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目的 探究不同核黄素营养水平对大鼠肠道菌群的影响。方法 将36只雄性Wistar大鼠按体重随机分为正常对照组(normal control,NC),核黄素缺乏组(riboflavin deficiency group,RD),核黄素不足组(riboflavin insufficiency group,RI)和核黄素缺乏对喂组(riboflavin deficiency pair-fed group,PF),分别喂养核黄素含量6mg/kg、<1mg/kg、3mg/kg和6mg/kg的AIN-93合成饲料3个月,实验结束时取血清、结肠和肠道内容物,分别测定核黄素营养状况指标、肠黏膜结构与紧密连接蛋白表达、短链脂肪酸和肠道菌群变化。结果 与NC组相比,核黄素营养不良大鼠血清及肝脏中核黄素及其衍生物含量下降,血清谷胱甘肽还原酶活性下降,肠黏膜结构发生损伤,紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达量降低,短链脂肪酸含量显著降低,肠道菌群多样性降低。RD组中Prevotella_9、Alloprevotella、Phascolarctobacterium、Holdemania、Paras... 相似文献
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抗人红细胞H抗原单链抗体基因克隆和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆抗人红细胞H抗原单克隆抗体轻、重链可变区(VH、VL)基因并构建单链抗体(ScFv)基因及其表达载体,实现其在原核细胞中的表达.方法 从分泌抗人红细胞H抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株2FA中提取总RNA,采用RT-PCR法获得抗人红细胞H抗原单克隆抗体的VH、VL基因;利用重叠引物延伸法(splicing by overlap extension,SOE)将轻重链可变区基因连接,并引入连接肽(Linker)编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体(ScFv)基因,将其克隆到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,IPTG诱导表达;获得的目的蛋白经纯化后,用SDS-PAGE与Westem blotting对目的蛋白进行鉴定,间接EHISA、竞争ELISA和免疫荧光法检测目的蛋白的活性.结果 克隆的VH基因长度为351 bp,属于鼠抗体可变区重链基因家族I(B)亚群;VL基因长度为339 bp,属于鼠抗体可变区轻链基因家族I亚群;SOE法克隆的单链抗体基因为750 bp;构建的含原核表达载体的菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE及Western blotting法检测到Mr 32 000的目的蛋白(表达的ScFv);ScFv纯化后,经免疫荧光法、间接与竞争HLISA法检测到该ScFv蛋白具有生物结合活性.结论 成功地克隆了抗人红细胞H抗原单克隆抗体VH与VL基因和ScFv基因,构建ScFv基因的表达载体,实现了ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)plysS细胞中的活性表达,为基于红细胞H抗原的免疫检测技术建立奠定了基础. 相似文献
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目的探讨辣木叶总黄酮提取物抗疲劳效果及其生化机制。方法将48只雄性昆明小鼠分为正常对照(NC)、辣木叶粗提物(MLCE)和辣木叶总黄酮提取物(MLFE)3组。NC组灌胃纯水,MLCE和MLFE组分别灌胃辣木叶粗提物溶液[340 mg/(kg·bw)]和辣木叶总黄酮提取物溶液[75 mg/(kg·bw)],体积均为0.5 ml,灌胃14d后负重游泳,记录力竭游泳时间;另将48只小鼠分为安静对照(QC)、游泳对照(SC)和辣木叶总黄酮提取物(MLFE)3组,QC和SC组灌胃纯水,MLFE组灌胃辣木叶总黄酮提取物溶液[75 mg/(kg·bw)],灌胃体积均为0.5ml。实验D15,SC和MLFE组非负重游泳,90 min后取血液、肝脏和后腿肌肉组织,QC组采血后取相关组织,测定生化指标。结果 MLFE显著延长力竭游泳时间,且升高了游泳后小鼠血糖(Glu),降低血乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)水平,提高血清过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;维持肌肝糖原水平,提高组织中抗氧化酶、ATP酶活性及肌肉中游离脂肪酸(NEFA)的含量。结论辣木叶总黄酮提取物能通过调... 相似文献