标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定

目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。     

粉尘螨在空气净化器作用下扫描电镜形态观察

目的用扫描电镜观察粉尘螨经空气净化器等离子静电高压场强作用后其形态学变化,为除螨空气净化器的研制提供依据。方法取粉尘螨成虫放置在空气净化器中,按不同时间段(0、12、24、48、72和84h)分组,每组200只粉尘螨,取出后于解剖显微镜下观察粉尘螨的死亡状况;用扫描电镜观察实验前粉尘螨和死亡粉尘螨的形态学变化,用扫描电镜进行扫描、拍照。结果用扫描电镜能清楚地观察到粉尘螨颚体、躯体、足和外生殖器的超微结构。经空气净化器高压场强作用死亡后的粉尘螨,整个躯体呈现干扁皱缩状,四肢向躯体卷曲,表面刚毛凌乱,外形明显改变,雌、雄外生殖器变形,结构不清晰。结论当空气净化器将空气中的大量水分电离成为离子状态时,造成局部相对干燥的环境而使粉尘螨脱水死亡,故空气净化器具有杀灭粉尘螨的作用。     

粉尘螨过敏原Der f15的表达、纯化和生物信息学分析

目的表达纯化出粉尘螨过敏原Der f15蛋白,并预测其三维结构及B细胞抗原表位。方法利用实验室已有的Der f15质粒转化到大肠杆菌Rosetta,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过亲和层析纯化蛋白,经免疫印迹法(Western-blot)分析Der f15免疫原性,用生物信息学方法分析Der f15的三维结构及B细胞抗原表位。结果高效表达出Der f15蛋白。SDS-PAGE结果显示:表达的产物分子量约107ku。经亲和层析成功纯化蛋白,纯化蛋白以尘螨过敏患者血清为一抗进行Western-blot,结果显示:Der f15重组蛋白能与患者血清IgE发生特异性结合,而阴性对照没有反应条带出现,表明Der f15具有良好的抗原性。对B细胞抗原表位的预测表明,Der f15蛋白的第20~35、121~131、340~359及485~500是潜在B细胞抗原表位。结论粉尘螨Der f15表达、纯化和生物信息学分析研究有助于了解Der f15蛋白的分子生物学特性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和疫苗治疗奠定理论基础。 更多还原     

鸡卵清蛋白食物过敏大鼠中药口服治疗的实验研究

目的建立鸡卵清蛋白(OVA)食物过敏大鼠模型,利用中药复方Formula-3对食物过敏大鼠进行治疗,探讨其治疗效果及其机制。方法将24只BN大鼠按随机数字表法分为PBS对照组、OVA模型组及中药复方Formula-3治疗组,每组8只。OVA模型组与中药复方Formula-3治疗组在前6周和第7、9、11、13周分别予OVA(1mg·mL-1)灌胃致敏,每天1次;于第13周末以OVA(100mg·mL-1)进行激发,建立大鼠OVA食物过敏模型。其中中药复方Formula-3治疗组于第7周开始同时给予1mL中药复方Formula-3(150mg·mL-1)灌胃治疗,每天1次;OVA模型组则以1 mL的0.1 mmol·L-1 PBS灌胃治疗。PBS对照组致敏、激发和治疗均予以浓度为0.1mmol·L-1的PBS 1mL灌胃。激发24h后处死大鼠,测定3组大鼠血清中OVA特异性IgE水平、计算肥大细胞脱颗粒的百分比、观察肠道组织超微结构病理变化等,对治疗效果进行评价。结果OVA模型组血清中OVA特异性IgE抗体显著高于PBS对照组、脱颗粒肥大细胞数量显著多于PBS对照组(均P<0.01);中药复方Formula-3治疗组血清中OVA特异性IgE水平显著低于OVA模型组、肥大细胞脱颗粒显著少于OVA模型组(均P<0.01)。OVA模型组肠黏膜微绒毛变形,细胞内细胞器损伤,细胞间连接破坏,炎性细胞浸润增多;中药复方Formula-3治疗组微绒毛均匀整齐,细胞器基本正常,细胞间连接紧密,与OVA模型组相比病变明显轻微。结论中药复方Formula-3能有效地降低食物过敏大鼠血清中OVA特异性IgE,减少肥大细胞脱颗粒并减轻肠道的病理改变,对食物过敏有良好的治疗效果。更多     

