17β-雌二醇对涎腺黏液表皮样癌高转移细胞Mc3黏附、侵袭和移动力的影响

目的研究17β-雌二醇对涎腺黏液表皮样癌高转移细胞Mc3黏附、侵袭和移动力的作用。方法采用细胞体外黏附实验、体外移动实验、化学趋化性实验以及明胶底物SDS—PAGE凝胶电泳对基质金属蛋白酶（MMP）活性测定的方法研究17β-雌二醇对Mc3细胞黏附、侵袭和移动力可能存在的作用，用免疫组化的办法检测Mc3细胞的雌激素受体的表达。结果不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L）的17β-雌二醇处殚Mc3细胞72h后，其黏附率分别为38．3％、50．4％、69．2％、91．1％；而对照组为25．0％；作用48h后，10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L的17β-雌二醇对Mc3细胞在纤维连接蛋白（FN）上的移动促进率分别为16．9％、40．9％、36．4％、38．8％。在10^-6mol／L的17β-雌二醇的作用下，其对FN的化学趋化性增加60．3％。10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L的17β-雌二醇均可不同程度的促进Mc3细胞基质金属蛋白酶（MMP-2）的活性，在10^-6mol／L时尤为显著。在Mc3细胞中有雌激素核受体的表达。结论生理浓度的雌激素可促进Mc3细胞的黏附、侵袭和移动力。     

人牙髓成纤维细胞等的体外培养、生长特性和鉴定

本实验从人恒牙分离牙髓组织,牙周组织和取鼠胚胎骨作体外培养。收集标本40个,培养出牙髓成纤维细胞7株,牙周膜成纤维细胞16个标本生长原代细胞8株,5个胚胎骨组织均生长7d以上。牙髓和牙周膜成纤维细胞形态典型,抗波形丝蛋白阳性。证明是中胚层来源的成纤维细胞,细胞生长曲线分裂指数显示细胞增殖正常,牙周膜细胞增长速度快于牙髓细胞。说明体外培养人牙髓和牙周膜细胞是可行的。     

补骨脂素对粘液表皮样癌的抑制作用

补骨脂素(Psoralenum)是从补骨脂中提出的一种有效成分,原用于治疗白癜风、斑秃、牛皮癣等皮肤病。近年来有学者报道补骨脂素对小鼠肉瘸、艾氏腹水癌、Hela细胞等有抑制作用,治疗瘤样皮肤病也取得很好效果。我们以前的研究表明补骨脂素对体外培养的人粘液表皮样癌MEC-1系细胞有生长抑制作用,其半抑制浓度为8595ng/ml,相对抗肿瘤活性值为15,本文报道补骨脂素对MEC-1细胞DNA含量、超微结构的影响,以及对MEC-1细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。     

P-gp170、cytokeratin及nm23在人涎腺粘液表皮样癌MEC-1/5Fu耐药细胞中的表达

目的 :探讨人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞株MEC 1/ 5Fu细胞的耐药机制。方法 :应用免疫组织化学SP方法观察该细胞及其亲本细胞中P 糖蛋白 (P gp170 )、cytokeratin(CK)及nm 2 3的表达。 结果 :P gp170在MCE 1/ 5Fu细胞中的阳性表达率为 95 .1% ,明显高于亲本细胞的阳性表达率 12 .3 % (P <0 .0 5 ) ,而CK与nm2 3在MEC 1/ 5Fu细胞与亲本细胞中的表达率分别达 90 %以上 ,无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :MEC 1/5Fu细胞具有多药耐药 (MDR)表型 ,其耐药性的产生主要是由P gp170高表达所介导     

