PPARγ配体对1型糖尿病大鼠的治疗作用探讨

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对STZ诱导的1型糖尿病大鼠胰腺β细胞的保护作用及其机制.方法实验用STZ诱导1型糖尿病大鼠动物模型,以罗格列酮5 mg*kg-1*d-1连续给药30 d.记录体质量和禁食血糖的变化.治疗第31天(停药后第1天)及治疗第61天取材观察胰腺形态学变化,应用免疫组织化学染色显示胰岛β细胞和nNOS的表达情况.结果与未治疗糖尿病动物相比,罗格列酮治疗组大鼠的糖尿病体征显著减轻,胰腺未见明显的病理改变,胰岛内胰岛素阳性细胞数量增多、接近正常水平,与此同时,胰腺内一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)活性降低,而nNOS表达增强.结论罗格列酮对STZ诱导的1型糖尿病大鼠胰岛有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制巨噬细胞内iNOS的活性,减轻胰岛的炎症反应,避免β细胞损害,促进胰岛功能的恢复.     

免疫组化中抗体回收再用的体会

免疫组织化学技术在国内已广泛开展。但由于国内抗血清来源困难,尤其是第一抗血清(一抗)的紧缺,给这项工作的普及设置了障碍。本实验室在开展消化道神经肽免疫组化工作中,将用过的抗血清做回收再用,收到较好的效果。介绍如下:1.抗血清:一抗本实验选用四种抗血清:血管活性肠肽(VIP)、物质P(sp)、生长抑制(SOM)和亮啡肽(LNK)抗血清(Immuno.Nuclean Comp.)。工作浓度均为1∶6000。二抗(羊抗兔血清)及PAP来自上海医科大学病理科。二抗工作浓度为1∶40;PAP为1∶80。2.取材:雄性大白鼠两只,体重约200克。4%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(3-4 mg/100 g)。     

胶原蛋白具有促进肿瘤相关巨噬细胞向M1型极化的作用

目的 以临床结直肠肿瘤患者标本和原位癌小鼠模型以及小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,探讨结直肠肿瘤微环境中胶原蛋白促进肿瘤相关巨噬细胞极化的作用。方法 应用免疫荧光染色检测结直肠癌患者肿瘤组织巨噬细胞的分布,检测原位癌模型小鼠肿瘤组织巨噬细胞的量和分布;Masson染色肿瘤组织内胶原纤维。提取小鼠腹腔巨噬细胞,接种于不同浓度Ⅰ型胶原蛋白包被的培养皿,Real-time PCR 检测巨噬细胞的肿瘤坏死因子（TNF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、CD163、CD206等基因表达。 结果 人结肠癌组织标本和小鼠原位癌模型可见巨噬细胞主要分布于肿瘤组织的间质,主要为M1型,肿瘤实质部分巨噬细胞主要为M2型;细胞实验表明,胶原蛋白明显促进巨噬细胞向促进炎症抑制肿瘤的M1型巨噬细胞极化,抑制巨噬细胞向促进肿瘤的M2型极化;Masson染色可见间质内含有大量胶原纤维,而肿瘤实质细胞周围胶原纤维较少。 结论 胶原蛋白具有促进巨噬细胞向M1型极化的作用,而肿瘤实质细胞周围胶原纤维减少,可能与巨噬细胞向M2型极化,发挥促进肿瘤发生发展的作用有关。     

成体干细胞的可塑性研究

近年越来越多的研究表明不同组织中存在的成体干细胞不仅具有自我更新和不断增值的能力，还具有跨胚层分化的能力，这为临床移植医学提供了新的思路。未来医学中，应用成体干细胞及其衍生的组织或器官替代受损的组织细胞治疗急慢性疾病将成为可能。     

C-KIT蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨C-KIT蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义.方法应用免疫组织化学方法检测46例原发结直肠癌组织和30例癌旁正常组织的C-KIT蛋白和CEA的表达.结果 46例结直肠癌组织中,C-KIT蛋白表达率为15.2%(7/46),其中9例低分化结直肠癌组织中C-KIT蛋白阳性表达率高达77.8%(7/9),而12例高分化、25例中分化结直肠癌组织及30例癌旁正常组织未见C-KIT蛋白表达;统计分析表明C-KIT蛋白的表达在不同肿瘤大小和临床分期的结直肠癌间无显著差异(P>0.05),而在不同癌细胞分化程度间差异显著(P<0.05).结论表达C-KIT蛋白的结直肠癌细胞呈低分化趋向,提示以C-KIT为靶点治疗低分化结直肠癌患者具有一定的可能性.     

Reg Ⅳ在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测RegⅣ蛋白在人胃癌组织中的表达与分布,探讨其作为胃癌检测标志物的可能性.方法免疫组织化学染色检测26例临床胃癌组织及10例正常胃组织中RegⅣ蛋白的表达.结果RegⅣ蛋白在正常胃组织表达阴性(0/10),在胃癌组织表达阳性率为42.31%(11/26),具有显著的统计学意义(P＜0.05);RegⅣ蛋白在Ⅰ/Ⅱ期胃癌中表达阴性(0/3),而在Ⅰ/Ⅱ期胃癌中表达阳性率为47.83%(11/23),二者差异有显著统计学意义(P＜0.05).但RegⅣ蛋白的表达与胃癌分化程度及有无淋巴结转移等无明显的差异(P＞0.05).结论RegⅣ蛋白在胃癌中表达较高,约50%左右,主要为Ⅰ/Ⅱ期胃癌,提示RegⅣ蛋白可能与胃癌的生长侵袭等有关,作为浸润癌的病理诊断具有一定的实际意义.     

