Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨

目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.     

辛伐他汀对高脂血症大鼠动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的下调作用

目的:观察高脂血症时动脉血管紧张素Ⅱ1型受体(AT₁)mRNA表达水平、外周血血管活性物质的变化特点及降脂治疗的作用, 探讨辛伐他汀逆转内皮功能障碍的机制。方法:实验包括正常对照组, 另两组通过4周建立高脂血症模型, 此后继续高脂喂养, 其中辛伐他汀治疗组在高脂喂养同时喂服辛伐他汀10mg·kg^-1·d^-1)而高脂血症组不予药物治疗, 第20周检测3组的血脂变化及观察AT₁mRNA表达水平、外周血AngⅡ和NO浓度。结果:高脂血症组AT₁mRNA表达水平高于、血NO水平低于正常对照组、而AngⅡ和收缩压无显著差异。辛伐他汀治疗组总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度胆固醇(LDL-C)显著低于高脂血症组, 且动脉组织AT₁mRNA表达水平也显著低于高脂血症组, 血NO含量高于高脂血症组、但血AngⅡ浓度和收缩压未见显著差异。结论:辛伐他汀在调脂的同时, 下调AT₁mRNA的表达、促进一氧化氮的生成, 从而逆转内皮功能障碍、阻止动脉硬化进展。     

弗林蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7迁移的影响

 目的：探讨乳腺癌转移的机制,为深入研究乳腺癌发生、发展机制提供理论基础。方法：不同浓度的弗林蛋白酶(furin)抑制剂处理人乳腺癌细胞MCF-7 48 h。细胞划痕实验（wound healing assay）和细胞趋化实验（Transwell assay）检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力。Western blotting 检测细胞迁移相关蛋白膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）、血管内皮生长因子（VEGF）-C和VEGF-D水平。酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养液中基质金属蛋白酶(MMP)2和9水平。结果：与对照组相比,200 nmol/L的furin抑制剂α1-PDX即对细胞迁移及侵袭起显著抑制作用（均P<0.05）;细胞迁移相关的MT1-MMP、VEGF-C和VEGF-D表达水平均显著降低（P<0.05）;MCF-7细胞上清液中MMP2 和 MMP9的表达均显著降低（P<0.05）。结论：Furin抑制剂通过下调乳腺癌细胞MCF-7的MMPs及VEGFs表达抑制其迁移。     

初始联合治疗策略对高血压患者的疗效及肾功能的影响

【目的】探讨初始小剂量氨氯地平分别与复方阿米洛利和替米沙坦联合治疗高血压痛的效果及对肾功能的影响。【方法】302例50～79岁伴心血管病危险因素的原发性高血压患者随机分为A、B两组,起始治疗A组给予小剂量氨氯地平（2．5mg／d）＋复方阿米洛利（半片／d）,含阿米洛利1．25mg,氢氯嘧嗪12．5mg;B组给予氨氯地平＋替米沙坦（40mg／d）。二周后根据血压调整剂量,随访治疗一年,观察两种联合治疗方案对高血压患者的降压幅度、血压控制率、不良反应以及对血肌酐和内生肌酐清除率的影响。【结果】治疗前后A组与B组血压均显著降低,分别从（157．1±12．0）／（91．1±9．4）mmHg降至（128．1±10．3）／（76．6±8．0）mmHg和（156．4±13．6）／（91．2±9．5）mmHg降至（131．5±12．3）／（77．3±9．2）mmHg,P〈0．05;血压控制率分别为87．1％和76．5％（P=0．024）;B组血肌酐较治疗前降低[（85．15±21．25）μmmol／Lvs．（82．70±20．21）μmmol／L,P=0．001]。【结论】两种联合治疗方案均可以显著降低血压,初始联合治疗可以显著提高血压控制率;联合方案中配伍替米沙坦可能提供降压外的肾脏保护作用。     

