SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA拷贝数方法的建立

目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法，测定猴免疫缺陷病毒（SIV）前病毒DNA。方法巢式RT-PCR扩增SIVmac251病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477bp的片段，将该片段克隆到pGEMT载体上，构建pGEM-SIV gag477质粒。该质粒经大量扩增纯化后定量，10倍系列稀释后，做出标准曲线，作为SIV前病毒DNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Roche公司FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ Kit，该标准品可精确定量到10copies／μL。结论制备的pGEM-SIV gag477质粒外标准品纯度高，SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR法特异性、敏感性高，稳定性好，可用于定量测定猴免疫缺陷病毒（SIV）前病毒DNA载量。     

基因工程产品心钠素的Tris—Tricine—SDS—PAGE电泳检测

传统的Tris-甘氨酸-SDS-PAGE电泳分析分辨大分子物质的相对分子质量范围在１００００～２０００００，因此，在对一些相对分子质量更小的多肽进行电泳染色分析时，即使采用银染法，也无染色条带显示。在获得纯化的心钠素（ANP）（相对分子质量为３０８０）后，对于鉴定分析心钠素的存在及其纯度，在实验中无论是用Tris-SDS-PAGE胶，还是Tris-Tricine-SDS-PAGE胶电泳检测纯化后的小分子多肽，采用常规的考马斯亮蓝R２５０染色法时，结果均不理想。通过实践，笔者建立了一套有效的鉴定小肽的电泳方法。本实验方法采用Tricine-SD…     

自然杀伤细胞和HIV感染及病毒逃逸

本文简要介绍了NK细胞表面的两种受体及其信号传导机制，论述了在HIV感染过程中病毒逃避NK细胞天然免疫监视作用的机制。     

制霉菌素产生菌Act.noursei0187号菌株的自然变异和紫外线照射诱变作用

Act.noursei 1535号菌株产生的制霉菌素混合物含有A_1和A_2两个成分。实验表明,含A_2成分较高的制霉菌素混合物较为稳定。0187号菌株产生制霉菌素的活力虽比1535号菌株差,但产生的制霉菌素混合物中A_2的比例较大。鉴此特点,以0187号菌株进行选育具有实践和理论上的意义。作者采用了淀粉胺等三种培养基,用自然分离和紫外线诱变二种方法获得制霉菌素产生菌的变株,用逆流分布法分离和测定变株产生的A_1和A_2两成分的比值。分离了3000个以上的菌落。从形态上     

CLONING AND EXPRESSION OF THE GENE CODING FOR IL-2 （60）-PE40, A MOLECULAR TARGETED PROTEIN

It has recently been shown that chimeric toxin composed of IL2 fused tp PE40,a mutant form of Pseu-domonas Exotoxin A devoid of its native cell recognition and binding domain was cytotoxic to IL-2 receptor bearing cells.We here amplified the gene IL-2 (60),which codes for the N-terminal 1-60 amino acids of human IL-2 by PCR.After that,we fused it to PE40 and the new chimteric protein IL-2 (60)-PE40 was expressed in E.coli.SDS-PAGE revealed that IL-2(60)-PE40 chimeric protein accounts for more than 18% of total cell proteins.As the region IL-2 binds with its receptor was defined in the N-terminal residuse 8-54 of IL-2,such fusion proteins will have the same activity with IL-2-PE40.Following primany purification,IL-2(60)-PE40 was shown to be very toxic to IL-2 receptor-positive cells but non measurable effect on the cells lacking IL-2 receptors.Such a structure has not been reported by now.The fusion pro-tein is useful for suppressing the immune response in cases of rejection of allografts and organ transplants and as therapeutic agents for the treatment of IL-2 receptor related diseases such as autoimmune disease,and as therapeutic agents for the treatment of IL-2 receptor related diseases such as autoimmune disease,ATL(adult T-cell leukemia),et al.     

α人心钠素基因在大肠杆菌两种表达载体系统中的高效表达

应用ＤＮＡ重组技术，将α人心钠素基因克隆到表达性质粒ＰＬＳＤ１３和ＰＬＭＧ２中，与Ｐ１噬菌体的ｒｅｆ基因片段融合，并处于ＰＬ启动子的控制之下，通过温敏的ＣＩ８５７阻遏子基因加以调控。转化大肠杆菌后，用４２℃升温诱导，使α－ｈＡＮＰ基因以融合蛋白的形成获得高效表达，产生的融合蛋白分别约占细胞可溶性蛋白总量的３５％和４８％。经一系列纯化步骤得到的α－ｈＡＮＰ２８肽样品具有明显的舒张血管和降低血压的作用