测胰岛的成活率;放射免疫法测定胰岛细胞培养上清液中的胰岛素含量;并用扫描电镜对支架上胰岛的黏附生长进行观察.结果:分离和消化后的胰岛被双硫腙染成红色,胰岛外分泌腺不着色,胰岛纯度≥85%:MTT及胰岛功能检测结果显示,支架组的胰岛成活率及胰岛功能明显增高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);扫描电镜观察,胰岛紧密黏附存聚乙醇酸支架上,支架卜胰岛成三维立体生长.结论:聚乙醇酸支架与大鼠胰岛共培养可改善胰岛的成活率、胰岛的功能及形态,并使胰岛体外生存期延长.     

RNA干扰对人食管癌裸鼠移植瘤组织中血管内皮生长因子C表达的影响

目的:观察RNA干扰对人食管癌裸鼠移植瘤组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响.方法:将转染VEGF-C小分子干扰RNA(siRNA)载体质粒(HX1、HX2和HX3)的EC9706细胞分别注射于裸鼠皮下,以转染无关序列和正常EC9706细胞为对照,SPF环境饲养4周后处死,取移植瘤组织,分别采用RT-PCR和免疫组化SP法检测VEGF-C mRNA和蛋白的表达.结果:5组移植瘤体积、质量及VEGF-C蛋白和mRNA相对表达量差异均有统计学意义(F分别为3.372、3.948、7.621和8.916,P均<0.05).与正常细胞对照组和无关序列组相比,HX1、HX2及HX3转染组移植瘤组织中VEGF-C蛋门及mRNA表达明显降低(P<0.01).结论:VEGF-C siRNA能有效抑制裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF-C mRNA及蛋白的表达.     

同种异体甲状旁腺移植的动物实验研究

本实验旨在研究永久性甲状旁腺功能低下不用免疫抑制剂的甲状旁腺同种异体移植。方法　将实验受体鼠分成四组 ,每组 7只 ,两组裸细胞植入肾包囊 ,两组微囊化植入胸锁乳突肌。其中各一组加Caspase抑制剂。移植后隔两周测血钙及甲状旁腺素 (PTH)。结果　裸细胞组 8周内血钙及PTH均降至移植前水平 ,而微囊化组在 12周后仍保持较高水平。结论　不用免疫抑制剂情况下 ,微囊化甲状旁腺移植可保证移植甲状旁腺组织长期存活并有功能 ,可进一步用于临床     

应用完整原位杂交技术检测人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达

目的：探讨人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体的表达，及其对反义寡核苷酸胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响和食管癌发生、转移的意义。方法：实验于2004-09／12在河南省肿瘤病理重点实验室完成。体外分5组培养人食管癌EC9706细胞，其中4组分别用设计合成的3条封闭胰岛素样生长因子1受体不同基因位点的反义寡核苷酸1～3及1条无关寡核苷酸转染．另一组不转染。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA表达情况。结果：①胰岛素样生长因子1受体mRNA在食管癌EC9706细胞中呈阳性表达。②3条胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无差异（2．66&;#177;0．21，2.63&;#177;0.23，2.65&;#177;0.22，P&;gt;0．05)，但均显著低于无关寡核苷酸组及无转染组(5．67&;#177;2．86，5．02&;#177;2．75，P&;lt;0．05)结论：胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染人食管癌EC9706细胞后，可体外抑制EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达，从而抑制食管癌的发生和转移。为临床预防食管癌的发生、发展和转移提供了理论依据。     

人胚甲状旁腺细胞移植供体胎龄的选择

目的：研究人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下（HPT）中供体最佳胎龄段。方法：将12周－32周龄水囊引产的死胎（死亡时间＜2h）的甲状旁腺切取后进行体外培养，定期测量培养液中甲状旁腺激素（PTH）水平，同时对甲状旁腺细胞进行光镜电镜,紧确定最适合甲状腺移植的供体胎龄段，结果：16周－24周龄供体的旁腺细胞经体外培养后，其分泌PTH功能良好，其细胞形态及其超微结构保持良好，结论：16周－24周龄的供体最适合作甲状旁腺细胞移植。     

食管鳞癌组织中FHIT和MSH2mRNA的检测与分析

目的探讨FHIT和MSH2在食管鳞状细胞癌中的作用及其临床意义。方法采用原位杂交的方法检测62例食管鳞癌组织及62例正常食管黏膜组织中mRNA的表达。结果食管鳞癌癌变过程中FHIT在癌组织中mRNA的表达率低于正常黏膜组织，组间比较差异具有统计学意义；食管鳞癌组织中MSH2mRNA表达低于正常黏膜组织，但组间比较差异无统计学意义。FHIT和MSH2的mRNA的表达呈正相关关系。结论联合检测FHIT和MSH2的表达有可能成为早期诊断食管癌和判断预后的分子指标之一。     

食管粘膜不典型增生组织中端粒酶活性的定量及定性检测

目的 :探讨食管粘膜不典型增生组织中端粒酶活性的表达。方法 :采用聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定法 (TRAP ELISA)定量及TRAP 银染法定性技术 ,对 15例食管不典型增生组织及 12例正常食管粘膜进行端粒酶活性检测。结果 :15例不典型增生组织中 ,9例端粒酶活性呈阳性 (其中 8例轻、中度不典型增生中 4例呈阳性 ;7例重度不典型增生中 5例呈阳性 ) ,12例正常食管粘膜中 ,仅 1例端粒酶活性呈阳性。端粒酶活性平均A值在轻、中度不典型增生与重度不典型增生组织中分别为 0 .945± 0 .6 0 1和 1.2 5 6± 0 .785 ,正常食管粘膜组织为 0 .376± 0 .2 11。正常食管粘膜与不典型增生组相比 ,其端粒酶活性检出率和平均A值组间差异均存在显著性 (P <0 0 1)。结论 :端粒酶的激活在食管癌的发生与发展中起着重要作用 ,其活性检测可望成为监测食管癌发生及早期诊断的良好指标。     

体外PLGA三维支架上诱导小鼠骨髓干细胞向胰岛样细胞分化

目的 研究聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）三维支架在骨髓干细胞向胰岛样细胞诱导分化中的作用.方法 分别在平面和PLGA三维支架上对小鼠骨髓干细胞向胰岛样细胞进行诱导分化,对2组诱导分化的胰岛样细胞进行形态学观察和功能检测,对照组为小鼠胰岛细胞.结果 2组诱导分化的胰岛样细胞均呈双硫腙（DTZ）染色阳性,胰岛素、C肽双染阳性,胰高血糖素阳性和生长抑素阳性;在高糖刺激下,PLGA三维支架组的胰岛素分泌量较平面组显著提高（P＜0.01）.电镜提示诱导分化的胰岛样细胞具有类似β细胞的超微结构且与支架有良好的相容性.结论 PLGA三维支架有益于提高骨髓干细胞诱导分化的胰岛样细胞功能,且与胰岛样细胞具有良好的相容性.     

食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA表达

目的:检测食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA的表达.方法:应用免疫组化SP法和原位杂交方法检测49例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和49例正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白及其mRNA的表达.结果:①正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白和mRNA均为阳性表达.食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA阳性表达率均低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P均＜0.05).②淋巴结转移者食管鳞癌组织与不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P均＜0.05).③浸润至外膜的食管鳞癌组织及不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA的阳性表达率分别低于深肌层及浅肌层(P均＜0.05).结论:人食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA均呈低表达,Syndecan-1与食管鳞癌的发生发展及浸润转移有关.