流行性出血热患者真皮血管及肥大细胞变化

对29流行性出血热患者真皮的小血管及肥大细胞脱粒现象进行了光镜和电镜观察。发现①小血管有炎细胞浸润,内皮细胞基莫分层,甚至内皮细胞坏死。②真皮肥大细胞脱粒现象比正常人明显。既表现有细胞溶解性脱粒,又表现有非溶解性脱粒,有些肥大细胞呈环死象征。     

肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体

0引言细胞内抗体（intrabody）技术是近几年来完善的一种新的基因治疗策略[1]。细胞内抗体具有结合、灭活肿瘤细胞癌蛋白、诱导细胞凋亡的作用[2]。未见有关在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体的研究报道。本研究在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体，观察单链抗体在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的影响。1方法抗人肝癌单链抗体基因由本室制备。该基因长700加，由重链可变区基因和轻链可变区基因I－inker（Gly4Ser）。连结组成，重链5’端含有EcoRI酶切位点和A”l’G启始码，删除了轻链可变区分端57个碱基，轻链3’端含有一个Sail酶切位点。将含有…     

抗肝癌单链抗体融合PE38重组免疫毒素的构建、表达及纯化

目的 :构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体 (hscFv)原核表达载体 ,并对其产物作初步纯化 ,检测其对人肝癌细胞系SMMC 772 1的毒性作用 .方法 :采用基因工程原理 ,将PE38基因片段亚克隆入hscFv表达载体 pGEX 4T 1中 ,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确 ;转化大肠杆菌JM10 9后 ,受IPTG诱导表达GST融合蛋白 ,产物包涵体经变性、复性及重折叠并经GST亲合层析柱层析、凝血酶消化后 ,得到纯化的hscFv PE38融合蛋白 .采用MTT法检测hscFv PE38对SMMC772 1的杀伤作用 .结果 :实验成功构建了免疫毒素表达载体pGEX 4T 1 hscFv PE38(以下简称pGEXh PE38) ;诱导产物主要以包涵体形式存在 ,表达量为 11% ;纯化的hscFv PE38对SMMC 772 1细胞系具有较明显的杀伤作用 ,最大杀伤率为78% ,IC50 为 0 .386mg·L-1.结论 :人源化抗肝癌单链抗体与PE38重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果 ,为进一步肝癌的导向治疗提供依据     

抗肝癌单链免疫毒素在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

目的 构建分泌型抗肝癌单链免疫毒素真核表达载体并在人肝癌细胞系SMMC-7721中表达。方法 采用PCR方法在抗肝癌sFv的5′端引入引导序列使其能够在真核细胞中表达并分泌,在其下游连接人TNF-α基因,构建分泌型抗肝癌单链免疫毒素基因,并将该基因克隆人带有GFP报告基因的真核表达载体,用磷酸钙共沉淀法转染人肝癌细胞系SMMC-7721进行瞬时表达。结果 DNA序列分析证实在sFv的5′端引入正确的60bp引导肽序列,酶切鉴定证明成功构建了分泌型抗肝癌单链免疫毒素融合GFP真核表达载体,并在SMMC-7721细胞中成功地表达了融合荧光蛋白。结论 成功构建并表达了分泌型抗肝癌单链免疫毒素融合GFP基因,为肝癌免疫基因治疗的进一步研究奠定了基础。     

内皮素-1在良性前列腺增生、前列腺癌组织中的表达及意义

目的　比较正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌组织中ET 1表达的差异 .方法　正常前列腺 7例 ,良性前列腺增生 30例 ,前列腺癌 15例 .用SP法进行免疫组化染色 .判断阳性染色分布 ,对阳性细胞进行计数 ,应用真彩色图像分析仪对显微镜像进行图像采集、并进行面积定量分析 .结果　①ET 1在正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌中均有表达 ,在良性组织中 (正常和良性前列腺增生 )主要在腺上皮和间质平滑肌细胞核 ,在恶性病变组织主要在细胞质 .②阳性细胞记数 :前列腺腺上皮中核染色阳性的细胞的百分率 :在正常前列腺为 (31.3± 4 .5 ) % ,良性增生前列腺中为 (80 .5± 7.7) % ,较正常显著增多 (P <0 .0 1) ;前列腺癌中为 (16 .1± 7.6 ) % ,比正常显著减少 (P <0 .0 1) ;前列腺间质中核染色阳性的细胞的百分率 :在正常前列腺为 (2 4 .5 9± 7.37) % ,在良性增生前列腺中为 (33.89± 3.90 ) % ,较正常前列腺显著增多 (P <0 .0 1) .③计算机辅助图像分析 :前列腺腺上皮细胞核中阳性染色面积占腺上皮面积的百分率 :在正常前列腺为 (5 .9± 2 .5 ) % ,良性增生前列腺中为 (15 .9± 7.9) % ,较正常显著增多(P <0 .0 1) ;前列腺癌中为 (1.4± 0 .9) % ,比正常显著减少 (P<0 .0 1) .结论　内皮素 1在正常前列     

抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性

目的 用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因（sFv-TNF-α）的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut-78细胞,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv-TNF-α融合蛋白,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用。方法 用感染性重组病毒产生细胞C22（PA317/PST）产生的病毒上清转导入T细胞淋巴瘤Hut-78细胞,采用PCR,RT-PCR,细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法,对转导的Hut-78细胞进行DNA,mRNA及蛋白水平的分析。转导的Hut-78细胞分别与SMMC-7721,HHCC共培养,MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用。结果 PCR,RT-PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带,neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号,其阳性率约为95%,鼠抗人TNF-α多克隆抗体免疫组织化学染色,转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号,MTT法检测结果,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为15.4%和26.5%。结论 分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达,其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性,并且具有一定的体外杀伤作用。     

抗角蛋白自身抗体对豚鼠银屑病样皮炎的影响

目的 观察豚鼠抗角蛋白自身抗体（anti-keratin au-toantibody,AK auto Ab）滴度的消长对豚鼠银屑病样皮炎转归的作用。方法 应用心得安乳剂涂抹豚鼠耳廓造成银屑病样皮炎,采用腹腔注射纯化的豚鼠AK auto Ab（高滴度组）、皮下植入自身皮片消耗AK auto Ab（低滴度组）以及不作处理（正常滴度组）作为对照,根据组织病理变化评价豚鼠血清AK auto Ab滴度消长对皮炎转归的影响。结果 AK atuo Ab高滴度组银屑病样皮炎的恢复速度明显于对照组,而低滴度组皮炎恢复最缓慢。结论 AK auto Ab具有促进豚鼠银屑病样皮炎恢复的作用。     

抗肝癌单链抗体融合TNFα导向作用的初步实验研究

目的 获得有效果的抗肝癌基因工程单链免疫细胞因子（TNFα）。方法 将抗肝癌单克隆抗体（mAb)HAb25的单链抗体（scFv25)与人TNFα基因偶联,构建抗肝癌免疫细胞因子（scFv25-TNFα,亚克隆人原核GST融合表达载体pGEX4T-1中,在大杆菌中进行表达。对肝癌细胞SMMC-7721涂片进行间接免疫荧光染色,测定纯化后目的蛋白的活性,通过对荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠进行的初步抑瘤实验,检测scFv25-TNFα的导向治疗效果。结果scFv25-TNFα具有与亲本抗体HAb25类似的抗原结合特异性。scFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径2mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,达到3/3完全缓解,明显强于TNFα对照组。该组有交待得只有2/3,且无完全缓解。结论 scFv250-TNFα为具有一定效果的抗肝癌双功能抗体。