苦红菇化学成分的研究

从野生真菌苦红菇(Russula rosacea(Bull)Grrayem,Fr.)子实体酸性部分得到两个新的四环三萜酸化合物,经光谱(IR,¹HNMR,¹³CNMR,MS)、尤其是二维核磁共振(¹³C-¹HCOSY,COLOC,NOEDIFF)谱解析,确定其结构分别如Ⅰ和Ⅱ所示,Ⅰ命名为苦红菇酸A(rosaceaacidA),Ⅱ为苦红菇酸B(rosaceaacidB)。     

亚砷酸钠染毒对体外培养人淋巴细胞CAT及其基因表达的影响

目的:探讨砷对人淋巴细胞过氧化氢酶(CAT)及其基因表达的影响.方法:不同浓度的NaAsO2(2、5、10、15、30、60 μmol/L)作用于淋巴细胞24、48、72 h,紫外分光法检测CAT活力.NaAsO2作用淋巴细胞72 h后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CAT基因表达水平.结果:与对照组相比,2～10 μmol/L染毒组淋巴细胞CAT活力提高,10 μmol/L以上染毒组CAT活力降低;与2、5 μmol/L染毒组比较,15～60 μmol/L染毒组淋巴细胞CAT活力降低,各染毒组在24 hCAT含量差异均有统计学意义(P<0.05),且存在时间-剂量交互效应(F=2.149,P＜0.01);RT-PCR电泳结果可见,2～10 μmol/L染毒组淋巴细胞CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较轻微上升,15～60 μmol/L染毒组淋巴细胞CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较明显下降,且呈剂量-反应关系.结论:15 μmol/L以上NaAsO2可降低淋巴细胞内CAT活力及其基因的表达水平,CAT的诱导下降与地方性砷中毒易感性有关,可以考虑作为地方性砷中毒易感标志物.     

抑制性消减杂交技术克隆和筛选丙型肝炎病毒F蛋白的反式调节基因

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA，克隆HCV-F蛋白反式激活相关基因。方法 以HCV-F表达质粒pcDNA3．1（-）-F转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照；制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆聚合酶链反应后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HcVF蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200～1000bP插入片段的克隆，随机挑选其中28个插入片段测序，并通过生物信息学分析获得其全长基因序列，结果共获得19种编码基因，其中2个为未知功能的新基因。结论 筛选到的cDNA全长序列，包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。     

应用抑制性消减杂交技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白2(NS2)反式调节基因cDNA消减文库,研究HCV NS2蛋白的反式调节基因.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选转染pcDNA3.1(-)-NS2和空载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞差异性表达基因,并进行生物信息学分析.结果:获得12个差异表达的已知蛋白基因和3个未知功能基因序列,包括:磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3, GPC3)、酸性核糖体磷蛋白PO、核糖体蛋白L13a、整合素β1、天冬酰胺合成酶、信号肽酶、α-2-HS-糖蛋白、小核糖体蛋白多肽G、蛋白酶样亚单位、黄体酮受体、SDR家族脱氢酶8、Ras家族RAB4A、具有BTB/POZ结构的新蛋白、具有coiled-coil-helix结构的新蛋白、未知功能基因.结论:成功构建HCV NS2反式调节的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制提供了线索.     

筛选肝细胞p53启动子结合蛋白的噬菌体表面展示技术

目的 筛选p53启动子结合蛋白,探讨p53对肝细胞调节的分子生物学机制.方法 应用噬菌体表面展示技术,以p53作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析.结果 噬菌体经5轮富集后,成功构建了噬菌体p5...     

紫草籽中总黄酮的超声提取法

为探讨新疆紫草籽中总黄酮的超声波提取法,采用正交试验法,以总黄酮含量为考察指标,对影响总黄酮超声提取的因素进行研究.结果显示,新疆紫草籽总黄酮的优化提取工艺为70%乙醇、料液比1 g:20 ml、提取时间60 min.其中乙醇浓度对提取效果影响显著.该工艺设计合理,操作简单可行,适用于紫草籽中总黄酮的提取.     

砷致小鼠脂质过氧化及锌、硒对其的干预研究

目的：探讨砷对小鼠血清及肝脏脂质过氧化的影响及锌、硒对其的干预作用。方法：采用亚慢性毒性实验方法,实验结束后分别测定小鼠血清、肝脏组织中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）和谷胱甘肽S-转移酶（GST）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力,同时观察锌、硒干预后对染砷小鼠体内抗氧化水平的影响。结果：随着砷染毒剂量的增加,小鼠血清及肝脏组织中MDA和GST含量显著增加,SOD、GSH-Px活性显著降低,且呈剂量-效应关系。锌、硒能抑制MDA和GST生成量,提高SOD、GSH-Px活性。结论：砷可致机体脂质过氧化,锌、硒可拮抗其脂质过氧化作用。     

AsTP1的生物信息学分析及其细胞中的定位

目的 分析三氧化二砷反式激活基因1 (AsTP1)的结构及细胞定位.方法 采用生物信息学软件对AsTP1结构进行真核生物细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein ,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-C1-AsTP1重组质粒,将重组质粒pEGFP-C1-AsTP1转染Jurkat T 细胞和HepG2细胞,在荧光显微镜下观察AsTP1蛋白的亚细胞定位.结果 生物信息学预测AsTP1蛋白为胞内定位,大多数定位在细胞核,部分在细胞质内.有2个可能的酪蛋白激酶II磷酸化位点分别在26 aa和38 aa;1个蛋白激酶C磷酸化位点在40 aa.荧光显微镜下观察发现,AsTP1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有表达.结论 初步明确了AsTP1的蛋白亚细胞定位,为进一步研究AsTP1基因的功能建立基础.     

地方性砷中毒的研究进展

随着各种天然资源的不断开发利用和科学技术的迅速发展 ,自然界中各种含砷量高的物质引起的地方性砷中毒已愈来愈多地出现在各地区 ,引起了我国和世界各国的普遍重视和关注。 2 0世纪末的研究进展表明 :( 1 )中国和其他一些发展中国家的地方性砷中毒发展形势不容低估 ,必须警钟