同源重组修复基因RAD51可提高PTEN缺失细胞基因组稳定性

目的：研究同源重组修复基因RAD51对PTEN缺失小鼠胚胎成纤维细胞基因组稳定性的影响。方法：应用免疫荧光和中性单细胞电泳技术观察PTEN缺失后自发性和辐射诱导DNA双链断裂情况;并构建PTEN缺失细胞稳定转染RAD51的细胞系,γ射线照射后检测细胞存活率。结果：PTEN缺失导致细胞自发性和辐射诱导DNA双链断裂增多;转染RAD51后细胞存活率增高,辐射诱导的DNA双链断裂减少。结论：同源重组修复基因RAD51可以提高PTEN缺失细胞基因组稳定性。     

老年人外周血淋巴细胞的DNA期外合成

在人体衰老过程中,机体各系统不断地发生变化,其中免疫系统的变化较为明显。淋巴细胞是免疫系统的主要细胞,研究其功能变化对研究衰老及抗衰老都具有重要意义。为此,我们选用外周血淋巴细胞为实验对象,用紫外线照射,造成细胞DNA损伤,在加入羟基脲抑制DNA半保留复制合成的前提下,通过~3H-TdR参入率测定人淋巴细胞DNA期外合成(un-scheduled DNA synthesis,UDS)的变化,以此来观察和比较不同年龄的人淋巴细胞DNA对损伤的修复能力。 1材料与方法 1.1细胞老年人无肿瘤和内分泌病病史,青年人为献血者,取出的静脉血肝素抗凝,然后用淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)分离出淋巴细胞。将细胞加到含植物血凝素(PHA)的1640培养液中,培养3天后测定     

hHBrk1与WAVE1蛋白相互作用位点的鉴定

目的: 鉴定微丝相关蛋白hHBrk1与WAVE1的结合位点。方法: 利用PCR的方法克隆人 WAVE1 及各结构域的基因片段,并将之亚克隆至真核表达载体;免疫共沉淀技术检测hHBrk1与WAVE1结合位点。结果: 获得了 WAVE1 及各结构域基因的真核表达载体;免疫共沉淀发现hHBrk1与WAVE1的Scar同源结构域(SHD)结合,而WAVE1蛋白结合于hHBrk1的羧基端,羧基端七肽重复(HR)结构域点突变后获得的蛋白失去了与WAVE1的结合能力。结论: hHBrk1可能通过HR结构域与WAVE1的SHD区结合,参与WAVE1蛋白的细胞亚定位或维持其稳定性,从而调控肿瘤细胞的迁移。     

LKB1基因功能及与肿瘤关系研究进展

LKB1基因是一抑癌基因,其编码产物为一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.LKB1的功能主要是使细胞周期阻滞在G1期、促进细胞凋亡和调节胚胎血管形成等.LKB1基因的胚系突变是Peutz-Jeghers综合征的主要致病因素.在散发肿瘤中也发现有LKB1基因突变,其中以肺腺癌和子宫颈粘液微偏癌突变率较高,分别达30%和55%左右.     

DNA-PKcs反义核酸增强HeLa细胞对辐射及化疗药物顺铂的敏感性

目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体，建立DNA—PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型。方法采用RT-PCR扩增DNA—PKcs的cDNA片段，DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体；利用Lipofectamine介导基因转染，Western blot分析鉴定反义核酸抑制DNA—PKcs表达的细胞模型；细胞克隆形成法和细胞生长曲线分析细胞对UV和顺铂的敏感性。结果克隆了DNA-PKcs 5’端320bp cDNA片段，重组于tet启动子控制表达质粒pCl^neo-Tet-splice，转染Hela细胞，获得3个稳定转化克隆；Western blot结果表明细胞中DNA-PKcs表达受到反义核酸的抑制，并且细胞对紫外线辐射和顺铂敏感性增加。结论成功建立了DNA-PKcs表达受到反义核酸抑制的细胞模型，抑制DNA-PKcs表达提高了细胞的辐射和顺铂的敏感性。     

DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定

目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。     

VND3207及其代谢产物在大鼠体内的药代动力学

目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)方法,同时测定血浆中VND3207及其代谢产物的浓度并探讨VND3207在大鼠体内的药代动力学。方法 SD大鼠ig给予VND3207 70 mg.kg-1后,于不同时间点采集血样,血浆样品经C18反相液相色谱柱梯度洗脱,采用串联质谱正离子检测多反应监测模式对VND3207及其代谢产物丁香酸和丁香醇进行定量分析,计算VND3207及其代谢产物的药代动力学参数。结果 VND3207、丁香酸和丁香醇的定量线性范围均为2～2000μg.L-1,最低定量下限为2μg.L-1,日内和日间精密度CV均<15%,准确度为91.2%～110.7%。通过测定SD大鼠ig给予VND3207 70 mg.kg-1后12 h的血药浓度,计算VND3207,丁香酸和丁香醇药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为19.37±10.56,1825.32±719.97和(9.89±1.75)mg.L-1.min;消除半衰期(T1/2)分别为78.0±44.6,114.4±17.9和(66.0±23.8)min。结论 建立了快速、灵敏、准确地同时定量大鼠血浆中VND3207,丁香酸和丁香醇液质联用分析方法。VND3207被大鼠快速吸收,其中大量VND3207被氧化为丁香酸,少量被还原为丁香醇。     

LKB1基因功能及与肿瘤关系研究进展

LKB1基因是一抑癌基因，其编码产物为一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。LKB1的功能主要是使细胞周期阻滞在G1期、促进细胞凋亡和调节胚胎血管形成等。LKB1基因的胚系突变是Peutz-Jeghers综合征的主要致病因素。在散发肿瘤中也发现有LKB1基因突变，其中以肺腺癌和子宫颈粘液微偏癌突变率较高，分别达30％和55％左右。     

吩噻嗪衍生物协同放射对HeLa细胞增殖的抑制效应比较研究

目的 探讨吩噻嗪衍生物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及与放射联合应用抑制肿瘤的协同效应。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测细胞的增殖活性和细胞辐射敏感性。结果 比较了6种吩噻嗪衍生物对HeLa细胞增殖的抑制效应，发现化合物α-氯-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD2）、α-三氟甲基-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD3）和α-氯-N-二乙胺基乙基吩噻嗪（PTZD5）的作用比较明显，在10μmol／L浓度能产生出显著抑制效应，40-50μmol／L浓度作用3和4d，细胞增殖完全被抑制而死亡。PTZD2或PTZD3与放射联合应用，显示出明显抗HeLa细胞增殖的协同效应，10μmol／L PTZD3对2和4Gy照射细胞的增殖抑制的增强比分别为3．5和1．8。实验结果还表明，在照射前18h用药的协同作用更加显著。结论 吩噻嗪衍生物具有程度不同的抑制HeLa细胞增殖的作用，与放射联合应用具有抗肿瘤的协同效应，而且照射前18h用药的效应最佳。