胰腺癌相关免疫原性膜抗原的筛查和鉴定

目的 应用蛋白质组学技术筛查、鉴定胰腺癌相关免疫原性膜抗原.方法 培养、提取并纯化胰腺癌细胞株SW1990的膜蛋白,将膜蛋白通过双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,平行的3块2-DE凝胶分别行考马斯亮蓝染色和免疫印迹杂交.收集并纯化临床上66例胰腺癌和24例慢性胰腺炎患者血清中的IgG,分别与膜蛋白2-DE平行凝胶进行免疫印迹杂交.应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱分析杂交阳性蛋白位点,并经肽指纹库鉴定.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR(real-time PCR)、Western blot方法对筛查出的膜抗原进行验证,并比较不同胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中目的 膜抗原的基因及蛋白表达水平的差异.结果 胰腺癌细胞株SW1990膜蛋白与胰腺癌患者血清IgG免疫印迹杂交共出现9个阳性点,与同慢性胰腺炎IgG杂交所出现的2个阳性点无重复,经质谱分析鉴定出电压依赖性离子通道(VDAC)2可能是有潜力的候选膜抗原.经RT-PCR和real-time PCR验证,VDAC2基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达.Western blot实验结果表明,VDAC2在胰腺癌细胞株中的蛋白表达明显高于正常胰腺组织.结论 胰腺癌细胞膜蛋白VDAC2可能是具有免疫原性的胰腺癌相关膜抗原,其基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达,并且在胰腺癌细胞株中的蛋白表达水平明显高于正常胰腺组织.     

胰腺癌相关免疫原性膜抗原的筛查和鉴定

目的 应用蛋白质组学技术筛查、鉴定胰腺癌相关免疫原性膜抗原.方法 培养、提取并纯化胰腺癌细胞株SW1990的膜蛋白,将膜蛋白通过双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,平行的3块2-DE凝胶分别行考马斯亮蓝染色和免疫印迹杂交.收集并纯化临床上66例胰腺癌和24例慢性胰腺炎患者血清中的IgG,分别与膜蛋白2-DE平行凝胶进行免疫印迹杂交.应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱分析杂交阳性蛋白位点,并经肽指纹库鉴定.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR(real-time PCR)、Western blot方法对筛查出的膜抗原进行验证,并比较不同胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中目的 膜抗原的基因及蛋白表达水平的差异.结果 胰腺癌细胞株SW1990膜蛋白与胰腺癌患者血清IgG免疫印迹杂交共出现9个阳性点,与同慢性胰腺炎IgG杂交所出现的2个阳性点无重复,经质谱分析鉴定出电压依赖性离子通道(VDAC)2可能是有潜力的候选膜抗原.经RT-PCR和real-time PCR验证,VDAC2基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达.Western blot实验结果表明,VDAC2在胰腺癌细胞株中的蛋白表达明显高于正常胰腺组织.结论 胰腺癌细胞膜蛋白VDAC2可能是具有免疫原性的胰腺癌相关膜抗原,其基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达,并且在胰腺癌细胞株中的蛋白表达水平明显高于正常胰腺组织.     

LC致胆道损伤的外科治疗

目的 分析腹腔镜胆囊切除术发生胆道损伤的原因，探讨预防胆道损伤及损伤后修复的方法。方法 对13例LC并发胆道损伤患者进行回顾性分析。结果 病理因素及局部解剖学变异是LC致胆道损伤的主要原因，操作细节欠缺、过分追求低中转开腹率是LC致胆道损伤的常见诱因。12例患者分别采用胆总管对端吻合、Roux—en—Y胆肠内引流、修补后T型管引流等方式进行修复均获得了较好预后。结论 为避免胆道损伤，LC术中应注意操作细节，仔细辨别胆囊管周围解剖关系，疑难病例应适时、果断中转开腹。胆道裂伤或小缺损可行单纯缝合加T型管引流；Roux—en—Y胆管空肠吻合为LC致胆道横断伤或胆道狭窄的理想修复方法；即时手术、条件允许情况下，胆管横断伤也可采取胆管对端吻合的修复方式。     

胰腺癌相关免疫原性膜抗原的筛查和鉴定

目的 应用蛋白质组学技术筛查、鉴定胰腺癌相关免疫原性膜抗原.方法 培养、提取并纯化胰腺癌细胞株SW1990的膜蛋白,将膜蛋白通过双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,平行的3块2-DE凝胶分别行考马斯亮蓝染色和免疫印迹杂交.收集并纯化临床上66例胰腺癌和24例慢性胰腺炎患者血清中的IgG,分别与膜蛋白2-DE平行凝胶进行免疫印迹杂交.应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱分析杂交阳性蛋白位点,并经肽指纹库鉴定.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR(real-time PCR)、Western blot方法对筛查出的膜抗原进行验证,并比较不同胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中目的 膜抗原的基因及蛋白表达水平的差异.结果 胰腺癌细胞株SW1990膜蛋白与胰腺癌患者血清IgG免疫印迹杂交共出现9个阳性点,与同慢性胰腺炎IgG杂交所出现的2个阳性点无重复,经质谱分析鉴定出电压依赖性离子通道(VDAC)2可能是有潜力的候选膜抗原.经RT-PCR和real-time PCR验证,VDAC2基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达.Western blot实验结果表明,VDAC2在胰腺癌细胞株中的蛋白表达明显高于正常胰腺组织.结论 胰腺癌细胞膜蛋白VDAC2可能是具有免疫原性的胰腺癌相关膜抗原,其基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达,并且在胰腺癌细胞株中的蛋白表达水平明显高于正常胰腺组织.     

硒蛋白P同功型突变体短肽hSel P82m分析

目的: 切割硒蛋白P同功型突变体活性肽hSel P137m,以得到可能具备相同生物学活性而氨基酸数目更少的短肽.方法: 利用生物信息学技术分析hSel P280m,hSel P137m的活性功能域,用羟胺切割hSel P137 m,并用SDS-PAGE及蛋白质印迹加以分析验证.结果: 切割hSel P137m后得到了82(28aa-109 aa)个氨基酸的多肽,在特定的位置出现了预期的目的蛋白条带.利用生物信息学技术加以分析,认为hSel P82m基本具备hSel P137m的生物学活性.结论: 经切割硒蛋白P同功型突变体活性肽hSel P137m,成功得到82个氨基酸的短肽hSel P82m,并且认为其基本具备hSel P137m的生物学活性.     

胰腺癌免疫原性相关抗原研究进展

胰腺癌恶性度高，生物学行为特异，目前早期诊断困难，临床疗效不佳。80％的患者就诊时肿瘤已处晚期而无法切除，加之胰腺癌细胞对放化疗有较强的抵抗性，患者病死率达98％。随着肿瘤免疫学的飞速进展，人们逐渐鉴定出了一些胰腺癌相关抗原，并在此基础上进行了免疫学相关的血清标志物检测、分子影像学诊断、肿瘤疫苗、抗体导向免疫治疗等多方面的研究；