质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究

目的构建针对SARS-CoV的特异性siRNA质粒,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染.方法根据SARS-CoV的全长基因序列,以4个不同的部位为靶点,分别设计、合成含有19 nt干扰序列的一段寡核苷酸,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3.1-H1载体中,构建表达siRNA的质粒.采用脂质体法将质粒转染Vero E6细胞,经潮霉素抗性筛选后,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验,以观察干扰效应.结果对所构建的质粒分别测序,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致.用不同浓度的SARS-CoV感染转染质粒后的细胞,与阴性对照相比,其细胞病变减轻、活细胞显著增加,病毒空斑明显减少.结论利用RNA干扰能有效的抑制SARS-CoV在细胞中的复制,并对细胞有保护作用,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法.     

声门下技术预防呼吸机相关性肺炎的研究现状

就声门下技术的吸引方式、吸引负压、吸引频率和冲洗液的选择等方面进行综述,方便医护人员为机械通气病人选择最适宜的声门下技术,确保临床做到安全有效吸引,有效预防呼吸机相关性肺炎的发生。     

骨质疏松性股骨粗隆间骨折的手术方式比较

目的比较分析股骨近端髓内钉内固定(proximal femoral nail-rotation,PFNA)和人工髋关节置换术(hip arthroplasty,HA)治疗骨质疏松性粗隆间骨折的临床疗效。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月在我院骨科治疗的73例骨质疏松性老年股骨粗隆间骨折患者,按照手术方法不同分为PFNA组39例和HA组34例,比较两组患者的手术操作时间、术中出血量、住院时间、术后下地时间等指标以及术后12月髋关节功能Harris评分与并发症发生情况。结果 PFNA组的术中出血量(116.89±23.12 mL)、手术操作时间(75.36±14.18 min)明显少于HA组(362.57±136.41 mL,97.85±19.76 min),而术后下地时间(17.38±2.13 d)明显长于HA组(8.65±1.63 d),差异均有统计学意义(t=-4.863,-2.532,9.914;P=0.001,0.030,0.000)。Harris评分结果显示,两组患者术后髋关节功能优良率无明显差异(χ~2=0.562,P=0.454)。两组患者术后12个月的并发症发生情况无明显差异(Z=4.037,P=0.372)。结论 PFNA内固定术治疗骨质疏松性股骨粗隆间骨折在缩短手术时间、控制出血量方面优势明显,HA术后下地时间较短,更利于患者恢复。临床医生应当根据患者在年龄、身体状况、骨折类型、损伤程度等情况选择适合的治疗方案。     

衰变加速因子介导Jurkat细胞的PTK信号传递机制的实验研究

为研究衰变加速因子 (DAF )介导Jurkat细胞信号传递的机制 ,本文应用免疫印迹及化学发光技术 (ECL)发现交联DAF单抗可使CD3+ 与CD3 Jurkat细胞总蛋白酪氨酸磷酸化水平增加 ,但磷酸化水平不同。免疫共沉淀实验检测到DAF与Src家族酪氨酸激酶 (SrcPTK )可发生共沉淀反应。去污剂不溶膜复合物 (DIG )抽提与鉴定检测到DIG内有SrcPTK与DAF的特异性聚集。说明DAF对Jurkat细胞的信号传递有辅助激活效应 ,此效应可能是通过其以与膜微区相关的所联系的SrcPTK实现的     

骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位预测及初步鉴定

目的鉴定骨髓瘤抗原Sp17的HLA-A＊0201限制性CTL表位。方法采用超基序和量化基序法预测Sp17的HLA-A＊0201限制性CTL表位；用T2细胞亲和力实验和稳定性实验对该表位进行初步鉴定。结果超基序和量化基序法预测得出Sp17抗原的4个CTL表位（LLEGLTREI（19-27）、ILREQPDNI（27-35）、SLLEKREKT（45-53）、KEKEEVAAV（111-119）），亲和力实验结果表明LLEGLTREI（19-27）、ILREQPDNI（27-35）、SLLEKREKT（45-53）有较高亲和力，而KEKEEVAAV（111-119）肽亲和力较低；稳定性实验表明ILREQPDNI（27-35）、SLLEKREKT（45-53）与HLA-A＊0201分子结合稳定性较好。结论ILREQPDNI（27-35）、SLLEKREKT（45-53）有可能是骨髓瘤抗原Sa17 HLA-A＊0201限制件CTL表位。     

