帕金森病患者血清中M/Z2260肽的表达与鉴定

目的探讨帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清蛋白质生物标志物。方法选择原发性PD患者和正常人血清为样本,用弱阳离子交换(weak cationic exchange,WCX)磁珠捕获血清蛋白质组分,用基质辅助的激光解析离子化飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight masss pectrometer,MALDI-TOF-MS)检测各捕获组分的蛋白质质谱,用统计学方法分析原发性PD患者和健康人的蛋白质谱,筛选差异分子,用LC-MALDI-TOF/TOF鉴定差异分子,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定差异表达分子含量。结果在相对分子质量1000～50000范围内共检测到107个蛋白峰,其中9个蛋白质的表达发生显著变化(P<0.01)。一个相对分子质量为2260.1的蛋白质在PD血清中显著升高,是血清富组氨酸糖蛋白(histidine-rich glycoprotein,HRG)的C端降解产物。ELISA方法测定结果显示PD患者血清HRG含量低于正常人(P<0.05)。结论 PD患者血清低相对分子质量蛋白质的表达与正常人差异有统计学意义。HRG在PD患者血清中的含量低于正常人,而其C端降解片段在PD患者血清中的表达显著高于正常人。     

脐血CD34^＋细胞体外诱导分化为成熟巨核细胞及产出血小板

背景:据作者查新检索,国外尚无通过体外诱导干细胞生成具有功能的血细胞并形成产品的报道.目的:体外诱导脐血CD34+细胞向成熟巨核细胞分化,并观察血小板产出情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于200412006在湘雅医院及湘雅三医院中心实验室完成.材料:脐带来源于足月妊娠健康产妇,由湘雅医院提供.方法:免疫磁珠法分选脐血CD34+细胞,按5×107L-1密度接种于24孔培养板,加入含L-谷氨酰胺、铁饱和的人转铁蛋白、CaCl2、胰岛素、去离子牛血清白蛋白及重组人血小板牛成素的StemPro-34无血清培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件F向巨核细胞诱导培养14～21d.吸取细胞培养液,离心取上清,再次离心弃上清,余下物质即为细胞培养液中比重较小的血小板样颗粒.同法分离正常富血小板血浆中的血小板.主要观察指标:培养细胞与上清液中血小板样颗粒的形态变化、免疫组织化学染色结果、显微及超微结构观察,血小板聚集情况及CD41的表达.结果:培养第10天,巨核细胞诱导培养体系中出现丝状物质,片有血小板样颗粒产生,第16天达高峰:培养细胞强阳性表达血小板特异件抗原GP Ⅱb Ⅲa:光镜观察培养细胞呈成熟巨核细胞形态,但也可见幼稚巨核细胞样,巨核细胞旁可见血小板样颗粒:电镜观察培养细胞大多呈成熟巨核细胞形态,少量呈凋亡状态,上清液中血小板样颗粒与富血小板血浆中的血小板大小、超微结构基本一致,有的血小板表面光滑,有的则呈现不规则表面.上清液中血小板样颗粒与正常富血小板血浆中的血小板均能对凝血酶产生聚集反应,流式细胞仪检测两者具有同样的CD41高表达率.结论:脐血CD34+细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞,并产出血小板.     

氧化应激在亚慢性氟中毒大鼠肝脏损伤中的作用

目的 探讨氧化应激在亚慢性氟中毒大鼠肝脏损伤中的作用。方法 在饮水中加入50，100，和150mg／L氟化钠(NaF)喂饲大鼠3个月，制备亚慢性氟中毒模型。测定染氟各组大鼠肝脏脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及抗氧化酶超氧化物歧化酶(S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活力，同时检测血清中谷丙转氨酶(SG-PT)、谷草转氨酶(SGOT)的活性。结果 150mg/L染氟组大鼠肝脏MDA含量显高于对照组(P＜0．01)；100，150mg／L染氟组大鼠肝脏S0D活力显下降(P＜0．05)；随染氟剂量增加，GSH—PX活力有下降趋势；150mg／L染氟组SGPT活性显高于对照组(P＜0．01)，100，150mg/L染氟组SGOT活性显高于对照组(P＜0．01)，MDA与SGPT之间存在显正相关(r＝0．460，P＝0．007)。结论 氟中毒大鼠肝脏内氧化系统与抗氧化系统失衡，氧化应激引起的氧化损伤作用可能是氟致大鼠肝毒性的重要原因之一。     

实时荧光PCR检测高危型HPV的评价

目的评价杂交捕获二代(HC-Ⅱ)和实时荧光PCR(real-time PCR)两种人乳头瘤病毒(HPV)检测方法的一致性;探讨两法筛查宫颈癌及其癌前病变的敏感性和阴性预测值;为实时荧光PCR试剂盒的应用提供临床资料。方法对877名就诊的妇女用HC-Ⅱ和real-time PCR两种方法检测HPV,并进行宫颈液基细胞学检查(LCT),其中任一结果异常者再进行组织病理检查。结果877名妇女中有804名两种HPV检测法结果一致,总符合率达91.7%,一致性检验Kappa值为0.792。在对高级别宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的检测中,HC-Ⅱ和real-time PCR的敏感性分别为96.7%和94.6%,阴性预测值分别为99.5%和99.2%。结论real-time PCR与HC-Ⅱ检测具有很好的一致性,可用于宫颈癌及其癌前病变的筛查。     