Cajal细胞在脓毒症所致胃肠动力障碍中的形态改变及厚朴酚干预的实验研究

目的研究Cajal细胞在脓毒症所致胃肠运动障碍中的形态变化,以及厚朴酚和莫沙必利干预对其影响。方法采用尾静脉注射内毒素的方法制备脓毒症小鼠模型。动物采用数字表法随机分为4组,分别为对照组、脓毒症模型组、模型厚朴酚干预组和模型莫沙必利干预组。造模后12 h分别测定各组小肠传输速率、小肠平滑肌肌条自主收缩频率以及波幅,进行小肠动力学研究。制备小肠平滑肌铺片,以免疫荧光组织化学染色法观察各组间小肠Cajal细胞形态变化并定量计算细胞数量和细胞突触长度。提取小肠肌条组织测定超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量以及一氧化氮含量,评价脓毒症时小肠氧化应激状态。结果造模12 h后,脓毒症模型组小肠传输速率较对照组明显减慢(P<0.05),厚朴酚和莫沙必利干预可以明显增加小肠传输速率(P<0.05)。造模12 h后,脓毒症模型组小肠肌条自主收缩频率和波长较对照组明显减慢(P<0.05),厚朴酚和莫沙必利干预可以明显增加小肠肌条收缩频率和波长(P<0.05)。小肠肌条铺片免疫荧光组织化学染色显示,同对照组相比,脓毒症模型组的Cajal细胞数量明显减少,从正常的每mm2有235个降低到113左右,残存细胞的突起变粗,长度也缩短,分支减少,不能形成完整的细胞网络。在厚朴酚干预组中,平均每mm2有201个作用小肠Cajal细胞,较脓毒症模型组上升;平均每个细胞的突起长度为687μm并形成复杂的细胞网络,平均每个细胞的突触长度和总细胞的突触长度较脓毒症模型组增加。在莫沙必利干预组中,也可以见到小肠Cajal细胞数量较脓毒症模型组上升,平均每个细胞的突触长度和总细胞的突触长度增加。与对照组相比,脓毒症模型组小肠组织超氧化物歧化酶活力明显降低(P<0.05),丙二醛浓度显著增高(P<0.05),小肠组织一氧化氮浓度显著增高(P<0.05),提示脓毒症时小肠处于过度氧化应激状态。厚朴酚干预可以增加超氧化物歧化酶活力(P<0.05),丙二醛水平降低(P<0.05),明显降低小肠组织一氧化氮水平(P<0.05),提示厚朴酚可以纠正脓毒症时的过度氧化应激。但莫沙必利干预和脓毒症模型组相比,超氧化物歧化酶活力、丙二醛浓度以及一氧化氮浓度差异无统计学意义。结论脓毒症时可发生严重的胃肠运动障碍,Cajal细胞形态学发生明显变化。肠道氧化应激是胃肠运动障碍重要发生机制。厚朴酚可以改善脓毒症所致胃肠运动障碍。拮抗氧化应激和调控Cajal细胞可能是其产生这一作用的机制。     

豚鼠Oddi括约肌内Cajal样细胞及NOS表达阳性神经元的分布

目的研究Cajal样细胞和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)表达阳性神经元在成年豚鼠Oddi括约肌(sphincter of Oddi,SO)的分布。方法成年豚鼠SO冷冻切片,c-Kit免疫细胞化学和NADPH-黄递酶组织化学双重染色。结果SO横切面环行平滑肌层内可见少量c-Kit阳性细胞,胞体呈梭形,两端伸出细长的突起。纵切面SO的两个壁分别为:外侧壁和十二指肠壁内SO壁,前者与肠壁结构类似,在深肌丛和肌间神经丛周围可见较多的c-Kit阳性细胞;而十二指肠壁内SO壁的肌层内存在大量c-Kit阳性细胞和突起,其形态与肠壁肌层内Cajal细胞相似。NADPH-黄递酶组织化学染色可见NOS表达阳性神经元广泛分布于SO的肌间神经丛和平滑肌内。c-Kit免疫细胞化学和NADPH-黄递酶组织化学双重染色虽未发现二者的共存,但可见c-Kit阳性细胞及突起存在于NOS表达阳性神经元的附近。结论豚鼠SO内存在的Cajal样细胞可能参与SO自主节律性运动的调控,可能是NOS表达阳性神经元对SO运动发挥调节作用的靶细胞。     

石蜡包埋标本用于制作树脂半薄大切片的方法

目的介绍利用石蜡包埋标本制作树脂半薄大切片用于光镜研究的方法：方法将石蜡包埋标本方法与树脂包埋方法结合并进行改良，利用超薄切片机和玻璃刀制作树脂半薄大切片结果光镜观察见切片平整．结构显示清晰。结论该方法制作的切片与电镜树脂包埋方法制作的连续半薄大切片结果相似，具有推广应用的价值.