苦参碱对腺样囊性癌细胞周期阻滞和端粒酶催化亚基表达的影响

目的观察中药苦参有效成分苦参碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的细胞周期及端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响。方法体外培养ACC-M细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的ACC-M细胞进行干预,以流式细胞仪检测对照组和不同浓度（0.25、0.50、0.75、1.00 mg·mL-1）苦参碱作用不同时间后细胞周期的变化;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测苦参碱作用48 h后细胞hTERT mRNA的表达改变;流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达变化。结果苦参碱作用后明显抑制ACC-M细胞的增殖,使ACC-M细胞周期阻滞于G0/G1期,并与药物浓度和作用时间呈正相关;苦参碱作用后hTERT基因和蛋白表达明显下降。结论苦参碱对ACC-M细胞有明显细胞周期阻滞作用,同时显著下调hTERT基因表达。细胞周期阻滞作用可能与苦参碱下调hTERT基因表达有关。     

610例小儿包皮形态及可上翻程度的观察

婴幼儿包茎是一种生理现象，然而仍有不少家长因小儿包皮不能上翻，而要求行包皮环切，包皮扩张或包皮手法翻转等治疗。笔者观察610例不同年龄段的男性小儿包皮的形态及上翻程度，观察小儿阴茎包皮的发育情况及探讨包皮环切的手术指征。     

高脂血症患者血流剪切率的变化及对血管功能的影响

目的：观察高脂血症患者血流剪切率的变化特点及探讨非诺贝特提高血管舒张功能的机制。方法:以20例正常人、62例高甘油三酯血症病人(其中30例予以饮食治疗、32例予非诺贝特治疗)为观察对象，以肱动脉B超测量血流、血管弹性和舒张功能等指标，检测血浆一氧化氮(NO)、氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)、血脂的变化。结果:高甘油三酯血症病人超声显示平均血流剪切率（MSR）、血流介导的扩张效应(FMD)和血管弹性指标Da、Dr显著小于正常对照组，而平均血管壁紧张度(MCWT)显著大于正常对照组；血Ox-LDL浓度高于、NO水平低于正常对照组，且NO与MSR、 FMD水平呈正相关，与甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和Ox-LDL浓度呈负相关。8周的低脂饮食治疗可使TC、TG水平下降，但NO、Ox-LDL和血管超声指标未见显著改变；非诺贝特治疗组血管超声MSR 、FMD显著高于对照组，血TG、TC、LDL-C和Ox-LDL浓度低于、NO水平高于对照组。结论:高甘油三酯血症时MSR的下降和氧化因子Ox-LDL的升高共同参与内皮的损伤机制，导致NO水平下降，表现为血管舒张功能的下降和弹性下降，MSR的上升和Ox-LDL的下降有利于内皮功能的修复。     

