长爪沙鼠胃肠道Cajal间质细胞的形态学

目的 探讨长爪沙鼠胃肠道Cajal间质细胞（ICCs）的形态和分布规律。 方法 采用10只成年长爪沙鼠,体重50~70g,取胃、小肠、结肠制作冷冻切片,结合全层铺片的c-Kit免疫荧光染色。结果 ICCs呈网络状分布于整个胃肠道,不同部位ICCs的分布及形态有所不同。在胃底部,仅见肌内ICCs(ICC-IM）,而在胃体和胃窦部除ICC-IM外,可见肌间ICCs(ICC-MY)分布在肌间神经丛周围;其细胞密度胃底ICC-IM最多,由胃底至胃窦逐渐减少,而ICC-MY由胃体至胃窦逐渐增多。在小肠可见ICC-IM, ICC-MY和深肌层ICCs(ICC-DMP)3个亚群,结肠管壁内也分布有ICC-IM、ICC-MY和黏膜下ICCs(ICC-SM)3个亚群。结论 沙鼠可用于有关ICCs正常形态、结构及功能的研究。     

猫的胆囊及肝外胆道系统植物性神经分布观察——组织化学法和免疫组化法

应用乙酰胆碱酯酶染色,乙醛酸诱发荧光及免疫过氧化物酶(PAP)法,采用铺片和切片,对猫的胆道系统植物性神经分布进行了观察。证明猫的胆道系统植物性神经由胆碱能、肾上腺素能及肽能神经组成两个神经节丛,即粘膜下神经节丛和浆膜下神经节丛。肾上腺素能神经分布于胆囊的浆膜下和粘膜固有层,参与上皮下丛和血管周神经丛的构成。生化检测组织中去甲肾上腺素(NA)含量结果表明:胆囊管NA含量最高,与其它各部位相比差异非常显著(P<0.01),其余各部之间差异不显著(P>0.05)。猫的胆道系统各层亦存在舒血管肠肽(VIP)、P物质(SP)、亮啡肽(L-ENK)及生长抑素(SOM)四种多肽免疫反应性神经,其中VIP最丰富,SP和L-ENK较少,SOM最稀疏,四种肽均以胆胰管括约肌处最为致密。本文并结合肽能神经对胆道系统的作用进行了讨论。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素6（IL－6）表达的影响。方法：低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞，采用RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组IL－6基因的表达水平，并测定细胞培养上清中IL－6的活性。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中IL－6　mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，低氧12h组有所降低，但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL－6的活性明显升高，6h组细胞上清中IL－6的活性水平最高，12h组的活性降低，24h组的水平低于2h组。IL－6活性水平与其基因表达的水平一致。结论：低氧可以增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中IL－6基因的表达，使细胞培养上清中IL－6活性升高，进有可能激活其它一些信号转导相关基因调节细胞的低氧反应。     

成体干细胞治疗糖尿病的实验研究

糖尿病是严重危害人类身心健康的常见病、多发病，其治疗的关键是胰岛细胞的再生，以阻止糖尿病的发展和并发症的发生。近来胰腺或胰岛细胞移植技术在糖尿病治疗上已经取得了一些进展，但供体细胞来源不足和免疫排斥反应等困难却极大地限制了这种方法的应用。而患者自身干细胞极强的自我更新能力及多向分化潜能无疑为解决以上问题带来了希望。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞信号转导及转录激活因子亚型Ⅱ基因的克隆及序列分析

目的：克隆大鼠肺动脉平滑肌细胞信号传导与转录活化因子亚型Ⅱ基因（STAT2）并对此序列进行同源性分析。方法：单纯胶原酶法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞，采用RT－PCR克隆大鼠肺动脉平滑肌细胞信号传导与转录活化因子亚型Ⅱ基因（STAT2）cDNA编码序列，应用PCR、四色荧光和双脱氧终止法测序；并对克隆序列进行同源性分析。结果：应用RT－PCR克隆出大鼠肺动脉平滑肌细胞STAT2 cDNA编码序列。大鼠肺动脉平滑肌细胞STAT2 cDNA编码序列与Genbank中小鼠STAT2 cDNA相应序列具有高度同源性。结论：正常培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号传导与转录活化因子亚型Ⅱ基因（STAT2）。而克隆STAT2有利于探索大鼠血管性疾病信号转导的机制和防治。     

