生物化学双语教学的现状分析

摘要：讨，为高等医学院校更好地开展生物化学的双语教学提出了一些建议。     

hERR1/HBD酵母表达质粒的构建及初步鉴定

目的：构建酵母双杂合系统诱铒蛋白表达质粒pGBT9-hERR1/HBD。方法：PCR扩增hERR1/HBD（激素激活域）cDNA，与酵母Gal4/DBD(DNA结合域）表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒，酶切、测序鉴定后，用于酵母双杂合分析，检查其自主转录激活作用及与已知hERR1辅活化子PNRC的相互作用。结果：该质粒有正确的阅读框，其表达蛋白不具有自主转录激活作用，与已知核受体辅活化子PNRC有明显的相互作用。结论：成功构建了表达质粒pGBT9-hERR1/HBD，并证实该质粒可作为酵母双杂合系统的诱铒蛋白质粒，用于乳腺组织中与hERR1有相互作用的蛋白质基因的筛选。     

人BAFF cDNA的克隆及原核表达载体的构建

目的 克隆人BAFF（B cell activating factor belonging to the TNF family)全长及128－285片段的cDNA并构建其原核表达载体，为表达和检测其生物学活性做准备。方法 提取HL－60细胞总RNA，经RT－PCR扩增编码人BAFF全长及128－285氨基酸残基的cDNA序列，并将其克隆至载体pUC18和pUC19进行序列测定，然后构建于新型原核表达载体pQE-80L中。结果 RT－PCR扩增得到了858bp和477bp的DNA片段，序列分析与GenBank中报道的编码BAFF全长及128－285氨基酸残基的cDNA序列完全一致。结论 BAFF cDNA的克隆及其原核表达载体的构建，为进一步表达和检测其生物学活性奠定了基础。     

PNRC在不同发育时期大鼠组织中的表达及其在人乳腺癌和相应癌旁组织中的表达差异

目的：探索核受体辅活化子（coactivator）PNRC（proline-rich Nuclear receptor coregulatory protein）在不同发育时期正常大鼠各种组织中的表达与其生理作用的关系;PNRC在人乳腺癌和相应癌旁组织中的表达与乳腺癌的关系.方法：以β-actin基因为参照,应用半定量RT-PCR和southern印迹技术,检测不同发育时期正常大鼠各种组织中PNRC的表达水平及其在人乳腺癌和癌旁组织中的表达.结果：PNRC在正常大鼠和胎鼠相应组织中广泛表达且无组织差异性（P＞0.05）;在成年大鼠各种组织中的表达明显高于胎鼠相应组织（P＜0.01）.PNRC在人乳腺癌中的表达水平明显低于相应癌旁组织（P＜0.01）.结论：PNRC是一种必需的、广泛表达的转录调节因子,它可能参与了机体多种正常组织的发育过程;在人乳腺癌和癌旁组织中的表达差异与它在乳腺癌发生中的潜在作用密切相关.     

视黄醇结合蛋白的研究进展

视黄醇结合蛋白（RBP）是体内负责结合并转运维生素A的一种血浆转运蛋白，在调节机体维生素A的分布、摄取及利用中具有关键性作用，并与营养及多种疾病有关。     

hERR1对乳腺癌细胞生长活性及ER转录激活功能的影响

目的 构建hERR1高表达的乳腺癌细胞株，研究hERR1对乳腺癌细胞株生长活性的影响及其机制。方法 PCR构建hERR1真核表达载体，转染乳腺癌细胞株，G418筛选稳定表达细胞株；MTT法研究hERR1高表达株的生长速率；瞬时转染结合CAT活性分析，研究hERR1对ER转录功能的影响。结果 筛选了hERR1高表达乳腺癌细胞株；局部高表达的hERR1在体外抑制乳腺癌细胞株的生长；hERR1以剂量依赖方式抑制ER转录激活功能。结论 局部高表达hERR1可能通过与ER竞争结合ERE，抑制ER的转录活化功能，从而抑制ER阳性乳腺癌细胞株的生长。     

hERR1在乳腺癌中的表达及其对芳香族化酶表达的调控

目的：了解hERR1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况，以及它对芳香族化酶基因表达的调节作用。方法：收集乳腺癌患者的临床标本，应用RT-PCR法，研究癌组织及相应的癌旁组织中hERR1的表达情况；采用瞬时转染和CAT活性分析的方法，研究hERR1对芳香族化酶基因表达的调节。结果：hERR1在癌组织中的表达明显高于相应的癌旁组织（16/26例）；hERR1以剂量依赖方式促进芳香族化酶启动子I.3活性。结论：hERR1在体内可能起到促进乳腺癌生长的作用。     

研究生分子生物学实验课的教学体会

分子生物学已成为21世纪生命科学领域的一个重要学科,分子生物学技术也随之成为医学研究和生命科学中普遍应用的手段和方法。分子生物学理论课教学内容多,范围广,有一定的深度和难度,如果不做实验,学生很难透彻理解和掌握。而分子生物学又是一门技术性很强的学科,因此,分子生物学实验课     

ERR1突变体K244A对其转录活化功能的影响

目的分析ERR1突变体K244A对ERR1转录活化功能的影响。方法用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突变体ERR1/K244A到表达质粒pSG5上．通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1 K244A对ERR1转录活化功能的影响结果测序证实成功构建了ERR1的突变体pSG5/ERR1／K244A。报告基因表达系统检测显示ERR1 K244A激活的荧光素酶报告基因活性明显低于野生型的ERR1。结论ERR1突变体ERR1 K244A转录活化功能明显低于野生型的ERR1．为进一步研究ERR1的结柏与功能打下了基础．     

多聚腺苷二磷酸-核糖对DNA损伤的应答

聚腺苷二磷酸(ADP)-核糖酰基转移酶多聚(ADP-核糖)是由染色质结合的多聚(ADP-核糖)聚合酶催化,在真核细胞核中合成。多聚(ADP-核糖)聚合酶[又称多聚(ADP-核糖)合成酶或转移酶]是一组ADP-核糖酰基转移酶中的一种,它能在烟酰胺和核糖环间的N-糖基键上裂解烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NA-D),并将ADP-核糖部分转移至各种接受体分子形成共价键。已经从许多组织如胸腺、肝脏和扁桃体分离纯化出均一的多聚(ADP-核糖)聚合酶。来源于许多组织的这种聚合酶的特征类似于我们