转化生长因子-β1shRNA真核表达载体的构建

目的 构建转化生长因子β1（TGF-β1）的短发夹状RNA（shRNA）表达系统，为人涎腺粘液表皮样癌的治疗提供新的方法。方法 根据Genebank提供的TGF-β1 mRNA序列，设计短链寡核苷酸，化学合成后经退火形成双链DNA片段，克隆到pWH1载体中，用酶切方法对重组体进行鉴定；最后将构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体转染涎腺粘液表皮样癌细胞，通过RT-PCR、免疫组化观察其对细胞TGF-β1 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果 经酶切、连接后构建的质粒称之为pWH1-TGF-β1。酶切证实成功构建了TGF-β1 shRNA表达载体，RT-PCR和免疫组化结果显示其能够在mRNA和蛋白水平抑制细胞内TGF-β1的表达。结论 成功构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体具有阻断TGF-β1表达的功能，可能为涎腺粘液表皮样癌治疗提供有效的方法和手段。     

3株产黑色素类杆菌内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞细胞毒作用

研究发现:3株感染根管内产黑色素类杆菌、牙髓类杆菌、产黑类杆菌、中间类杆菌的内毒素脂多糖,对体外培养的人牙髓、牙周膜成纤维细胞具有细胞毒作用,其最低抑制浓度为100ug/ml,并表现出时间依赖性和浓度依赖性。     

粘液表皮样癌细胞中脆性组氨酸三聚体基因异常表达的研究

目的：检测粘液表皮样癌细胞中FHIT基因的异常表达。方法：应用逆转录巢式聚合酶链反应（RT－PCR）及DNA测序技术检测粘液表皮样癌和粘液表皮样癌细胞中FHIT基因表达情况。结果：粘液表皮样癌细胞系细胞中存在FHIT基因部分缺失，产生异常转录本，大小约247bp.FHIT基因mRNA异常转录本为多个外显子缺失所致，E1－E8全部缺失。结论：FHIT基因在粘液表皮样癌细胞中的异常表达可能在粘液表皮样癌的发生和发展中起作用。     

PTEN基因转染对粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2增殖的抑制作用

目的:观察外源磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2体外生长的影响。方法:应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入M3SP2细胞,通过活细胞观察、细胞生长曲线、分裂指数和克隆形成率了解细胞生长状态。结果:与亲本细胞比较,PTEN基因转染细胞数量减少、排列松散,部分细胞发生变性或崩解;细胞生长缓慢,分裂指数显著减至1612j(P<0101),细胞群体倍增时间明显延长(31174 h),细胞生长抑制率达57105%~71146%(P<01001);细胞克隆形成率为10140%~14193%,克隆形成抑制率高达65%~72% (P<0101)。结论:外源野生型PTEN抑癌基因能显著抑制高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2体外增殖。     

FHIT基因真核表达载体的构建和鉴定

FHIT基因是在1996年被Ohta从人染色体3p14.2分离出来的一个新的侯选抑癌基因，该基因在多种肿瘤中都有异常改变。据国外文献报道在头颈部肿瘤中也存在FHIT基因的异常转录本，目前国内外尚未见有关的研究报道。我们将人正常FHIT基因全长cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3.1，为进一步探讨FHIT基因在头颈部肿瘤中的作用做准备。     

HMBA对粘液表皮样癌P53蛋白表达和细胞增殖周期的影响

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）诱导人粘液表皮样癌（ＭＥＣ－１）细胞分化与细胞Ｐ５３蛋白表达和细胞增殖周期的关系。方法：ＭＴＴ比色法测定ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞体外生长的作用;Ｆｅｕｌｇｅｎ染色测定细胞ＤＮＡ含量;ＡＢＣ免疫酶染色检测Ｐ５３蛋白;ＦＣＭ法测定细胞增殖周期。结果：ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;ＨＭＢＡ诱导的细胞与对照细胞比较,ＤＮＡ含量减少,Ｐ５３蛋白水平降低,Ｇ１期细胞数增加和Ｓ期细胞数减少。结论：ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞的诱导分化作用与其调节Ｐ５３基因蛋白表达和细胞增殖周期有关。