低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶（JAK）基因表达的作用。方法：鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养，采用半定量RT－PCR技术检测常氧组、低氧2、6、12h组的JAK1、JAK2和JAK3基因的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。RT－PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结论：低氧增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中JAK基因的表达，而JAK基因在低氧所致的肺动脉收缩和低氧肺动脉高压的信号转导中可能发挥重要作用。     

白藜芦醇诱导人皮肤癌细胞系凋亡的可能信号通路

目的 探讨白藜芦醇(Res)诱导人皮肤癌细胞系(A431细胞)凋亡的可能信号分子,为临床相关疾病的治疗提供新的实验依据.方法 培养的A431细胞分为:对照组(A组)、Res(B组)、Res加SP600125(C组)以及单纯SP600125组(D组).免疫荧光染色、Western blot及相差显微镜观察等方法检测细胞形...     

多效生长因子诱导人脐血间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞分化

目的探讨多效生长因子(PTN)诱导人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)向多巴胺(DA)能神经元样细胞分化的可能机制。方法密度梯度离心和贴壁筛选法纯化CB-MSCs,加入重组人PTN(rPTN)作为诱导组(rPTN组),以单纯传代培养的CB-MSCs作为对照(CON组),培养48 h后用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定CB-MSCs表达PTN及其受体SDC3和ALK,以及诱导分化的细胞表达TH、DAT和NSE的情况。结果随rPTN诱导时间延长,CB-MSCs形态发生变化,TH、DAT和NSE的表达量明显增加,免疫荧光细胞阳性率:TH(CON组)为3.77%±0.42%,(rPTN组)为7.91%±0.55%;DAT(CON组)为1.89%±0.28%,(rPTN组)为6.21%±0.77%;NSE(CON组)为4.35%±0.76%,(rPTN组)为7.67%±0.97%,同对照组相比(P<0.05);诱导的CB-MSCs表达PTN受体SDC3明显高于对照组;rPTN可诱导CB-MSCs自身表达PTN增加,免疫荧光细胞阳性率:PTN(CON组)为14.38%±0.54%,(rPTN组)为20.21%±1.51%;...     

人胰腺干细胞的体外分离培养、鉴定和分化特性

目的：体外分离培养人胰腺干细胞，进行鉴定并初步观察其分化为胰岛内分泌细胞的能力。方法：用酶消化法从人胎儿胰腺分离胰腺干细胞，培养并传代，应用胰腺干细胞特异性标志物CK－19、胰岛β细胞特异性成分胰岛素和α细胞特异性成分胰高血糖素的抗体进行免疫细胞化学染色鉴定细胞种类和分化特性。结果：分离培养的人胎儿胰腺干细胞呈梭形，最初1周生长较慢，以后增殖较快，约培养3周后即可传代培养。传代细胞约生长2周即可再次传代，免疫细胞化学染色显示细胞呈CK－19免疫阳性反应。经诱导分化后，细胞形成类胰岛样组织，此时免疫细胞化学染色显示部分细胞呈随岛素免疫阳性反应，少数细胞呈胰高糖素免疫阳性反应。结论：人胰腺干细胞能在体外培养条件下快速增殖，并具有多向分化潜能，能分化形成胰岛β细胞和α细胞。     

HCN2阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛内的分布

目的探讨超级化激活环核苷酸调控的阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2,HCN2)阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛的分布。方法成年昆明小鼠的胃肠道,包括胃、小肠、结肠,制作全层铺片,免疫细胞化学染色HCN2阳性细胞、胆碱能神经及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)。结果成年小鼠胃肠道肌间神经丛的HCN2阳性细胞成簇紧密排列,多数阳性细胞为DogielⅡ型神经元,阳性产物分布在细胞质和细胞膜,每个神经节内可见数个至数十个阳性细胞;神经突起虽可见HCN2阳性产物,但主要存在于较粗的突起。HCN2阳性神经元分布密度在胃肠道各段存在较大差异(P<0.05):以结肠密度最高,胃次之,小肠略低。利用胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶(ChAT)和ICCs的标志物(c-kit蛋白)分别与HCN2通道进行双重免疫染色,可见HCN2存在于胆碱能神经元,未见HCN2存在于ICCs的胞体,ICCs的突起与HCN2阳性神经元距离很近。结论HCN2离子通道广泛表达于肌间神经丛,主要表达于胆碱能神...