表皮干细胞复合羊膜构建组织工程皮肤修复糖尿病难愈创面

目的探讨表皮干细胞复合羊膜构建组织工程皮肤修复糖尿病难愈创面的可行性和方法。方法分离培养SD大鼠皮肤表皮干细胞(ESCs),并用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记。建立糖尿病SD大鼠创面模型,随机分为A、B、C 3组,A组创面移植羊膜负载BrdU标记的ESCs组织工程皮肤;B组创面移植羊膜;C组为空白对照组,创面未给予干预。观察创面愈合情况、计算创面愈合率,HE及免疫组织化学SP法检测创面愈合组织中BrdU及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。用图像分析软件测量阳性细胞积分光密度平均值。结果与B、C组比较,A组创面愈合速度加快,创面愈合率明显增高,组间比较差异有显著性统计学意义(P0.01)。A组创面及新生表皮中可见BrdU阳性细胞,B、C组皮肤创面组织中始终未见BrdU阳性细胞。各组创面组织中可见PCNA阳性细胞表达,但A组的阳性细胞积分光密度值与B、C组比较差异显著(P0.01)。结论表皮干细胞复合羊膜构建组织工程皮肤可有效促进糖尿病创面愈合。     

几种生物材料对人表皮细胞DNA合成的影响

目的　探讨Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成的影响 ,为其在创伤创面的应用提供实验依据。方法　采用正交试验方法 ,以体外培养的人表皮细胞为实验模型 ,用3 HTdR掺入法分别测定各实验组3 HTdR掺入值 ,以反应其DNA合成水平的变化。结果　Ⅰ型胶原、壳聚糖、海藻酸钠处理组3 HTdR掺入值均较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用可显著提高人表皮细胞3 HTdR掺入值 (P <0 .0 5 )。结论　Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成具有促进作用 ,Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用对人表皮细胞DNA合成具有协同作用 ,提示Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠在皮肤创伤创面的治疗中具有应用前景。     

手腕部深度烧伤削切痂植大张自体皮疗效观察

目的通过手腕部深度烧伤不同治疗方法的比较,探讨手腕部深度烧伤的理想治疗方法。方法将60例共83只手腕部深度烧伤患者随机分成A、B2组,A组采用早期削切痂移植大张自体皮,B组采用肉芽创面移植邮票状自体皮,观察2组手部创面修复时间和功能恢复情况。结果A组一次植皮成功率与B组相比,无显著性差异（97．7％vs 100．0％,P〉0．05）;A组愈合时间与B组相比,有极显著性差异[（14．0±1．2）d vs （37．0±1．4）d,P〈0．01];A组优良率与B组相比,有极显著性差异（95．3％vs 30．0％,P〈0．01）。结论早期削切痂移植大张自体皮术治疗手腕部深度烧伤能有效保护手腕部的功能,疗效优于肉芽创面移植邮票状自体皮术。     

糖尿病大鼠皮肤组织β-连环素与增殖细胞核抗原的特征及意义

目的:观察糖尿病SD大鼠皮肤与正常大鼠皮肤组织表皮β-连环素(β-atenin)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、角蛋白19(keratinl9,K19)和β1整合素的表达差异,探讨其在糖尿病皮肤难愈创面修复中的意义.方法:20只SD大鼠随机分为DM组和正常对照组.DM组大鼠采用一次性腹腔注射链脲佐菌素65 ms/kg制备糖尿病大鼠模型,成模第4周取大鼠背部全层皮肤.并取正常皮肤标本作为对照,行HE染色及β-catenin、PCNA、K19和β1整合素免疫组织化学染色,图像分析软件测量表皮厚度及阳性细胞积分光密度平均值.结果:DM组皮肤组织表皮β-catenin、PCNA、K19和β1整合素的表达均显著低于正常对照组皮肤(P＜0.01).DM组与正常对照组大鼠的表皮厚度[(12.45±1.46) μm VS(22.9±2.28)μm,P＜0.01]及皮肤中β-eatenin(169.78±37.29 vs 217.88±23.51,P＜0.01)、PCNA(143.17±19.82 vs175.05±20.84,P＜0.01)、K19(139.54±20.69 vs 168.96±17.97,P＜0.01)和β1整合素(150.58 ±19.98 vs181.79±15.94,P＜0.01)的阳性细胞积分光密度平均值相比差异有统计学意义.结论:糖尿病大鼠皮肤组织表皮β-catenin、PCNA表达均较正常皮肤明显减少,可能是导致糖尿病表皮干细胞数量减少、活性降低且创面难愈的重要机制之一.     

羊膜负载表皮干细胞促进糖尿病大鼠创面的愈合

背景:表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞,具有强大增殖及多向分化潜能,与创面修复紧密相关.近期研究表明糖尿病皮肤创面愈合过程中表皮干细胞数量减少、活性降低是导致其创面难愈的重要原因.目的:观察表皮干细胞在糖尿病大鼠创面愈合中的作用.方法:分离培养及鉴定SD大鼠表皮干细胞,并以BrdU标记.建立糖尿病SD大鼠创面模型,抽签法随机分为3组:表皮干细胞组创面移植羊膜负载BrdU标记的表皮干细胞;羊膜组创面移植羊膜;空白对照组创面未给予干预. 观察创面愈合情况、计算创面愈合率,苏木精-伊红及免疫组织化学SP法检测创面愈合组织中BrdU及增殖细胞核抗原表达.用图像分析软件测量阳性细胞积分吸光度平均值.结果与结论:表皮干细胞组治疗后7d创面缩小明显,治疗后14 d创面基本愈合,创面愈合率明显高于羊膜组、空白对照组 (P < 0.01).表皮干细胞组创面及新生表皮中可见BrdU阳性细胞,而另两组皮肤创面组织中始终未见BrdU阳性细胞.各组创面组织中可见增殖细胞核抗原阳性细胞表达,但表皮干细胞组的阳性细胞积分吸光度平均值与羊膜组、空白对照组比较差异有显著性意义(P < 0.01).结果证实糖尿病大鼠创面愈合过程中表皮干细胞与创缘表皮移行、创面的上皮化有直接关联,可有效促进其创面愈合.     

