ELISA夹心法检测rhGM-CSF/IL-3融合蛋白

以往我们对在大肠杆菌中表达的rhGM-CSF/IL-3融合蛋白进行了中试纯化,同时研究还表明rhGMCSF/IL-3体外能促进造血祖细胞的生长发育(另文发表)。为进一步研究其在体内的药效,测定药代动力学,我们建立了ELISA夹心法定量检测rhGMCSF/IL-3,现报告如下。 材料与方法 1.1 主要试剂 鼠抗rhGM-CSF单克隆抗体(rhGM-CSF McAb)为自制;鼠抗rhGM-CSF多克隆抗体(rhGM-CSF PcAb)、兔抗rhIL-3多克隆抗体(rhIL-3 PcAb)、酶标记羊抗兔IgG(均购自Amersham);LPS、HRP、BSA(SIGMA);G-CSF、rhIL-3、EPO(Amgen);IL-2(Cetus);rhGM-CSF、IFN-α(均购自Schering-Plough公司)。 1.2 ELISA夹心法测定rhGM-CSF/IL-3融合蛋白 用25mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS pH8.0)按适当比例稀释的rhGM-CSF McAb 100μl包被微孔板,20℃16小时,将含(A液)0.1％Tween-20的PBS洗板至少3次,200μl 1％BSA-PBS溶液20℃封闭6小时,A液洗板,甩干,-20℃保存备用。使用时解冻,每孔加样150μl,4℃16小时;A液洗板5次,加B液(0.1％Tween-20,0.1％BSA in 50mmol/LPBS, pH7.3)适当稀释的rhIL-3 PcAb 100μl,20℃ 3小时;A液洗板5次,加100μl HRP-羊抗兔IgG,37℃1小时;A液     

rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对小鼠造血功能的影响

目的:观察重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3(rhGM-CSF/IL-3)融合蛋白对小鼠造血功能的影响.方法:利用环磷酰胺(CTX)抑制骨髓及辐照致骨髓损伤造模,检测rhGM-CSF/IL-3对CTX所致骨髓抑制小鼠外周血WBC、RBC、血小板、脾重、骨髓有核细胞(BMC)的影响及对脾集落形成单位(CFU-S)的影响和对小鼠生存的保护作用.结果:rhGM-CSF/IL-3对CTX骨髓抑制小鼠外周血WBC、R13C、血小板及BMC均有明显提升作用(P＜0.01),并显著提高生存率(P＜0.05)和CFU-S数(P＜0.01),而对脾重影响差异无显著性(P＞0.05).结论:rhGM-CSF/IL-3有减轻骨髓损伤和促进造血干/祖细胞增殖和分化的作用.     

鼻咽癌高癌家系成员中医体质特征调查

目的:观察鼻咽癌高癌家系成员中医体质特征。方法:建立中医体质证候分类标准,分别调查鼻咽癌高癌家系核心成员、鼻咽癌高癌家系鼻咽癌患者的中医体质类型,并以散发性鼻咽癌患者(外对照组)及高癌家系已婚核心成员配偶(内对照组)进行中医病理体质的对照研究。结果:鼻咽癌高癌家系核心成员中医体质证候类型主要表现为正常质和气虚质,而内对照组成员则多表现为正常质,高癌家系鼻咽癌患者多表现为气虚质、失调热质和复合质,散发性鼻咽癌患者多表现为气虚质和复合质,后三者各组间比较,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。而将高癌家系核心成员中医体质类型与外对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。51例高癌家系核心成员中,共有复合质7例,其中虚热质4例,虚湿质、湿热质、虚热瘀质各1例;而内对照组成员则未见复合质者。高癌家系鼻咽癌患者17例中,共有复合质7例,其中虚热质1例,虚湿质2例,湿热质3例,虚热瘀质1例,与高癌家系核心成员比较,差异无显著性意义(P>0.05)。外对照组成员34例中,有复合质6例,其中虚湿质3例,虚寒质1例,湿热质2例,与高癌家系核心成员及高癌家系鼻咽癌患者比较,差异无显著性意义(P>0.05...     

蛇霜止血粉治疗鼻出血及鼻窦内窥镜术后出血的疗效观察

目的：观察蛇霜止血粉治疗鼻出血及鼻窦内窥镜手术后出血的临床疗效。方法：①将40例鼻出血患者随机分为2组各20例。治疗组用蛇霜止血粉凡士林纱条填塞止血，对照组用凡士林纱条填塞止血，分别观察止血时间；②将40例慢性鼻窦炎患者随机分为2组各20例，治疗组鼻窦内窥镜术后用蛇霜止血粉凡士林纱务填塞止血，对照组用凡士林纱条填塞止血，分别于第2天拔出纱务时观察鼻出血量。结果：鼻出血患者治疗组显效率为65．0％、总有效率为95．0％，对照组分别为20．0％、70．0％，2组比较，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。鼻窦内窥镜手术后鼻腔填塞止血治疗组显效率为55％、总有效率为95％，对照组分别为5．0％、30．0％，2组比较，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：蛇霜止血粉应用于鼻出血患者及鼻窦内窥镜手术后鼻腔止血，均有良好的止血效果。     

