LC-MS/MS法测定人血浆中硫酸氨基葡萄糖浓度及其药动学研究

目的:建立测定人血浆中硫酸氨基葡萄糖浓度的方法,并考察其药动学特征。方法:采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC-MS/MS)法,色谱柱为Phenomenex ODS,流动相为甲醇-0.2%醋酸铵-0.1%甲酸缓冲液(梯度洗脱),流速为1.0mL.min-1;电喷雾电离源,正离子模式下以选择反应监测(SRM)方式进行监测。以DAS2.0软件进行房室模型拟合,计算主要药动学参数。结果:在选定的色谱及质谱条件下,硫酸氨基葡萄糖与内标及血浆杂质分离良好,氨基葡萄糖增量浓度在8.27～165、165～8268ng.mL-1范围内线性关系良好。方法回收率为103.8%～113.7%,日内和日间RSD均<20%。健康受试者单剂量口服低、中、高剂量(500、1000、1500mg)复方硫酸氨基葡萄糖分散片后的药-时曲线符合非房室模型,主要药动学参数分别为:t1/2为(1.2±0.4)、(1.3±0.4)、(1.4±0.9)h,tma(x2.6±1.4)、(2.7±0.9)、(1.9±0.8)h,cma(x417±193)、(795±281)、(925±282)ng.mL-1,AUC0～1(01416±201)、(3366±1020)、(4033±1282)ng.h.mL-1,MRT0～1(03.2±0.7)、(3.6±0.2)、(3.3±0.6)h;多剂量口服低剂量(每次500mg,tid)复方硫酸氨基葡萄糖分散片达到稳态后,主要药动学参数为:cssma(x294±75.6)ng.mL-1,cssmi(n59.4±55.7)ng.mL-1,tma(x1.9±1.1)h,t1/(21.4±0.8)h,AUC0～1(01015±243)ng.h.mL-1,AUCs(s1000±244)ng.h.mL-1,cssa(v125±30.6)ng.mL-1,MRT0～1(02.7±0.3)。结论:本方法适用于复方硫酸氨基葡萄糖分散片人体内药动学研究。健康受试者单剂量口服本品后,氨基葡萄糖的吸收程度(AUC0～t和cmax)与剂量在试验设计的剂量范围内存在一定的线性关系;连续口服本品后,在体内基本无积蓄现象。     

烟酰胺联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型的研究

目的：采用烟酰胺（NAA）联合链脲佐菌素（STZ）诱导方法建立2型糖尿病大鼠模型,并探讨NAA的最佳保护剂量。方法：将体重220～250g的雄性wistar大鼠70只随机分为7组,分别为对照组（A组：腹腔注射生理盐水,15min后尾静脉注射柠檬酸缓冲液）和造模组（B—G组：分别先腹腔注射100、120、140、160、180、200mg／kg的NAA溶液,15min后再尾静脉注射65mg／kg新鲜配制的STZ溶液）,造模后观察大鼠的尿量及饮水量,每周测定摄食量、体重及空腹血糖（FBG）,连续测定4周,实验结束测定各组大鼠糖化血红蛋白（HbAlc）及胰岛素（FINS）水平,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）,同时取大鼠胰腺行病理组织学检查。结果：实验过程只有B组有大鼠死亡,病死率为20％;B～G组的成模率依次为87．5％、80％、40％、20％、0％和0％。与A组相比,造模纽中只有B和C组大鼠的饮水量、尿量、摄食量明显增加（P〈0．05）,体重增长却明显减慢（P〈0．05）,造模4周只有B和c组的HbAlC、FINS及HOMA—IR与A组比有显著性差异（P〈O．05）,胰岛细胞数目及体积也显著减少。结论：大鼠腹腔注射120mg／kgNAA,并于15rain后尾静脉注射65mg／kgSTZ,可制备出成模率高、病死率低、症状明显的2型糖尿病大鼠模型。     

丹酚酸B通过Akt-eNOS通路对大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用的研究

目的:观察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对心肌缺血/再灌注(myocardia1ischemia/reperfusion,MI/R)损伤大鼠的保护作用,并进一步探讨Akt-eNOS通路在其中的关键作用。方法:通过结扎冠状动脉制备大鼠MI/R损伤模型,将动物随机分为假手术组、模型组、Sal B低及高剂量组。除假手术组和模型组动物于再灌注时给予生理盐水外,Sal B低、高剂量组动物于再灌注时给予Sal B溶液(20,60mg/kg)。再灌注结束后,伊文思蓝(EvansBlue,EB)、2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝(Tetrazolium chloride,TTC)双染法测定心肌梗死面积,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的水平,免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织中Akt、p-Akt和eNOS、p-eNOS蛋白的表达。结果:与模型组相比,Sal B低、高剂量组大鼠心肌梗死面积明显减少(P<0.05),血清中CK-MB、LDH活性明显下降(P<0.05),并且Sal B低、高剂量组p-Akt/Akt及p-eNOS/eNOS相对灰度值均明显高于模型组(P<0.01)。结论:Sal B对大鼠MI/R损伤有一定的保护作用,其机制可能与激活Akt-eNOS信号通路相关。     