糖尿病大鼠表皮干细胞的分离培养及特性

背景：表皮干细胞作为皮肤组织特异性干细胞,在创面修复中发挥关键作用。但有关糖尿病皮肤来源的表皮干细胞体外分离培养及生物特性研究较少。 目的：探索糖尿病大鼠表皮干细胞体外分离培养的方法及其生物特性,为糖尿病难愈创面的防治及机制研究提供实验依据。 方法：SD大鼠随机分成糖尿病组和正常对照组。糖尿病组采用一次性腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,正常对照组不作处理。分别取成模糖尿病和正常大鼠背部全层皮肤,采用酶消化联合Ⅳ型胶原黏附法分离培养大鼠表皮干细胞。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化和细胞克隆形成,细胞计数绘制生长曲线,计算克隆形成率,免疫细胞化学染色和图像分析软件鉴定K19、β1-integrin阳性表达和测定阳性细胞的积分吸光度(IA)值。 结果与结论：糖尿病组大鼠表皮干细胞原代贴壁数量较少,其克隆形成率明显低于正常对照组(P < 0.01)。表皮干细胞的K19、β1-integrin均呈阳性表达,糖尿病组阳性细胞的IA值均低于正常对照组(P < 0.01)。结果提示,运用酶消化联合Ⅳ型胶原黏附法可以实现糖尿病大鼠表皮干细胞的体外分离培养;糖尿病大鼠表皮干细胞体外增殖能力较正常皮肤增殖能力弱,这可能是导致糖尿病创面难愈合的重要因素之一。     

应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤及移植实验

目的探讨应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤修复全层缺损皮肤的可行性。方法选择新西兰大白兔18只,在每只兔背上用常规手术方法切去3个大小相同的全层皮肤缺损创面,面积约2cm×2cm。将经处理的脱细胞真皮（acellular dermal matrix,ADM）接种骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）和表皮千细胞（epidermal stem cells,ESCs）制成复合皮肤。实验分A、B、C3组,A组移植复合皮肤;B组移植脱细胞真皮;C组用油纱布敷盖创面。观察各组移植后1～3周内创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色。结果术后A、B、C3组创面愈合时间分别为（14．6±1．1）、（18．3±1．2）、（23．0±1．4）d,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后14d创面标本HE染色观察：A组创面已上皮化,毛细血管、成纤维细胞数量增加,胶原合成增多,肉芽组织形成丰富;B、C组创面上皮化不全,仍可见许多炎性细胞,肉芽组织中毛细血管、成纤维细胞数量不如A组。结论表皮干细胞、间充质干细胞接种于脱细胞真皮构建复合皮肤,可加速新生血管形成及创面上皮化,可用于全层皮肤缺损创面的治疗,提高创面愈合质量。     

粉防己碱抑制瘢痕成纤维细胞诱导胶原基质的收缩

采用成纤维细胞三维培养方法观察了粉防己碱对人瘢痕成纤维细胞诱导胶原基质收缩的影响，结果表明粉防己碱１μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ能有效地抑制体外瘢痕成纤维细胞与胶原基质网的收缩，呈剂量效应关系     

hTERT基因转染人表皮干细胞的可行性研究

目的观察外源性人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因转染体外培养的人表皮干细胞的可行性。方法采用脂质体转染法,将质粒pIRES2-EGFP—hTERT转人体外培养的人表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与培养。应用RT-PCR法和Western blot法检测hTERT mRNA及其蛋白的表达。结果转染组hTERT mRNA及其蛋白的表达强于非转染组。结论外源性hTERT基因转染体外培养的人表皮干细胞具有可行性。     

糖尿病创面与正常创面微小RNA差异表达谱分析

目的 探讨糖尿病大鼠与正常大鼠皮肤创面组织微小RNA(miRNAs)差异表达谱及其意义.方法 雄性SD大鼠,体质量200 ～ 250 g,链脲佐菌素一次性腹腔注射法建立糖尿病大鼠模型;4周后,取糖尿病成模大鼠及正常大鼠各6只,于背部制备全层皮肤切除创面;造模后3d,手术切取上述创面组织;用Trizol抽提总RNA并质检,纯化后进行荧光标记、芯片杂交,然后扫描得到杂交图片;利用软件提取数据并行差异分析;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证芯片结果.结果 筛选出在糖尿病大鼠皮肤创面组织中上调的miRNAs有18个,下调65个.其中显著上调的miRNAs有mo-miR-496-5p、mo-miR-105、rno-miR-122-5p等;显著下调的miRNAs有rno-miR-196a-5p、mo-miR-134-5p、rno-miR-31-3p等.Real-time PCR的验证结果与芯片检测结果具有较好的一致性.功能富集分析显示差异表达明显的miR-31、miR-222、miR-449a等miRNAs分别参与有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、Wnt、Notch等与创面修复相关的京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路.结论 糖尿病大鼠与正常大鼠皮肤创面组织中存在明显的miRNAs差异性表达,可能与糖尿病创面难愈合机制密切相关.