Pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定

目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5．1-H1 Retro vector的Bam HⅠ和HindⅢ位点,构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类Pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类Pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒,为下一步Pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据,并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。     

呼吸机集束化干预策略的制定及其临床应用研究进展

对呼吸机集束化干预策略方案的研究进展与临床应用现状进行综述,以期有效降低临床呼吸机相关性肺炎的发生,提高机械通气病人的救治率,减轻病人痛苦和经济负担。     

嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建

目的 构建嵌合跨模型CD55基因的重组逆病毒表达质粒。方法 采用PCR技术扩增编码CD155信号肽及成熟蛋白胞外区（-34-304aa)的DNA片段，双侧引入EcoRI、SspI位点，与编码CD46分子的跨膜区及膜内区（270～350aa)的DNA片段的5′未端自身的Stu I位点连接，构建嵌合跨模型CD55 DNA片段，序列测定后将此嵌合CD55片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒，酶切鉴定插入片段的方向。结果 DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5 DNA阅读框完整、连接部位序列正确；Hind Ⅲ酶切鉴定得到了正向插入的CD55TM-pLXSN重组表达质粒。结论 我们成功构建了嵌合跨膜型CD55 DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD55TM-pLXSN，为进一步在真核细胞中表达嵌合分子，比较研究GPI锚固型CD55分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD55分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。     

哮喘患者外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞及IL-4分泌水平的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘发病机制中的作用,为哮喘的临床治疗提供新的思路和方法。方法:分离哮喘患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪分析CD4+CD25+调节性T细胞在外周血单个核细胞中的比例;酶联免疫吸附法(ELASA)检测外周血PBMC培养上清IL-4的分泌状况。结果:哮喘组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的百分率为(3.2±1.5)%,健康对照组为(6.5±2.5)%,哮喘组明显低于对照组(P<0.05);哮喘组外周血PBMC培养上清IL-4分泌水平为(57.3±13.5)ng/L,健康对照组为(28.6±7.2)ng/L,哮喘组明显高于对照组(P<0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了哮喘的发生与发展。     

高渗盐水对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的本实验研究高渗盐水对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠96只,随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）、高渗盐水组（HTS组）、丹参组（SM组）,每组又按再灌注时间（1、3、6、12h）分为4个亚相,每组各亚相为6只。复制70％肝缺血再灌注模型（Pringle’s法）,测血清ALT、AST水平及肝脏组织MDA水平;常规病理及电镜下观察大鼠肝脏病理学变化;用免疫组化（streptavidin-perosidase,SP）法检测Bcl-2及Bax的表达。结果 IR组、SM组及HTs组各时点AST、ALT、MDA及Bax水平较Sham组高,且Bcl-2表达水平较Sham组低,肝组织病理学和超微结构损害明显程度高于Sham组,差异有统计学意义（P〈0．01）;HTS组及SM组各时点AsT、ALT、MDA及Bax水平较同时点IR组低,且Bcl-2水平较IR组高,肝组织病理学和超微结构损害明显轻于IR组,差异有统计学意义（P〈0．01）;HTS组各时相AST、ATJT、MDA及Bax水平较同时相SM组低,且Bcl-2水平较SM组高,肝组织病理学和超微结构损害明显轻于SM组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论SM与HTS对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,且后者效果更优,HTS可以通过抑制Bax的表达,促进Bcl-2的表达水平,抑制肝细胞凋亡,对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。     

幽门螺杆菌临床治疗中抗菌药物耐药现状及其耐药机制

细菌对抗菌药物耐药是21世纪全球公共健康面临的重要挑战，耐药细菌的出现令临床根除治疗十分棘手。幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）感染世界上超过一半以上的人口，我国的感染率约为40％～90％，是引起慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因子，如不进行根除治疗感染将持续存在，然而不断上升的抗菌药物耐药率降低标准三联方案的疗效，在大多数国家根除率〈70％，低于MaastrichtⅢ共识意见提出根除率应至少〉80％的目标。     

PNPLA3基因I148M多态性与肝脏疾病炎症发展相关性研究

PNPLA3（patatin-like phospholipase domain-containing 3）是由481个氨基酸组成的脂肪滋养蛋白（adiponutrin），属于patatin样磷脂酶域（PNPLA）家族，此家族主要具有磷脂酶／酰基转移酶活性。研究发现PNPLA3具有脂肪水解和脂肪合成功能，且更多地参与了体内的脂肪合成［1］。     

空腹和餐后甘油三酯预测心血管疾病风险研究进展

心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是一个严重危害我国公民健康的重大公共健康问题[1]。CVD造成的社会经济负担逐步增加,于是采取有效措施降低CVD的发病风险变得至关重要,然而CVD风险不断增加的机制尚不明确。研究[2-3]认为CVD的主要危险因素包括高血压、高血糖、血脂异常、肥胖及吸烟饮酒等。当前CVD的标准治疗包括生活方式的干预和药物治疗,旨在降低低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、胆固醇和血压等,均不能使高危人群的CVD风险"正常化"[1]。近年来,甘     

学习任务驱动的医学实验课程教学设计

在医学生的实验课程教学中,教学设计多是以教师为主导的单一实验主题的模拟实验技术操作学习,这种被动技能性学习设计方式,影响了学生在实践性教学中的知识抽象化和学习迁移。本文从提高知识认知程度的角度出发,以学习任务驱动学习动机,构建以目标的行动计划模式和以概念图实现理论与实验知识结构化的实验课程教学设计。