HBV核心蛋白作为免疫载体的研究进展

外源基因插入HBV核心蛋白特定部位基因后 ,核心蛋白无论在真核细胞或原核细胞都能够正确地折叠和自身装配 ,因而其作为颗粒样载体具有显著的优越性。对HBc单体及其形成的核壳结构的不断深入了解 ,在免疫及基因治疗方面正在发挥重要的作用。本文对HBV核心蛋白的结构与功能及其作为免疫载体的应用进行了综述。     

索非布韦治疗慢性丙型肝炎的研究进展

近几年慢性丙型肝炎的治疗发生了新的变化,直接抗病毒药物治疗活动性丙型肝炎显示出强大的作用,即使是难治性丙型肝炎也能出现较高的持续病毒学应答。其中索非布韦(SOF)以其抗病毒疗程短,应答率高,甚至对于某些丙型肝炎基因型患者可免干扰素治疗的优势脱颖而出。介绍了SOF的作用机制、临床应用现状以及主要不良反应,指出了其在难治性丙型肝炎患者中的应用前景。     

肝硬化上消化道出血并发急性门静脉系统血栓形成1例

正患者,男性,48岁,主因间断呕血、便血6年,再次呕血1 h急诊入院。患者于2011年因突发呕血、便血在当地医院诊断为上消化道出血、乙型肝炎肝硬化失代偿期,经内科治疗,出血停止。此后5次因呕血、便血在当地医院及我院诊治,多次建议患者行手术或内镜下治疗,患者均未同意,致每次均予内科治疗止血后出院。2017年8月1日凌晨3:00再次因呕血急诊入院,测血压81/52mmHg,心率100次/分,急查肝功能:ALT     

基因重组HBV的构建及其表达反义RNA抗-HBV作用的研究

目的　探索利用乙型肝炎病毒 (HBV)作为基因治疗载体的可能性及检验其表达反义RNA抗HBV的作用。方法　在表达完整HBV颗粒的质粒上 ,经基因修饰后分别表达S或S启动子区的反义RNA ,整合于具有HBV复制的 2 .2 .15细胞 ,形成细胞克隆 ,酶联免疫吸附 (ELISA)法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg ,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBVDNA ,聚合酶链反应(PCR)法检测上清液中重组HBV颗粒。结果　 2 .2 .15 pMEP4组、2 .2 .15 SAS组和 2 .2 .15 PAS组对HBsAg平均抑制率分别为 (2 .74± 3.83) %、(6 6 .5 4± 4 .4 5 ) % (P <0 .0 1)和 (5 5 .18± 3.2 7) % (P <0 .0 1) ;对HBeAg平均抑制率分别为 (4 .4 6± 4 .2 5 ) %、(2 6 .36± 1.6 9) % (P <0 .0 1)和 (6 5 .5 4± 3.2 2 ) % (P <0 .0 1) ;对HBV复制的抑制率分别为 17.0 %、5 9.9%和 72 .8%。 2 .2 .15 SAS组及 2 .2 .15 PAS组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒。结论　经过对HBV基因组的两处改造 ,分别在细胞内表达S区及S启动子区反义RNA具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用 ;在 2 .2 .15细胞中野生型HBV辅助下 ,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒     

乙型肝炎病毒X基因的蛋白产物对HLA-DR表达的效应

目的 了解HBVX基因蛋白产物对HLA-DR表达的效应。方法 用野生型HBVX基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒pWHXⅡ转染HepG2细胞。用PCR、Southern印迹，ELISA及Western印迹等分析鉴定目的基因DNA片段与其在转染细胞中的表达产物HBVX蛋白，将带重组质粒pWHXⅡ的HepG2细胞的和带有HBV全基因组的2.2.15细胞，在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测。结果 在转染的HepG2细胞和2.2.15细胞表面均清晰地显示有HLA-DR表达，而对照组即不带质粒或只带载体质粒的HepG2细胞则用同法不能在其表面检出HLA-DR的存在。结论 证明HBVX蛋白能在无炎症和外界因素存在下，单独诱导HLA-DR的表达，提示HBVX蛋白有参与乙肝免疫反应机制的可能性。     

