EXPRESSION OF HUMAN CD59 ANTIGEN ON MOUSE NIH3T3 AND EL-4 CELLS CONFERS PROTECTION AGAINST HUMAN COMPLEMENT ATTACK

ＣＤ５９分子是广泛分布于各组织细胞表面的１８ｋＤａ糖蛋白,通过肌醇磷脂酰聚糖（ＧＰＩ）锚固于细胞膜,具有抑制同源补体攻膜复合物（ＭＡＣ）形成和参与介导Ｔ细胞活化等多种功能。本文应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从Ｊｕ－ｒｋａｔ细胞的总ＲＮＡ中扩增得到３９６ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经测序证实该片段包括２５ａａ信号肽在内的全部的ＣＤ５９编码序列。进一步将此ＣＤ５９的ｃＤＮＡ重组于逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,电穿孔转染ＰＡ３１７细胞,并用病毒上清感染小鼠成纤维母细胞ＮＩＨ３Ｔ３及小鼠胸腺瘤细胞ＥＬ－４。经Ｇ４１８加压筛选,ＦＡＣＳ检测获得表达ＣＤ５９的阳性细胞克隆。补体杀伤实验结果表明：表达ＧＰＩ－型ＣＤ５９分子的ＮＩＨ３Ｔ３和ＥＬ－４细胞对人血清补体溶破的抵抗作用较空载体转染的非表达细胞明显增强。证实了用逆转录病毒载体可成功地将人ＣＤ５９基因导入异源细胞,使表达ＣＤ５９的异源细胞获得抑制人补体溶破的功能。本研究为探讨ＣＤ５９分子与细胞活化的关系及其信号转导机制建立了良好的细胞模型,并为进一步应用于异种器官移植,或对由于ＣＤ５９遗传缺损所致ＰＮＨ进行基因治疗奠定了基础。     

体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用

目的体外研究针对SARS-CoV RNA依赖性RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的小干扰RNA（Small interference RNA,siRNA）对SARS-CoV感染的抑制效应。方法利用Ambion公司在线设计工具,设计出4条针对RdRp基因的siRNAs,并在体外利用试剂盒进行转录合成。在SARS-CoV感染前1d,将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine 2000试剂转染入Vero E6细胞中。感染后,每天观察感染细胞的细胞病变效应（Cytopathic effect,CPE）。第5天,用空斑形成实验（Plaque formation unit,PFU）检测感染细胞培养上清液中SARS-CoV滴度。结果CPE结果显示,在感染后的前4d,各siRNAs均能有效地保护细胞免受感染;在第5天,4条siRNAs中有3条仍能有效保护细胞不被感染。PFU实验结果显示,在第5天,所有siRNAs转染的细胞培养上清液中,SARS-CoV的滴度均显著低于阳性对照（P〈0．001）。结论实验结果表明针对SARS-CoV的RdRp基因的siRNAs能有效而特异地抑制该病毒在哺乳动物细胞中的复制和繁殖,提示如果应用合适的给药途径,RNAi策略可以用于体内抑制SARS-CoV的感染。     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb     

基于人/鼠嵌合模型的人黑色素瘤mage-3基因疫苗的免疫学作用

目的 利用人 /鼠嵌合模型评价人黑色素瘤基因 mage-3基因疫苗的免疫效果. 方法 建立并鉴定 Trimera动物模型,并用重组质粒 mage-3/pCI neo作为基因疫苗对其进行免疫.检测免疫动物脾细胞 CTL的杀伤活性和血清中 mage-3特异性抗体. 结果 构建的 Trimera模型脾脏和腹腔中出现了大量的人淋巴细胞.接种后, Trimera模型体内出现了效价为 1 256的 mage-3特异抗体.免疫动物 CTL体外杀伤实验显示,注射基因疫苗的 Trimera小鼠脾脏淋巴细胞对靶细胞 LB373的最大杀伤率为 50%左右,而对照小鼠只有 10%以下的杀伤水平. 结论 mage-3是一种理想的肿瘤疫苗,在人源化动物模型中能激发出特异的细胞和体液免疫,对共享 mage-3抗原的各种肿瘤细胞的临床治疗提供了实验依据.     