北京地区老年髋部脆性骨折患者术后抗骨质疏松症药物治疗现状及影响因素分析

目的 评估北京地区老年髋部脆性骨折患者术后抗骨质疏松症药物（AOM）治疗现状并探讨其影响因素。方法 横断面研究。纳入2018年11月—2019年11月北京积水潭医院、北京医院、北京安贞医院、北京市昌平区医院、北京市顺义区医院、北京市房山区良乡医院收治的髋部脆性骨折患者1 963例,总结其人口学特征,并收集患者入院后30、120、365 d的临床资料,AOM治疗及健康基本补充剂使用情况。通过单因素和多因素logistic回归分析AOM治疗的影响因素。结果 1 963例老年髋部脆性骨折患者,住院时年龄65~102（79.3±7.2）岁,≥80岁患者占56.7%（1 113/1 963）;男性患者占30.8%（604/1 963）,女性患者占69.2%（1 359/1 963）;股骨颈骨折846例,股骨粗隆间骨折1 077例,股骨粗隆下骨折40例。综合3个时间点,在髋部骨折后1年内,33.0%（648/1 963）的患者接受过AOM治疗,71.0%（1 394/1 963）的患者使用过健康基本补充剂。入院后30、120、365 d患者AOM治疗率分别为23.0%（451/1 963）、17.9%（353/1 963）、21.0%（412/1 963）,健康基本补充剂使用率分别为59.0%（1 158/1 963）、45.0%（883/1 963）、38.0%（746/1 963）。单因素分析结果显示,年龄≥80岁[粗比值比（OR）=0.645,95%可信区间（CI） 0.495~0.840]、男性（粗OR=0.760,95% CI 0.581~0.996）、共管模式（粗OR=3.025,95% CI 0.973~9.405）、居住地农村（粗OR=0.523,95% CI 0.388~0.704）、AOM服用史（粗OR=7.612,95% CI 2.227~26.020）、既往骨质疏松症史（粗OR=5.065,95% CI 3.149~8.147）、骨质疏松评估（粗OR=1.379,95% CI 1.105~2.451）是AOM治疗的影响因素。多因素分析结果显示,年龄≥80岁（调整后OR=0.618,95% CI 0.488~0.781）、男性（调整后OR=0.716,95% CI 0.565~0.908）、居住地农村（调整后OR=0.492,95% CI 0.375~0.645）是AOM治疗的危险因素;共管模式（调整后OR=2.632,95% CI 1.004~6.897）、AOM服用史（调整后OR=4.870,95% CI 2.080~11.402）、既往骨质疏松症史（调整后OR=4.804,95% CI 3.253~7.096）、骨质疏松评估（调整后OR=1.393,95% CI 1.041~1.862）是AOM治疗的保护因素。结论 北京地区老年髋部脆性骨折患者的AOM治疗率偏低。年龄≥80岁、男性、在农村居住的髋部脆性骨折患者治疗率较低,可采取共管模式,术前进行骨质疏松诊断与评估,提高骨质疏松治疗率。     

戊巴比妥在顽固性颅内高压中的应用及对脑组织氧分压的影响

Objective To examine the barbiturate infusion for intractable intracranial hypertension and its effect on brain tissue oxygen ( PbtO2 ). Method 60 patients with intractable intracranial hypertension were divided into tow groups, experimental group and control group. PbtO2 and intracranial pressure (ICP) were continuous monitored. Follow-up was more than 3 months and the prognosis was compared between two groups. Results When pentobarbital administration began, the mean PbtO2 [ 72 h: (26. 7 ±6. 7)mmHg] at 24h, 48h and 72h in experimental group were significantly higher than that of control group [ 72 h: ( 21. 1 ± 7. 2) mmHg ] ( P < 0. 05 ). The mean ICP [ 5 d: (2. 48 ± 1.11 ) kPa ] in the third and fifth day of experimental group were lower than that of control group [ 5 d: (3. 12 ± 1.09 ) kPa ]. Prognosis of pentobarbital group was better than control group( P < 0. 05 ). Conclusions Pentobarbital can effectively reduce intracranial pressure in patients with refractory intracranial hypertension and improve brain tissue oxygen. PbtO2 is an ideal monitoring marker, and it can predict prognosis to a certain extent.     

肠道病毒-D68 VP1蛋白原核表达、纯化及抗原性的评价

目的 原核表达EV-D68结构蛋白VP1,并对其抗原性进行评价.方法 以肠道病毒68型P1基因为模板,设计引物扩增出目的片段VP1,将其连接至大肠杆菌表达载体pGEX-5X-1上.将重组表达载体pGEX-5X-1-VP1转化大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)pLysS,对该工程菌进行诱导表达.菌体裂解后用SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定融合蛋白;对表达菌体进行超声破碎和亲和层析纯化;使用酶联免疫吸附试验方法评估目的蛋白与不同种属EV-D68阳性血清的结合能力及亲和力.结果 成功构建融合表达载体pGEX-5X-1-VP1,经过双酶切及测序鉴定均正确;成功表达和纯化出EV-D68(En-terovirus D68,EV-D68)VP1融合蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,得到与预期蛋白相对分子质量为61000大小一致的目的条带;纯化蛋白与不同种属的阳性血清可以特异性结合,与兔血清、恒河猴血清、小鼠血清的亲和力常数分别为1.6×106、3.9×105、3.1×106.结论 成功表达了EV-D68 VP1融合蛋白,为研究EV-D68 VP1蛋白的结构、功能及中和抗体筛选奠定基础.