人Era和人Era C端蛋白在大肠杆菌中的高表达

目的 在大肠杆菌中的高表达人Era和人EraC端蛋白。方法 PCR扩增人era基因（h-era)的全长cDNA和h-eraDNA的C端区域基因,h-eracDNA克隆到（His)6融合表达载体pRSET－C中,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达（His)6-h-Era融合蛋白;h-eracDNA的C端区域基因克隆到非融合表达载体pDH中P1启动子下游,转化大肠杆菌ATP106,42℃热诱导表达人EraC端蛋白（h-Era-C),SDS-PAGE电泳、凝胶薄层扫描检测蛋白的表达。结果 表达的（His)6-h-Era融合蛋白产物占全工力总蛋白的80％;人EraC端蛋白占全菌总蛋白的40％。结论 人Era蛋白和EraC端蛋白在大肠杆菌中获得了高表达。     

兔抗人ERA抗血清的制备

目的　在大肠杆菌中表达人 ERA蛋白 (h- ERA)和 h- ERA C端结构域蛋白 ,并制备兔抗 h- ERA抗血清 .方法　以 PCR扩增人 era基因 (h- era)全长 c DNA和 h- ERA C端的结构域基因 ,并分别克隆到 (His) 6 融合表达载体 p RSET- C和非融合表达载体p DH中 ,诱导表达 (His) 6 - h- ERA融合蛋白和 h- ERA C端结构域蛋白 .用 h- ERA C端结构域蛋白免疫兔 ,制备兔抗 h- ERA抗血清 ,并以 Western- blot对兔抗 h- ERA抗血清进行鉴定 .结果　大肠杆菌中表达的 h- ERA C端结构域蛋白和 (His) 6 - h- ERA融合蛋白 ,分别占菌体总蛋…     

人era基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其激活作用的检测

ｅｒａ基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因，与细胞周期和细胞分裂有关。ｅｒａ基因首先在大肠杆菌被发现，由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的ＲＡＳ蛋白有部分相似之处，故命名为Ｅ．ｃｏｌｉＲＡＳ－ｌｉｋｅｅｒａ基因１。ｅｒａ基因不仅广泛存在于原核生物中，而且在真核生物如蠕虫、小鼠和人的组织中都发现有与细菌ｅｒａ高度同源的基因存在２－４。人ｅｒａ基因的全长ｃＤＮＡ于１９９８年被克隆，与原核ｅｒａ基因具有很高的同源性。人ＥＲＡ蛋白与大肠杆菌ＥＲＡ蛋白的氨基酸序列有３０％相同，两者的相似性为５…     

克隆人膀胱癌UROC28基因及其原核表达

目的：克隆人膀胱癌UROC28基因并在原核细胞中表达．方法：用RT—PCR从人膀胱癌患组织中扩增UROC28基因cDNA,并克隆到载体pUC-19中．经测序证实后,用HindⅢ／EcoRⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX—4T—1,并转化E．coli DH5α菌株．取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS—PAGE鉴定．结果：①经RT—PCR、测序和酶切鉴定,成功地克隆了人膀胱癌UROC28基因;②经IPTG诱导的重组质粒pGEX4T—UROC28表达出Mr约为42000的融合蛋白,与预期的结果相符．结论：成功克隆到人膀胱癌UROC28基因,并在E．coli DH5α中表达出GST—UROC28融合蛋白。     

卵巢癌差异表达基因2氨基端PID结构域相互作用蛋白的筛选

目的〖HT5"SS〗： 筛选人卵巢癌差异表达基因2(differentially expressed in ovarian cancer 2, DOC2)氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID (nDOC2)的相互作用蛋白质,为研究DOC2作用的信号通路提供线索。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 将含有人DOC2氨基端PID结构域cDNA的片段插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母菌AH109并在其内表达,然后转化人胎脑cDNA文库,在营养缺陷培养基和Xα半乳糖苷酶（X     

做好病理生理学教材更换过程中的教学准备工作

病理生理学是医科学生从基础医学向临床医学学习过程中一门重要的桥梁课。随着医学和生物学的迅猛发展,教材更换已经变得越来越频繁。为了做好2006年秋季学期病理生理学教材更换过程中的教学准备工作,从新旧教材结构内容差别、新旧教学大纲不同、了解学员起点行为和加快信息技术与学科教学的整合四个方面仔细分析了教学过程中可能遇到的问题,提出了改善教与学的建设性方案。这些对于今后教材更换和教学准备都具有重要意义。     

UROC28基因的原核表达及抗UROC28多抗制备和初步应用

目的: 在原核细胞大肠杆菌中融合表达UROC28基因产物,分离、纯化后制备其特异性多克隆抗体,并初步应用于肿瘤标本的检测,为进一步研究该分子的功能和组织分布等提供条件. 方法: 利用DNA重组技术将UROC28基因克隆入融合表达载体pRSET-c质粒,并在大肠杆菌BL-21中融合表达目的蛋白,回收后制备兔抗血清,Western blot鉴定抗体后,应用该抗体对前列腺癌石蜡切片进行免疫组化染色. 结果: His-UROC28融合蛋白的Mr约为22 000,与预期相符;融合蛋白占菌体总蛋白的20%. 目的蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,Western blot结果显示制备的抗UROC28多克隆抗体具有较高的特异性,无明显交叉反应,并成功在前列腺癌组织标本中检测UROC28的表达. 结论: 本研究成功构建了UROC28融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达. 制备了该分子的多克隆抗体,经初步验证其效价高、特异性好,为深入研究UROC28的功能及其与疾病的关系创造了条件.     

TRIM38非CpG岛DNA甲基化与胶质瘤异柠檬酸脱氢酶突变的关系研究

目的 探讨TRIM38基因非CpG岛DNA甲基化与胶质瘤异柠檬酸脱氢酶（IDH）基因突变之间的关系。方法 利用中国胶质瘤基因组图谱计划（CGGA）数据库的多组学数据和临床资料，比较在IDH野生型或突变型的胶质瘤中，TRIM38非CpG岛DNA甲基化的改变模式以及与基因表达和临床预后的关系。结果 共纳入CGGA胶质瘤325例及非肿瘤对照脑组织（NTB组）11例，分析发现IDH野生型胶质瘤TRIM38非CpG岛DNA甲基化和基因表达，相对NTB组分别发生低甲基化（P =0.000）和高表达（P=0.007），且两者之间呈负相关（P=0.017）。生存分析显示，TRIM38非CpG岛DNA甲基化水平与IDH野生型肿瘤的预后有关（P=0.061）。结论 IDH突变可能通过限制TRIM38基因非CpG岛DNA低甲基化介导的肿瘤促癌基因表达上调，为IDH突变相关的胶质瘤提供“保护作用”。