应激研究进展

1　应激的概念及其研究意义1936年 ,匈牙利科学家ＨａｎｓＳｅｌｙｅ在Ｎａｔｕｒｅ杂志发表了题为“多种有害因素产生的综合征”的文章 ;同年 ,又在ＢｒＪＥｘｐＰａｔｈｏｌ杂志发表了“机体胸腺和肾上腺对外伤和中毒的反应”一文 ,这是人类首次公开描述有关应激研究的实验结果。随后 ,他又相继发表了多篇论文 ,并于 194 6年将应激归纳描述为“全身适应综合征”(ｇｅｎｅｒａｌａｄａｐｔａｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ) ,正式冠以“ｓｔｒｅｓｓ”名义。此前 ,ＨａｎｓＳｅｌｙｅ曾将“应激”称为“ｓｔｒａｉｎ”。有意思的是 ,“ｓｔｒｅ…     

小鼠大脑皮质N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的检定及其在衰老时的变化

以放射性配基结合分析法对正常成年小鼠(3月龄)大脑皮质NMDA受体作了检定,观察了衰老过程中小鼠NMDA受体、长时程电位增强(long-term potentiation,LTP)等的变化以及补肾中药复方对这些变化的影响。结果归纳如下:正常成年小鼠大脑皮质NMDA受体的最大结合容量(B_(max))和平衡解离常数(Kd)分     

hM1R表达载体的构建及其转入CHO细胞系作为药物靶点的研究

Ｇ蛋白偶联受体 (Ｇｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＧＰＣＲ)一直是新药研制和药理研究的最重要靶标 ,而且在今后的新药研究和开发中仍具有不可替代的地位。人毒蕈碱样胆碱能受体Ⅰ型 (ｈｕｍａｎｍａｒｃｒｉ ｎｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ 1,ｈＭ1Ｒ)作为ＧＰＣＲ的一员 ,具有重要的生理功能和病理意义 ,在ＧＰＣＲ中有着较典型的代表性。人类基因组计划的研究成果和相关新技术的应用 ,将会进一步促进新药研究和现代药理学的发展 ,建立靶向ＧＰＣＲ ,特别是靶向孤儿ＧＰＣＲ(ｏｒｐｈａｎＧＰＣＲ ,ｏＧＰＣＲ)的新药筛选体系…     

白三烯 B4受体2在结肠炎向结肠癌转变过程中mRNA 及蛋白表达变化

目的：通过建立结肠炎相关的结肠癌小鼠动物模型,观察白三烯 B4受体2（leukotriene B4 receptor 2,BLT2）在结肠炎向结肠癌转变过程中 mRNA 和蛋白表达的变化。方法建立 ICR 小鼠结肠炎相关的结肠癌模型,实验分为正常组和模型组,其中模型组以第1次给诱导剂作为 d0,分别于给药后2、3、5、7、9、13和18周不同时间点处死小鼠,取结肠组织,HE 染色观察结肠组织病理学变化,免疫组化法检测小鼠结肠组织 BLT2蛋白的表达,实时定量 PCR 检测小鼠结肠组织 BLT2 mRNA 的表达。结果组织病理学观察发现随着时间的增长,小鼠结肠由轻度炎症逐渐加重,向异型增生转变,最后转变为结肠癌。免疫组化结果显示 BLT2蛋白在正常结肠组织中表达很少,而在炎性病变部位高表达,炎细胞颜色深染;在异型性增生与癌细胞中表达不明显,但在癌组织的间充质及管腔中表达极高。与正常对照组相比,建模后2、13和18周小鼠结肠组织中 BLT2 mRNA 的表达增强（P<0.05）,3、5、7和9周表达明显增强（P<0.01）。结论本实验成功复制了小鼠结肠炎相关的结肠癌模型。BLT2在结肠炎发展的过程中表现出规律性变化。由此推测,BLT2在结肠炎向结肠癌转变过程可能发挥着重要的作用。     

基于报告基因的PPRE转录调节模型的建立及应用

目的:建立基于报告基因的靶向PPRE的转录调节模型,并观察不同浓度的PPAR特异性配体对上述模型的影响.方法:PCR扩增获得乙酰辅酶A氧化酶(ACO)启动子上包含PPRE的片段,构建重组报告质粒pGL3-PPRE,将此质粒单独或与PPARα或γ的真核表达质粒(pSG5-PPARα、pSG5-PPARγ)共转染到HEK293细胞中,通过测定荧光素酶(Luc)活力来分析非诺贝特对PPARα激活的作用以及吡格列酮和15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对PPARγ途径的影响.结果:在pGL3-PPRE和pSG5-PPARα共转染的HEK293细胞中,荧光素酶的表达受非诺贝特的诱导,并呈现一定的剂量依赖关系;在共转染pGL3-PPRE和pSG5-PPARγ的HEK293细胞中,荧光素酶的表达则受吡格列酮、15d-PGJ2的诱导,也呈现一定的剂量依赖关系.结论:在HEK293细胞中建立了基于报告基因的PPRE转录调节模型,用此模型可以进行PPARα或γ配体的筛选.     