2型糖尿病患者的血糖正常一级亲属血管内皮功能及血小板活化研究

目的观察2型糖尿病患者血糖正常的一级亲属（试验组：A组）血管内皮功能受损及血小板活化状况。方法检测A组、健康对照组（B组）和葡萄糖耐量受损组（IGT组：C组）各30例的内皮素（ET）、血管性血友病因子（vWF）、血小板活化因子（PAF）水平，并进行统计分析。结果试验组ET，vWF，PAF3项指标水平均显著高于B组（P〈0．01），同时也高于C组，说明A组血管内皮功能受损、血小板活化先于血糖升高，而且可能与遗传因素关系更大。结论内皮功能损伤存在于有2型糖尿病家族史但血糖正常的一级亲属以及IGT患者中。ET，vWF，PAF3项指标的变化出现在糖代谢异常之前，提示糖尿病一级亲属在未发生糖尿病之前，血管内皮功能损伤已启动．除了生活因素和环境因素对血管内皮功能的影响外，遗传因素可能在2型糖尿病血糖正常的一级亲属中启动内皮功能受损、血小板活化过程中起着重要作用，值得进一步研究。在ET，vWF水平升高的同时，PAF水平也伴随升高．即不仅明显高于健康对照组，同时也高于IGT对照组，提示血小板活化共同参与了血管内皮功能受损的病理生理过程，并且在糖尿病及其并发症的发生、发展进程中起着重要的作用。     

糖尿病患者D-二聚体水平分析

目的探讨糖尿病患者血浆中D-二聚体的水平及其在不同的年龄组段的阳性率.方法采用乳胶凝集法测定177例糖尿病患者的D-二聚体水平.结果除39岁以下组的阳性率为75%外,其他组均随着年龄增长D-二聚体的阳性率也随着升高,40～49岁组为12.5%、50～59岁组为33.3%、60～69岁组为29.0%、70～79岁组为61.7%、80岁以上组为78.9%.结论定期监测糖尿病患者血浆中D-二聚体水平对观察糖尿病及判断并发症的发生具有重要参考价值.     

老年患者铜绿假单胞菌感染及其药敏分析

铜绿假单胞菌在自然界广泛分布,属于条件致病菌,是医院感染的主要病原菌之一[1]。铜绿假单胞菌在临床上引起的感染日趋增多,老年人群因机体、机能的下降,免疫力低,呼吸系统慢性病较为多见,因而较易引发感染。本文对我院老年患者临床标本分离出的199株铜绿假单胞菌的分布、耐药谱及多重耐药性进行初步分析。1材料与方法1.1菌株199株铜绿假单胞菌收自我院2002年1月~2003年8月住院病人的各类送检标本,患者年龄均在55岁以上,标本包括痰、咽拭子、血、胆汁、褥疮、伤口分泌物、脓液等,菌种的分离培养严格按《全国临床检验操作规程》进行。仪器采…     

海蛇乙醇浸出物灌胃对大鼠胶原性关节炎的防治作用(论著)

目的：探讨海蛇乙醇浸出物（ＡＥＢＦＳＳ）灌胃对大鼠胶原性关节炎（ＣＩＡ）的预防和治疗作用。方法：用自制的可溶性猪尾Ⅱ型胶原注入实验大鼠左后足造成胶原诱导性大鼠关节炎模型，观察用（预防性或治疗性）与不用ＡＥＢＦＳＳ对ＣＩＡ的影响。结果：在致炎前ＡＥＢＦＳＳ灌胃，当剂量达浸出蛋白４．０ｍｇ／ｋｇ，可明显推迟ＣＩＡ发病时间，降低ＣＩＡ患病率和减轻关节炎症状；在致炎后ＡＥＢＦＳＳ灌胃，可明显减轻关节炎症的程度，其作用在用药７天后开始表现明显。关节组织病理检查显示，ＡＥＢＦＳＳ显著减轻了患鼠关节的炎症程度。初步分析表明，ＡＥＢＦＳＳ灌胃既降低了ＣＩＡ患鼠血清抗ＣⅡ抗体水平，又对患鼠耳迟发型超敏反应（ＤＴＨ）产生了明显的抑制作用。结论：ＡＥＢＦＳＳ灌胃对大鼠胶原性关节炎有显著的防治作用；而其机理同时涉及Ｔ和Ｂ淋巴细胞免疫。     

铜绿假单胞菌院内肺感染及耐药性分析

目的了解院内铜绿假单胞菌性肺感染的临床特点及抗生素耐药情况。方法:采用法国生物梅里埃ATB半自动细菌分析仪GN鉴定试条,PSE药敏试条测试。结果:共分离培养出144株铜绿假单胞菌,并对其进行药敏试验,分析表明:替卡西林耐药率达33.8％;环丙沙星耐药率33.33％;哌拉西林耐药率21.21％o;氨基糖苷类抗生索耐药率16％;亚胺培南耐药率16％。结论:使用某些侵入性治疗措施的年老体衰患者易引发铜绿假单胞菌肺感染,该菌对其常用抗生索耐药率在上升,且可出现多重耐药。