砷暴露与肝损伤关系的Meta分析

目的探讨地方性砷中毒尤其是饮水型砷暴露与肝损伤是否有相关性。方法检索纳入了国内外有关地方性砷中毒中砷暴露与肝损伤的文献6篇,采用Meta分析的方法,应用固定效应模型和随机效应模型进行综合的定量分析,计算合并OR值及95%可信区间,利用漏斗图法定性评价发表偏倚。结果异质性检验x~2=8.01,P=O.16,采用固定效应模型进行Meta分析,合并OR=3.72,95%CI为3.08~4.49,表明Meta分析砷暴露组的肝损害发病可能性高于对照组。结论地方性砷中毒病区的砷暴露可能会引起暴露人群的肝脏疾病损伤高发,长期砷暴露会对当地居民的肝功能或器质性损伤存在一定程度的不良影响。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A反式激活基因NS4ATP1的克隆化研究

目的：筛选并克隆丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白4A（NS4A）反式激活新型靶基因。方法：以HCVNS4A蛋白表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为平行对照，提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。分析筛选得到的克隆，其中之一与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性，通过序列同源性比对和电子拼接，根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列，确定新型基因序列。从转染peDNA3．1（-）-NS4A的HepG2细胞提取总RNA，以逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）技术扩增获得该新基因的全长序列，并对克隆的基因及其编码产物的序列进行分析。结果：该新基因的编码序列全长为963个核苷酸（nt），编码产物由321个氨基酸残基（aa）组成，并测序证实，命名为NS4ATP1，在GenBank中注册，注册号为AY740521。结论：分子生物学技术与生物信息学技术相结合，发现并鉴定、克隆了HCV非结构蛋白反式激活作用的新型靶基因NS4ATP1，为进一步研究HCV非结构蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

双环醇下调细胞周期素B2基因启动子转录活性研究

目的探讨双环醇对细胞周期素(cyclin)B2启动子转录活性的调节作用.方法根据文献报道的结果确定细胞周期素B2的启动子DNA序列区域,以聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素启动子(B2p),克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-cyclinB2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性:并与双环醇共刺激的HepG2细胞,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果成功获得细胞周期素B2启动子的止确克隆.pCAT3-cyclinB2p和双环醇(106Mol/L)瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的2.4倍,pCAT3-cyclinB2p的0.35倍.结论细胞周期素B2启动子有顺式激活下游基因的活性,双环醇具有对细胞周期素B2基因有下调作用.     

亚砷酸钠致人肝星状细胞纤维化及自噬中DNA甲基化位点筛查及差异甲基化谱构建

目的分析亚砷酸钠(NaAsO2)致人肝星状细胞(LX-2细胞)纤维化及自噬相关的DNA甲基化位点, 筛选与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。方法采用DNA甲基化芯片Illumina Infinium Methylation EPIC BeadChips(850K甲基化芯片)对LX-2细胞(对照组)及NaAsO2干预(低、中、高剂量组:终浓度分别为5、10、15 μmol/L NaAsO2, 干预48 h)致LX-2细胞纤维化及自噬模型进行全基因组DNA检测, 寻找差异甲基化位点。对筛选出的差异甲基化基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析, 了解基因功能。结果高剂量组细胞纤维化及自噬模型构建成功。850K甲基化芯片检测结果显示, 高剂量组与对照组间存在25 817个显著差异甲基化位点, 其中高甲基化位点12 083个、低甲基化位点13 734个。GO功能富集分析显示, 差异甲基化基因参与的分子功能主要包括蛋白结合、离子结合、催化活性、酶结合。KEGG信号通路富集分析显示, 差异甲基化基因参与的通路主要包括代谢通路、癌症通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt...     

地方性砷中毒与易感标志物金属硫蛋白和谷胱甘肽S-转移酶关系的研究进展

地方性砷中毒（endemic arsenism）简称地砷病，是一种生物地球化学性疾病。是居住在特定地理环境条件下的居民．长期通过饮水、空气或食物摄入过量的无机砷而引起的．以皮肤色素脱失或／和过度沉着、掌跖角化及癌变为主要特征的全身性慢性中毒。无机砷是国际癌症研究中心（IARC）确认的人类致癌物，可致皮肤癌，肺癌。并伴有其他内脏癌高发。在重病区，恶性肿瘤死亡人数占总死亡人数的1／3～1／2，居首位．[第一段]     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和Xα半乳糖(Xαgal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌,接种在氨苄西林LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCVNS4B基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xαgal的4缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落5个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞代谢、生物氧化、生长调节等多种生物学过程。结论成功克隆出HCVNS4B蛋白与肝细胞相互作用蛋白,为进一步研究NS4B蛋白的功能,阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。     

尿中砷的高效液相-氢化物发生原子荧光光谱测定法

目的建立尿中砷形态的高效液相-氢化物发生原子荧光光谱测定方法。方法色谱洗脱液为15mmol/L的(NH4)2HPO4溶液(pH=6.0),流速为1.0ml/min。光电倍增管负高压为285V,空心阴极灯总电流为80mA,空心阴极灯辅电流为36mA,载气流速为400ml/min,屏蔽气流速为600ml/min,载流为7%盐酸,还原剂为1.5%的KBH4溶液和0.35%的KOH混合液。结果 iAs3+、iAs5+、DMA的线性范围为20～100μg/L,检出限分别为12.03、6.67、8.66μg/L,相关系数均≥0.98。该方法所得的平均回收率为96.5%～103.4%,RSD为0.39%～1.26%。结论该方法具有良好的线性关系,灵敏度高,回收率高,结果准确,适用于染砷大鼠尿样中砷形态代谢产物的分析。     

大萼香茶菜化学成分研究

从江西省宜丰县产的大萼香茶菜的干燥嫩枝和叶中分得６种成分，３个为二萜成分即：ｅｘｃｉ－ｓａｎｉｎＡ（Ｉ），ｅｘｃｉｓａｎｉｎＢ（Ⅱ）和ｒａｂｄｏｌｏｘｉｎＢ（Ⅲ），另外３个分别为乌苏酸、棕榈酸和β－谷甾醇。