脑红蛋白在脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCI)过程中脑红蛋白(Ngb)的表达变化及其意义。方法:健康成年Wistar大鼠随机分为脊髓压迫缺血再灌注组和假手术对照组。运用原位杂交组织化学和免疫印迹法,检测压迫段脊髓组织中Ngb的表达变化。结果:再灌注2h后,Ngb在压迫段脊髓开始表达上调,24h较为明显,48h达峰值,72h表达减少,与假手术组相比较,具有显著性差异。免疫印迹法的结果和上述结果一致。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中Ngb的表达变化与再灌注时间相关,其表达上调是机体内源性神经保护之一。     

缺血-再灌注损伤诱导大鼠视网膜AQP4内化及其溶酶体降解

目的 研究在急性高眼压作用后不同再灌注时间水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)内化及其向溶酶体分选(降解)的规律,探讨AQP4的内化及其降解与视网膜胶质细胞水肿的关系.方法 取72只体质量190 ～ 210 g的雌性SD大鼠(8周龄),在其左眼建立急性高眼压模型,并根据再灌注时间分为0、1、2、4、8、12 h组(n=12),应用免疫荧光双标的方法鉴定视网膜内胶质细胞的分布部位,并检测各组大鼠视网膜AQP4与早期内涵体抗原1(early endosome antigen l,EEA1)、晚期内涵体标记物甘露糖-6-磷酸受体(mannose-6-phosphate receptor,MPR)及溶酶体相关膜蛋白-1(lysosomal-associated membrane protein-1,LAMP1)的共表达,分别计数AQP4阳性细胞及AQP4/EEA1、AQP4/LAMP1共表达细胞,计算其比例并进行统计学比较.结果 视网膜内星形胶质细胞位于神经纤维层及节细胞层,Müller细胞位于内核层；在高眼压介导的再灌注损伤0～8h,可见AQP4分别与EEA1、MPR有共表达,再灌注12 h则仅见AQP4与EEA1的共表达；再灌注l ～12h都可见AQP4与LAMP1的共表达,再灌注4h,胶质细胞中AQP4与LAMP1共表达细胞的比例达到最大值(55.60±13.03)％,与其他时间点相比,差异有统计学意义(P＜0.05),此后共表达细胞比例逐渐减少.结论 高眼压所致的视网膜缺血-再灌注损伤可诱导AQP4发生内化,内化的AQP4可分选至溶酶体降解.AQP4的内化/降解可能在视网膜水肿的发生、发展中起作用.     

内向整流性钾通道4.1在人星形细胞瘤中的表达变化研究

目的：研究内向整流性钾通道4.1（kir4.1）在人星形细胞瘤和正常脑组织的表达差异,探讨星形细胞瘤增殖、生长的分子机制。方法：选取50例星形细胞瘤患者的肿瘤组织,其中胶质母细胞瘤21例,间变性星形细胞瘤15例,星形胶质细胞瘤14例。以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照。利用免疫组化与蛋白印迹（Western-blot）方法检测肿瘤组织与对照组织的kir4.1表达。结果：不同星形细胞瘤组织与对照组相比较,kir4.1表达增强（P〈0.05）;其中,恶性程度较高的胶质母细胞瘤相对于恶性程度较低的星形胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤,kir4.1表达更为强烈（P〈0.05）。结论：kir4.1表达的变化与肿瘤的恶性程度有关。kir4.1在人星形细胞瘤组织表达增强。     

红景天苷对大鼠缺血性脑水肿的影响

目的研究红景天苷(salidroside)对水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在大鼠缺血性脑组织中表达的影响。方法采用线拴法制作大鼠局灶性脑缺血模型,实验分为模型组、假手术组、红景天苷组。通过光镜技术观察各组别脑水肿区的病理变化,干湿质量法检测脑含水量,采用原位杂交、免疫组化方法观察AQP4及其mRNA在脑组织中的表达,硫代巴比妥酸法和定磷法测定缺血脑组织中丙二醛(MDA)、Na ,K -ATPase活性。结果缺血后模型组的细胞及血管周围间隙明显扩大,部分细胞坏死,神经胶质细胞增生;大鼠穹隆下器官、脉络丛、大脑皮质、视上核、海马等部位AQP4及其mRNA的表达上调,48～72 h达峰值;脑组织含水量亦在72 h达高峰。红景天苷组脑组织形态结构无明显改变,脑组织含水量、MDA水平、AQP4及其mRNA的表达明显低于模型组;而Na ,K -ATPase活力明显高于模型组。结论红景天苷可抑制缺血性脑水肿组织中AQP4及其mRNA的过表达,防止脑水肿的发生。     