Durham重力采样法对不同高度气传致敏花粉的调查研究

目的探讨深圳市区不同高度气传花粉种类、数量、季节性消长规律以及与气候要素的关系。方法采用Durham重量法于2012年7月1日至2013年6月30日对深圳市不同高度(1.5、35.0、70.0m)空气中气传花粉浓度进行监测,采用SAS 9.13软件对数据进行统计学分析。结果全年曝片1095片(3个高度采集点,每个高度365片),总采集花粉10 386粒,其中1.5m采集3029粒;35.0m采集3969粒;70.0m采集3388粒,鉴定出36个科60种花粉。3个高度全年皆有花粉飘散,均出现2次花粉飘散高峰期,即春季(2月20日—4月14日)和秋季(9月12日—12月5日);35.0m高度采集的花粉最多,地面(1.5m)采集花粉最少。全年花粉数在3个不同高度中任何2个高度间比较差异均有统计学意义(均P<0.05);春季花期和秋季花期35.0m高度气传花粉数与其他2个高度比较差异均有统计学意义(均P<0.05);不同高度气传花粉分布规律及浓度均受季节和气象要素等综合因素的影响。结论在3个高度空气中全年皆有花粉飘散,均出现2次花粉高峰期,35.0m高度采集的花粉种类和数量最多。 更多还原     

肺栓塞患者预后评估研究进展

胡泊,063000河北省唐山市,华北理工大学公共卫生学院,河北省煤炭行业职业健康与安全重点实验室;E-mail:lxy_hb007@126.com 肺栓塞临床表现多样且无特异性,轻者可无症状,重者可出现休克甚至死亡,预后差异较大。该文简述了基础情况与伴随疾病、影像学异常表现、实验室检查及生化标志物、多指标联合检测对肺栓塞预后的评估价值,提示寻找肺栓塞预后相关的有效生物标志物是指导肺栓塞患者个体化治疗、提高肺栓塞患者生存率的关键。     

胰岛素治疗后糖尿病患者抑郁情绪变化与皮质醇水平的关系

目的观察胰岛素强化治疗前后糖尿病抑郁患者的情绪变化及与血清皮质醇水平的相关性。方法选择340例2型糖尿病(T2DM)患者,其中187例给予胰岛素强化治疗3个月,153例给予口服降糖药治疗,对入选患者治疗前后进行抑郁测定以及血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清皮质醇检测,并进行统计学处理。治疗期间空腹血糖控制在4.4～6.1 mmol/L,餐后2h血糖控制在4.4～8.0 mmol/L之间。结果胰岛素治疗前合并抑郁情绪及无抑郁情绪的糖尿病患者皮质醇水平分别为:(276.1±23.4)、(141.1±19.9)μg/L(P<0.01);胰岛素治疗后合并抑郁患者抑郁指数较治疗前明显降低,分别为(0.51±0.13)、(0.68±0.21)(P<0.01),皮质醇水平明显降低为(162.4±17.3)μg/L(P<0.01)。治疗前抑郁指数与皮质醇呈显著正相关(r=0.674,P<0.01);胰岛素组治疗后抑郁指数下降与皮质醇下降呈正相关(r=0.525,P<0.05)。而口服降糖药组治疗前后抑郁指数及皮质醇水平无明显变化。结论胰岛素治疗后T2DM患者抑郁情绪的改善与皮质醇水平相关。     