人/鼠嵌合模型中人重组α-病毒疫苗的免疫学作用评价

目的 建立人／鼠嵌合模型(Trimera)，并研究重组α-病毒在此模型中对人黑色素瘤的免疫学作用。方法 构建人／鼠嵌合模型并用流式细胞术进行鉴定。构建重组病毒和重组质粒并在体外转染鉴定其表达。疫苗免疫动物后检测特异抗体滴度和细胞毒T淋巴细胞活性。结果 FACS分析发现，人白细胞占Trimera小鼠腹腔淋巴细胞的88．84％，脾脏中为57％。免疫后的小鼠腹腔细胞在效／靶比为100：1时，细胞毒T淋巴细胞的杀伤率达到70％，psMART2a/MAGE-3和pCI-neo／MAGE-3免疫小鼠的杀伤率为分别为50％和30％左右。ELISA结果显示，重组病毒MAGE-3／SFV和重组质粒pSMART2a／MAGE-3免疫小鼠后产生的MAGE-3特异抗体的效价均达到1：512，重组质粒pCI-neo／MAGE-3免疫动物后的抗体效价为1：256。结论 成功建立了人／鼠嵌合模型，并在动物体内有效激发了针对人黑色素瘤MAGE-3蛋白的初次免疫应答；重组α-病毒疫苗和基于α-病毒复制酶的基因疫苗免疫效果要好于常规基因疫苗。     

重组MHC I类分子Kb-EGFP分子的构建及表达

目的构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子Kb(Kb-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达.方法RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子Kb cDNA,克隆入真核表达载体pGFP-N1中EGFP分子的上游,脂质体转染COS-7细胞,G418加压筛选获得抗性重组细胞.荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况.结果分子克隆的方法获得了预期的重组质粒,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误,转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光,特征性地分布于细胞质膜,及核周、膜下的囊泡结构中.结论所构建的Kb-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征,为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型.     

儿童急性肾损伤肾脏替代治疗进展

1儿童急性肾损伤定义2004年,美国急性透析质量指导组(acute dialysisquality initiative group,ADQI)[1]制定了急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的定义,并制定了RIFLE分级标准,将AKI分为危险(Risk)、损伤(Injury)、衰竭(Failure)三个级别和肾功能丧失(Loss)及终末期肾病)两个预后级别。近年来,     

心脏彩超评价二尖瓣成形术对心功能的影响分析

目的:讨论心脏彩超评价二尖瓣成形术对心功能的影响分析,为日后的临床诊断提供参考。方法:选择2012年3月-2014年2月我院行二尖瓣成形术的患者80例为研究对象,对所有患者实施心脏彩超诊断,评价患者的心功能恢复情况。结果:所有患者均经过二尖瓣成形术的治疗,行彩超诊断后。多数患者的左心室舒张末容积以及左心室收缩末容积出现明显的改变,相对于术前出现了明显的缩小情况。经过统计,90%的患者左心室收缩功能在术后48h内,出现了一定的下降,但在一周后出现明显增加,恢复状况比较理想。结论:二尖瓣成形术对患者的心功能影响较大,通过实施心脏彩超诊断,可以正确的评价患者心功能恢复情况,观察二尖瓣成形术是否会对患者造成严重的影响。心脏彩超的优势在于,不会对患者造成任何创伤,并且可以重复测量多种心功能参数,临床实用价值较高,可提供多种实时数据,值得推广应用。     

一种简化的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法

目的 建立一种简单的能获得高纯度小鼠原代肝细胞的分离与培养方法。方法 将经典的两步灌流法简化为经下腔静脉逆向脉冲式灌注,利用低速离心法对肝细胞分离液进行纯化;利用锥虫蓝染色法鉴定细胞活率;培养瓶预先用鼠尾胶原铺备,利用倒置显微镜观察细胞形态。结果 此法得到了足够数量的肝细胞,细胞活率大于90%;细胞可稳定贴壁1周。结论 成功建立了一种简单的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法。