奥扎格雷钠联合纳洛酮治疗急性脑梗死的疗效观察

目的观察奥扎格雷钠、纳洛酮联合应用治疗急性脑梗死的疗效。方法将122例急性脑梗死患者随机分成两组:治疗组应用奥扎格雷钠40mg,纳洛酮0.8mg,分别加入生理盐水250mL中静滴,1次·d-1,连用14d。对照组应用低分子右旋糖酐500mL加入复方丹参注射液20mL,1次·d-1,连用14d。分别对两组患者治疗前后临床神经功能缺损及治疗14d后临床疗效进行评定。结果两组治疗后临床疗效比较:治疗组显效率为77.4%,总有效率为90.3%,与对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。两组治疗前后神经功能缺损评分比较:治疗前治疗组和对照组评分的比较无显著性差异(P>0.05);治疗后治疗组和对照组评分的比较有显著性差异(P<0.05);治疗组、对照组治疗前后评分的比较均有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结论奥扎格雷钠联合纳洛酮治疗急性脑梗死疗效显著,且无不良反应,值得临床推广应用。     

贝克曼库尔特HMX血液分析仪白细胞不分类的原因及排除方法

美国贝克曼库尔特公司生产的HMX全自动五分类血液分析仪,具有分析速度快、检测项目多、结果准确、重复性好、性能稳定等特点,被广泛应用于各医院检验科。但在日常工作中常遇到白细胞不分类的现象。HM X血液分析仪进行白细胞分类是采用VCS技术,是从体积、核质比、颗粒特性、膜特     

黄芩总黄酮对低密度脂蛋白氧化的抑制作用

目的:从单味中药黄芩中提取总黄酮类化合物,观察其对低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的抑制作用。方法:以75%乙醇提取并加用碱提取酸沉淀法提取黄酮类成分,观察其对 Cu~(2 )诱导的 LDL 氧化的抑制作用,以硫代巴比妥酸反应物质法(TBARS)测定丙二醛(MDA)含量并计算药物对氧化的抑制率。利用直线相关及线性回归分析抑制率与药物浓度的关系。结果:黄芩总黄酮类提取物可使氧化动力曲线迟滞相延长,曲线峰值降低,40 μg/ml 时明显抑制过氧化脂质生成并有浓度依赖性,抑制率为50%时所需浓度(IR_(50))为12.88 μg/ml。结论:黄芩总黄酮类提取物有抑制 DL 体外氧化作用,并有浓度依赖性。     

急性淋巴细胞白血病常见融合基因检测的研究

 【摘要】　目的　探讨联合应用多重巢式反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术和染色体核型分析对急性淋巴细胞白血病（ALL）常见融合基因的表达和克隆性染色体异常的检出情况。方法　采用多重巢式RT-PCR技术对189例ALL患者进行检测,同时进行染色体R或G显带。结果　189例ALL患者中69例（36.5 %）检出10种融合基因（E2A-PBX1、TEL-AML1、bcr-abl、MLL-AF4、MLL-AF6、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ELL、SIL-TAL1、TLS-ERG）,染色体R或G显带可供分析的152例中,86例（56.6 %）检出染色体结构和数目异常;二者联合可使ALL克隆性染色体异常检出率增至69.3%（131例）。90例成年ALL患者中33例（36.7 %）检测阳性,其中bcr-abl 22例,未见TEL-AML1,99例儿童ALL患者中阳性36例（36.4 %）,其中TEL-AML1 24例,bcr-abl 2例。成年人组与儿童组bcr-abl 、TEL-AML1的表达率差异有统计学意义（均P＜0.01）。MLL相关融合基因、E2A-PBX1、SIL-TAL1、TLS-ERG等表达率差异无统计学意义（均P＞0.05）。66例正常核型的ALL患者检测出有bcr-abl 、TEL-AML1融合基因的存在。结论 成年人和儿童ALL融合基因表达各有侧重,多重巢式RT-PCR可用于初诊时染色体畸变的筛选,可在核型正常的ALL患者中检出隐匿的染色体易位,提供与预后相关的重要信息。     

清髓性脐血造血干细胞移植后混合嵌合状态一例

患儿 男,3岁,2010年11月20日无诱因咳嗽,咳痰,痰少,不易咳出,伴发热,体温达38．5℃,血常规：白细胞计数（WBC）1．25×10。／L、单粒细胞（M）0．13×109／L、血红蛋白（Hb）137g／L、血小板（Pit）34×109／L。骨髓象：骨髓增生活跃,单核系0．956,原始＋幼稚单核细胞0．912;免疫分型：B细胞占有核细胞的93．5％,考虑髓系来源的幼稚细胞。染色体：     

动物类中药质量控制的生物评价研究

动物类中药是中药中极具特色的一部分,其药性峻猛,药效成分不明确。现行动物类中药的质量控制和评价方法无法有效地控制其有效性及安全性,严重制约了动物类中药的发展。生物评价不拘泥于个别成分的作用,以生物效应直接关联药效和安全性。随着生物技术的发展,生物芯片、高内涵分析等新技术的涌现,从相关靶点、通路或关键生化因子入手,拓展了生物评价方法的领域。生物评价具有药效相关、整体可控等优势,符合中医药质量控制的特点,将成为动物类中药质量标准化的重要发展方向之一。