甲状腺腺瘤19例外科手术治疗分析

目的：探讨甲状腺腺瘤外科手术切除治疗措施及其临床效果,总结甲状腺肿瘤的临床诊疗经验。方法：回顾性分析本院1995年1月-2011年10月治疗的19例甲状腺肿瘤患者的临床资料,分析外科手术治疗措施。结果：19例甲状腺腺瘤患者术后全部获得痊愈,手术平均时间58．7～76．4min,平均术中出血量33．847．1ml,住院时间平均（13±7）d,手术后没有出血和复发病例,术后恢复良好。结论：外科手术治疗甲状腺瘤安全可行,疗效非常显著,并且术后并发症和复发者少,值得临床广泛推广。     

经皮肝动脉栓塞化疗联合洛铂热灌注化疗治疗不能手术切除的肝细胞癌的近期疗效观察

  目的  探讨经皮肝动脉栓塞化疗联合洛铂热灌注化疗在治疗肝细胞癌中的近期疗效。  方法  对20例不能手术切除的肝细胞癌患者进行肝动脉热灌注化疗栓塞术, 先采用洛铂联合盐酸表柔比星、丝裂霉素行热灌注化疗, 然后行常规肝动脉栓塞化疗, 间隔40~50天再次治疗, 2次治疗后评价近期治疗效果及不良反应。  结果  20例患者显效4例(20.0%), 有效7例(35.0%), 稳定7例(35.0%), 进展2例(10.0%)。总有效率为55.0%。AFP下降 > 50%者8例, 其中2例恢复正常。  结论  肝动脉热灌注洛铂为主的联合化疗方案+栓塞术治疗肝细胞癌安全有效, 其远期疗效有待进一步观察。      

miR⁃449a通过NOTCH1介导铁死亡调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨miR⁃449a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其分子机制。方法 用miR⁃499a过表达类似物Agomir⁃499a（Agomir⁃499a组）及其阴性对照（NC组）分别转染非小细胞肺癌NCI⁃H1975细胞,采用qRT⁃PCR检测转染细胞中miR⁃499a的表达水平,CCK⁃8和Ki67染色法检测细胞增殖,Annexin V染色法检测细胞凋亡。采用铁死亡抑制剂ferrostatin⁃1（Fer⁃1）和谷胱甘肽（GSH）分别处理转染Agomir⁃499a的NCI⁃H1975细胞（依次记为Agomir⁃499a+Fer⁃1组和Agomir⁃499a+GSH组）,采用荧光探针法检测细胞内的Fe2+ 水平,光学比色法检测细胞内的GSH含量,qRT⁃PCR检测细胞内铁死亡和铁稳态相关基因的mRNA表达,Western blot检测NOTCH1信号通路相关蛋白的表达。结果 与NC组比较,Agomir⁃499a组NCI⁃H1975细胞的miR⁃449a表达水平明显增加（P=0.001）,细胞增殖活力明显降低（P<0.05）,细胞凋亡比例明显增加（P=0.004）;铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、SLC7A11和COX2的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF、STEAP3、TFRC和DMT1的表达水平均明显增加（均P<0.05）,但GSH含量以及NOTCH1信号通路相关分子NOTCH1、NICD、JAG1、JAG2、DLL1和HES1的表达水平均明显降低（均P<0.05）。与Agomir⁃449a组比较,Agomir⁃449a+Fer⁃1组铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、COX2和SLC7A11的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF和STEAP3的表达水平均明显降低（均P<0.05）,但GSH含量和NOTCH1信号通路相关分子NICD、JAG1和DLL1的表达水平均明显增加（均P<0.05）;Agomir⁃449a+GSH组SLC7A11、COX2和ACSL4的表达水平也较Agomir⁃449a组明显降低（均P<0.05）。 结论 miR⁃449a可诱导非小细胞肺癌NCI⁃H1975细胞凋亡和增殖抑制,其作用机制可能与抑制NOTCH1信号介导的铁死亡有关。