丹参素钠通过抑制炎症反应对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨丹参素钠通过抑制炎症反应对大鼠心肌缺血-再灌注(myocardial ischemia-reperfusion,MI/R)损伤的保护作用。方法采用结扎冠状动脉复制大鼠MI/R损伤模型,将动物随机分为假手术组,模型组,丹参素钠低、中、高剂量组。除模型组于再灌注时给予生理盐水外,丹参素钠低、中、高剂量组于再灌注即刻给予丹参素钠(15、30、60 mg kg-1)。实验终末,测定心肌梗死面积,检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)和白细胞介素6(IL-6)水平,采用苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌组织的病理性改变。结果与模型组相比,丹参素钠中、高剂量组大鼠心肌梗死面积显著减少(P<0.05),血清中CK-MB、cTnI的浓度显著下降(P<0.05),并且丹参素钠高剂量组TNF-α、IL-1、IL-6均显著小于模型组(P<0.05),所有给药组心肌组织的病理损伤也小于模型组。结论丹参素钠对大鼠MI/R损伤有保护作用,其机制与抑制MI/R损伤时的炎症反应相关。     

楤木皂苷胶囊成型工艺辅料筛选

目的:优选楤木皂苷胶囊的成型工艺辅料。方法:以颗粒的成型合格率、吸湿百分率、休止角和堆密度为评价指标,在逐一单个筛选辅料的基础上,筛选出适合制备楤木皂苷胶囊的混合辅料,并考察临界相对湿度(CRH)。结果:微晶纤维素-乳糖(1:1,m/m)混合辅料制成的颗粒抗潮性能强,流动性好。CRH为78%。结论:所选辅料可用于制备楤木皂苷胶囊。     

太白楤木皂苷对砷诱导的肝细胞线粒体途径凋亡的保护作用

目的探讨太白楤木皂苷对砷暴露损伤的保护作用及分子机制。方法人正常肝细胞HL-7702进行砷暴露及太白楤木皂苷保护处理。砷暴露组用10μmol L-1终浓度的NaAsO2处理,太白楤木皂苷保护组用不同浓度太白楤木皂苷预处理12 h后,再进行砷暴露处理。24 h后MTT法检测细胞活力;12 h后收集细胞样品,分别检测细胞的凋亡、活性氧（ROS）、还原型谷胱甘肽（GSH）,氧化损伤产物丙二醛（MDA）水平以及线粒体凋亡途径的重要因子细胞色素C（Cyto C）释放和Caspase-3的激活情况。结果砷暴露可以引起肝细胞活力显著降低,给予不同浓度的太白楤木皂苷具有一定的保护作用,其中5μg mL-1太白楤木皂苷保护效果最佳。砷暴露可以引起细胞凋亡比例显著增加,细胞ROS水平升高,GSH水平降低,氧化损伤产物MDA水平增加,线粒体凋亡途径因子Cyto C和Caspase-3的激活。太白楤木皂苷（5μg mL-1）预处理能够显著拮抗砷暴露引起的细胞上述指标变化。结论砷暴露可以通过诱导细胞氧化应激,激活线粒体途径细胞凋亡,发挥其损伤毒性作用。太白楤木皂苷可以通过抑制细胞氧化应激,抑制线粒体途径的细胞凋亡,从而发挥其抗砷暴露损伤的保护作用。     

RP-HPLC法测定大鼠血浆及胃肠道内容物、黏膜中酮洛芬的浓度

目的:建立以反相高效液相色谱法测定大鼠血浆及胃肠道内容物、黏膜中酮洛芬浓度的方法。方法:色谱柱为Hypersil C18,流动相为甲醇-50mmol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH3.5,52∶48,V/V),检测波长为258nm,柱温为30℃,流速为1mL·min-1。结果:酮洛芬在各生物样本中检测浓度范围内线性关系良好(r为0.9926～0.9999);平均绝对回收率为83.76%～99.43%,平均方法回收率为86.41%～115.68%;日内RSD小于9.85%,日间RSD小于14.84%。结论:本方法准确、快速、灵敏,可用于生物样品中酮洛芬的浓度测定。     

应用自配口腔护理液防治重型肝炎病人口腔感染的效果研究

[目的]探讨自配口腔护理液预防重型肝炎病人口腔感染的疗效。[方法]将86例重型肝炎病人随机分为试验组和对照组,试验组使用自配口腔护理液(碳酸氢钠联合制霉素片和维生素B族),对照组使用复方己定含漱液进行口腔护理,通过观察口臭、口腔黏膜白斑、咽拭子培养加涂片实验室检查结果及抗生素使用情况,对其疗效进行比较分析。[结果]两组病人入院第1周口臭情况、口腔黏膜情况、咽拭子培养加涂片结果比较,差异均无统计学意义(P0.05)。两组病人在疾病治疗过程中使用抗生素情况比较差异无统计学意义(P0.05)。应用不同口腔护理液后,两组病人出院时口臭改善情况、口腔黏膜白斑好转情况比较差异有统计学意义(P0.01)。出院时,试验组咽拭子培养加涂片结果均正常,无一例真菌感染;对照组咽拭子培养加涂片结果提示有8例真菌感染,两组疗效差异有统计学意义(P0.01)。[结论]自配口腔护理液对防治重型肝炎病人口腔感染有显著效果。