脊髓内去甲肾上腺素能纤维的来源

目的：研究脊髓内去甲肾上腺素(NA)能纤维的来源。方法：选用Wistar大鼠，应用神经递质NA特异性的标志酶——多巴胺β羟化酶(DBH)抗体注入其脊髓单侧，分别于注射后1h-7天灌注大鼠，取出脊髓和脑组织作免疫组化染色。结果：ADBH注入脊髓后48h内依次在腰、胸、颈髓同侧观察到大量DBH阳性纤维，对侧仅少量阳性纤维出现：注射后3—4天，双侧上橄榄核、LC、SC、KF核、臂旁核中出现大量阳性神经元，在延髓内仅见大量阳性纤维，未观察到阳性神经元胞体出现；注射后7天，上述阳性神经元和阳性纤维消失。结论：脊髓内的NA能纤维及终末几乎全部来源于脑桥NA能细胞群。     

单羧酸转运蛋白1、2、4在急性心衰大鼠模型肾上腺的表达变化

目的观察单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、2、4在急性心衰大鼠肾上腺的表达变化,以探讨急性心衰肾上腺的能量代谢变化。方法随机将成年健康SD大鼠(雌雄不限,250±20 g)50只,分为3组:正常组(n=10)、假手术组(n=20,2 subgroups,10 in each)和模型组(n=20,2subgroups,10 in each)。用1.5%戊巴比妥钠静脉注射制作大鼠急性心衰模型;注毕,运用BL-420F生物机能实验系统记录左室内压峰值(LVSP)和左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)的变化曲线;用IHC和Western Blot检测模型鼠,肾上腺MCT1,2,4的表达变化。结果在急性心衰发生10 min时,肾上腺皮质和髓质MCT1、2、4的表达均有升高,此时假手术组MCT1、2、4也有升高。与正常对照组相比较,两组的MCT1、2、4的表达升高均具有统计学意义(P<0.05);在20 min时,大鼠肾上腺MCT1、2、4的表达较正常组却有所下降,与正常组相比较,仅MCT1的表达下调具有统计学意义(P<0.05),而MCT2、4则无明显差别(P>0.05)。假手术20 min组与10 min组相比较,MCT1、2、4的表达无明显差别(P<0.05)。结论在急性心衰和创伤性应激状态下,肾上腺MCT1、2、4的表达,在十分钟内呈代偿性增加,但随着心衰时间的延长,其表达反而降低,机体的能量代谢出现失代偿,提示MCT1、2、4参与创伤性应激及急性心衰的能量代谢过程。     

水通道蛋白-4在大鼠大脑中的定位研究

目的 观察水通道蛋白-4(AQP4)在大脑实质和室管膜、脉络丛、最后区、神经垂体、腺垂体和松果体中的分布,为研究脑组织中水分子运输和平衡以及内分泌腺体的分泌和调节机制提供形态学基础。方法 免疫组织化学漂洗法(LAB-SA、BCIP／NBT法)。结果 AQP4主要分布于软脑膜、脑室和导水管系统的室管膜、脉络丛等与脑脊液(CSF)直接接触的组织中及脑实质的血管周围;在脑实质内可见阳性细胞体;在海马的锥体细胞层、齿状回的颗粒细胞层和多形细胞层细胞呈阳性;在脑室周围器官如神经垂体、最后区(AP)及松果体和腺垂体(包括中间部)各种腺细胞膜表面均可见AQP4的阳性标记。结论 AQP4不仅与水分子的转运及平衡调节有关、同时与电解质代谢和内分泌活动有关,还可能与下丘脑的神经内分泌活动有关。