衰变加速因子在Jurkat细胞增殖及分泌IL—2中的作用

目的 研究衰变加速因子对CD3阳性与阴性Jurkat细胞的增殖效应及对IL－2分泌的影响。方法 应用MTT比色实验观察交联DAF单抗DG3与固相化抗CD3联合作用对CD3阳性与CD3阴性Jurkat细胞增殖效应;IL－2依赖CTLL^3H-TdR掺入实验检测CD3阳性与CD3阴性Jurkat细胞IL－2的分泌;细胞ELISA检测CD3阳性与CD3阴性Jurkar细胞IL－2R的表达。结果 交联DG3可协助促进固相化抗CD3对CD3阳性Jurkat细胞的增殖效应和IL－2分泌,并可引起IL－2Rα链表达增加,此作用可被Src家族酪酸激酶抑制剂PP2所抑制,而对CD3阴性Jurkat细胞无此作用。结论 衰变加速因子可协同促进固相化抗CD3对CD3阳性Jurkat细胞的刺激增殖效应、IL－2分泌及IL－2R表达增加。     

我国与其他国家/地区药品附条件审批政策法规及其实施情况的比较与思考

药品附条件批准是指具有突出治疗价值的临床急需药品在未完成完整临床试验的情况下, 通过"先批准后验证"的形式加快批准上市。从20世纪90年代起, 美国、加拿大、欧盟、日本、澳大利亚和英国等先后实施药品附条件上市审批。2017年10月, 我国开始批准药品附条件上市申请。本文对我国与其他国家/地区的药品附条件上市前条件和要求、上市后监测和监管的情况进行了比较, 根据对比结果归纳并探讨了我国药品附条件审批制度可能的优化方向。     

生物胶体分散剂联合软聚硅酮敷料及综合护理干预对临床Ⅲ期压力性损伤患者的影响

目的:探讨生物胶体分散剂联合软聚硅酮敷料及综合护理干预对临床Ⅲ期压力性损伤患者的影响。方法:选取2015年11月1日~2018年12月31日进行治疗的40例Ⅲ期压力性损伤患者,随机分为常规组和研究组各20例,常规组给予综合护理干预,研究组在综合护理干预基础上给予生物胶体分散剂联合软聚硅酮敷料;比较两组干预效果、治疗期间并发症发生情况、护理经过及干预前后生活质量[采用生活质量综合评定量表(GQOLI-74)]。结果:研究组干预有效率高于常规组(P<0.05),直接护理时间、更换敷料次数及创面愈合时间均优于常规组(P<0.01,P<0.05),治疗期间并发症发生率低于常规组(P<0.05);干预后,研究组GQOLI-74各维度评分及总分均高于常规组(P<0.05)。结论:对临床Ⅲ期压力性损伤患者在综合护理干预基础上应用生物胶体分散剂联合软聚硅酮敷料,能够有效促进患者压力性损伤创面愈合,缩短创面愈合时间,降低并发症发生率,同时有助于改善患者生活质量,值得临床推广。     

非酒精性脂肪性肝病动物实验模型研究进展

近年来随着肥胖、2型糖尿病、高脂血症等发生率的升高,非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病率也逐渐升高,成为常见的慢性肝脏疾病之一,而在我国是仅次于慢性病毒性肝炎的第二大肝病。但其发病机制仍未阐明,因NAFLD的发生和演进病程长,且从人体获取肝组织进行研究或药物试验等受伦理限制,因此NAFLD动物模型在本病研究中起了重要作用。综述了具备与NAFLD患者组织病理学表现相似的动物模型,并比较其建模原理及优缺点。为深入研究NAFLD发病机制,筛选防治药物等提供了有利工具。     

Pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定

目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5．1-H1 Retro vector的Bam HⅠ和HindⅢ位点,构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类Pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类Pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒,为下一步Pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据,并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。     

呼吸机集束化干预策略的制定及其临床应用研究进展

对呼吸机集束化干预策略方案的研究进展与临床应用现状进行综述,以期有效降低临床呼吸机相关性肺炎的发生,提高机械通气病人的救治率,减轻病人痛苦和经济负担。