胶原三股螺旋重复蛋白1基因真核表达载体的构建及其与microRNA-30b关系初探

目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果 采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功。2 μg和4 μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90%、89%和85%、83%。在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P<0.05)。而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P<0.05)。结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反。     

肝癌组织中Survivin和NF—κB的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的 分析Survivin、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)在肝组织中的表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡间的相互关系.方法 应用免疫组织化学链霉卵白素-生物索-辣根过氧化物酶复合物法(streptavidin peroxidase conjugated method,SP)检测44例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织,25例癌旁相应组织、9例正常肝组织中Survivin、NF-κB、Ki-67蛋白的表达情况,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测凋亡细胞.并计算增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡指数(apoptosis index,AI).结果 HCC组织中Survivin、NF-κB蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);HCC组织中Survivin阳性表达病例平均PI值(35.19土16.53)%显著高于阴性表达者(16.38±10.11)%(P<0.05),Survivin阳性表达病例平均Al值(3.15±1.52)%显著低于阴性表达者(5.24±2.27)%(P<0.05);HCC标本中NF-κB阳性表达病例平均PI值(29.88±13.71)%与阴性表达者(24.15±10.87)%比较无统计学意义(P>0.05),NF-κB阳性表达病例平均AI值(2.89±1.42)%显著低于阴性表达者(4.91±2.04)%(P<0.05);NF-κB与Survivin的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 Survivin和NF-κB在HCC中高表达.Survivin通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的方式共同影响肝癌的生物学特性.而NF-κB通过抑制细胞凋亡的方式影响肝癌的生物学特性,对肝癌的细胞增殖无显著影响.NF-κB与Survivin的表达呈正相关.     

原发性硬化性胆管炎的诊疗进展

原发性硬化性胆管炎(PSC)是一种慢性胆汁淤积性自身免疫性肝病,以肝内外胆管炎症、纤维化、局灶性或节段性狭窄为主要特征,最终导致胆管阻塞、胆汁淤积性肝硬化、肝衰竭.PSC的检出率和诊断率逐年提高,已成为目前肝脏炎症性疾病的研究热点.本文总结近年来PSC诊疗的新进展,包括较为准确及常用的诊断方法、当前的治疗以及一些特例——原发性硬化性胆管炎-自身免疫性肝炎(PSC-AIH)、自身免疫性胰腺炎(AIP)、小导管PSC等,以期为临床医生诊治该类疾病提供帮助.     

长期抗病毒治疗对乙型肝炎肝硬化失代偿期患者生存率的影响

目的 研究长期抗病毒治疗对Child-Pugh B级和C级乙型肝炎肝硬化失代偿期患者生存率的影响.方法 分析2005年1月1日至2010年1月1日就诊的386例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者的临床资料,根据Child-Pugh分级对患者进行分组,观察长期抗病毒对不同分级患者生存率的影响.结果 所有HBV相关肝硬化失代偿期患者的5年累计生存率为63.73％(246例).5年累计生存率Child-Pugh B级组患者为73.05％,C级组为56.62％,两组比较差异有统计学意义(x2=12.723,P＜0.01).Child-Pugh B级组第1、2、3年的生存率分别为95.81％、91.88％、95.92％,高于C级组(87.21％ 、83.77％、90.00％),组间差异均有统计学意义(x2=8.595、5.330、3.887,P＜0.05);Child-Pugh B级和C级组患者第4、5年生存率分别为93.62％、92.42％和95.14％ 、90.51％,两组之间比较差异均无统计学意义(x2=0.309、0.289,P＞0.05).经抗病毒治疗5年生存的Child-Pugh B级、C级组患者的肝功能指标、凝血酶原活动度、Child-Pugh评分比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论无论Child-Pugh B级或C级HBV相关肝硬化失代偿期患者,长期抗病毒治疗的生存率均能超过55.00％,B级患者优于C级患者.Child-Pugh分级较差的生存者经长期抗病毒治疗可获得与分级较轻患者相似的疗效.