G蛋白偶联受体与辐射关系的研究进展

G蛋白偶联受体(GPCR)是一类细胞表面受体大家族,通过G蛋白介导其细胞作用,在介导细胞间信号转导的过程中起着十分重要的作用。研究发现,G蛋白和GPCR与辐射损伤关系密切,这些研究为充分认识辐射损伤机制及提高防治水平提供了新的观点。     

束缚应激对心脏PPARα、PPARβ和M—CPT—ImRNA表达的影响

目的观察束缚应激对雄性Wistar大鼠心肌过氧化体增殖物激活型受体α（PPARα）、PPARβ和肌型肉碱棕榈酰转移酶-I（M—CPT—I）mRNA表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠,采用束缚应激模型,实验组大鼠每天给予束缚应激2次,每次3h。按照有无应激和应激时问长短分为正常对照组（C）、束缚1W（R1）、束缚2w（R2）和束缚4W组（R4）。采用逆转录酶多聚酶链反应（RT．PCR）检测各组心肌PPARα、PPARβ和M-CPT-I的mRNA表达水平。结果束缚应激1、2、4W大鼠心肌PPARαmRNA和M—CPT—ImRNA水平较正常对照组明显升高（P〈0．01或P〈0．05）;心肌PPARβmRNA水平较正常对照组变化不明显（P〉0．05）。结论束缚应激上调心肌PPARα和M—CPT—ImRNA表达,对PPARβ无明显影响,PPARot可能促进束缚应激大鼠脂肪酸氧化增加。     

吡格列酮对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体((peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂吡格列酮防治痛风性关节炎的可行性及机制.方法:于大鼠单侧踝关节腔内注射1 mg (20 mg/ml×50 μl)尿酸钠晶体(monosodium urate,MSU)建立急性痛风性关节炎模型.以RT-PCR法检测PPARγ在关节炎滑膜0、4、8、24和48 h表达的动态变化.通过比较2、4、6、8、10、12、24和48 h关节炎症、肿胀、功能障碍指数和病理变化观察口服不同剂量(4 mg·kg-1·d-1、20 mg·kg-1·d-1)吡格列酮对关节炎的影响.结果:关节滑膜PPARγ表达呈时间依赖方式增加,在关节炎48 h后尤为明显.在诱发模型24 h内,吡格列酮对关节炎未见明显作用;而在48 h大剂量吡格列酮可显著减低关节炎的炎症、肿胀、功能障碍指数和滑膜炎性细胞浸润,但小剂量疗效不明显.结论:大剂量吡格列酮可显著减轻大鼠急性痛风性关节炎.关节炎后期PPARγ表达增加有利于药物起效和痛风的自发缓解.     

重组葡激酶致突变检测试验

背景与目的:观察重组葡激酶有否遗传毒性.材料与方法:分别经 Ames试验、CHL细胞染色体畸变试验和昆明种小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验对其进行了系统检测.结果:在5个给药剂量(40、20、5.7、3.5、0.7 mg/皿 )和±S9 mix的情况下 , 重组葡激酶对组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌株 TA97、TA98、TA100和TA102均无诱发回变作用;CHL细胞经重组葡激酶3个剂量 (5、2.5和1.25mg/ml)作用一定时间,无论在有否活化剂的情况下亦未检测到明显的细胞染色体畸变;昆明种雄性成熟小鼠经3个剂量 (500、250、125mg/kg)的重组葡激酶尾静脉注射给药后,股骨骨髓微核检查结果为阴性.结论:本试验条件下重组葡激酶没有致突变作用.     

阿托伐他汀抑制心肌细胞肥大并增强过氧化体增殖物激活型受体β/δ的表达

目的探讨阿托伐他汀在体外对血管紧张素Ⅱ介导的肥大心肌细胞的作用，分析过氧化物酶体增殖物激活型受体β／δ在其中的可能作用。方法采用体外原代培养新生大鼠的心室肌细胞方法，用血管紧张素Ⅱ诱导建立心肌肥厚模型，在模型中加入不同浓度的阿托伐他汀，通过数码相机摄影扫描，以测量软件NIH Image J测定分析心肌细胞表面积，利用氚标亮氨酸掺入方法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用逆转录聚合酶链反应半定量测定心房钠尿肽、脑钠尿肽和过氧化体增殖物激活型受体β／δ mRNA的表达变化。结果血管紧张素Ⅱ可使体外培养的心肌细胞表面积（P〈0．01）和氚标亮氨酸的掺入增加（P〈0．01），升高心房钠尿肽和脑钠尿肽（均为P〈0．01）的表达．过氧化体增殖物激活型受体β／δ（P〈0．01）表达下降；阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性（P〈0．05）。而作为溶剂的二甲亚砜对心肌肥厚无影响（P〉0．05）。结论阿托伐他汀具有抑制血管紧张素Ⅱ介导的体外心肌细胞肥大的作用，过氧化体增殖物激活型受体β／δ很可能参与该过程。