人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立

背景:有研究表明血管内皮可能是胰岛素抵抗发生的首要环节。目的:采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗模型。方法:以人脐静脉内皮细胞系为研究对象,应用含不同浓度胰岛素(50,40,30,20,10,1,0.1,0.01U/L)的DMEM培养基与人脐静脉内皮细胞共同培养12,24,36,48,72h,并设置正常组,光学显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定各组细胞活性;用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法法鉴定胰岛素抵抗细胞模型。结果与结论:与正常组比较,当胰岛素浓度大于40U/L,其作用时间大于48h时,细胞形态受损严重,细胞活性显著下降(P<0.01);当胰岛素浓度小于20U/L,作用时间小于36h时细胞形态无明显损伤(P>0.05)。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法实验表明,在30U/L的胰岛素刺激48h条件下,培养液中残存葡萄糖浓度显著高于正常组细胞(P<0.01)。证实,用含30U/L胰岛素的培养基培养48h的人脐静脉内皮细胞细胞可产生胰岛素抵抗。     

单兵急救与单兵急救包定位分析

目的确立单兵急救包的卫勤定位,为单兵急救包的研究设计提供依据。方法循证分析武器因素、环境因素和战位因素与战场急救的密切相关性,现代军事、非军事行动对单兵急救的特点和需求。结果提出了单兵急救模块技术;讨论了单兵急救包的卫勤定位。结论单兵急救包应凸显其医疗急救定位,在功能上与战场急救技术相配合,在装置上与战斗携行装相结合。     

同一传染源所致四起52例细菌性食物中毒的调查处理

目的对四起食物中毒案例进行原因调查。方法采用流行病学调查方法,并结合采集相关食物、加工工具和患者肛检等进行实验室检测。结果调查表明4起52例食物中毒案例是在进食由同一熟食店提供的不同种类熟食后出现腹痛、腹泻、呕吐、发热等症状,排除化学性中毒因素后经微生物学检测,患者肛检检出奇异变形杆菌及副溶血弧菌、进餐场所检出奇异变形杆菌、熟食店中8个样本中5个样本的熟食均检出奇异变形杆菌,3个样本的细菌总数和大肠菌群MPN值均大于熟肉制品和酱腌菜国标值150倍以上。结论是一起由同一传染源所致4起52例细菌性食物中毒,致病菌为奇异变形杆菌和副溶血弧菌     

刺五加多糖对H202诱导海马细胞凋亡的保护作用

目的 研究刺五加多糖（Acanthopanax senticosus polysaccharide，ASPS）对大鼠海马细胞的抗凋亡作用，并探讨其机制。方法 运用海马神经细胞原代培养技术，采用H202诱导建立细胞凋亡模型。观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞活性；免疫组化法检测细胞中Bax与Bcl-2的蛋白表达。结果形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻；ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01），ASPS组Bcl-2表达量较高而Pax表达量较低。结论ASPS能够提高海马神经细胞的抗凋亡能力，并具有一定的浓度依赖性。     

葡萄籽原花青素对海马细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠海马细胞氧化损伤的保护作用,及对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法:建立H2O2致海马细胞损伤模型,观察GSP对细胞形态和细胞存活率的影响;并用免疫组化法检测GSP对凋亡相关基因Bcl-2与Bax蛋白表达的影响。结果:1 mmol/L H2O2诱导海马细胞损伤,细胞活力下降(P<0.001),细胞凋亡小体明显增多,细胞中Bcl-2表达下降和Bax表达升高。而GSP可明显减少细胞损伤,上调细胞中Bcl-2的表达,使细胞中Bax表达明显减少,(P<0.01),细胞凋亡明显改善。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞凋亡具有保护作用,与GSP可增加Bcl-2表达同时减少Bax表达有关。     

刺五加多糖对氧化应激损伤的海马神经元iNOS mRNA表达的影响

目的研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS）对氧化应激损伤的海马神经元iNOSmRNA表达的影响,并探讨其可能机制。方法运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化MTT法测定细胞活性;化学比色法检测细胞匀浆液中一氧化氮（NO）的含量;RT-PCR法检测iNOSmRNA的表达。结果形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻,NO的含量和iNOSmRNA的表达显著降低,ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01）。结论ASPS能够下调iNOSmRNA的表达,并对海马神经元氧化损伤有保护作用。     

芪莲汤对2型糖尿病大鼠治疗作用的实验研究

目的从血糖、血清CRP及胰岛素抵抗和胰腺组织内细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）及转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）等指标观察芪莲汤对2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）大鼠的保护作用及部分机制。方法应用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,模型成功后每日灌胃给予芪莲汤（高剂量15g·kg^-1·d^-1,低剂量7．5g·k^-1·d^-1）连续6周。实验结束后测血糖,取血清测定胰岛素含量和G反应蛋白（C-reactive protein,CRP）,用免疫组织化学的方法检测胰腺组织中ICAM-1和TGF-β1蛋白表达。结果芪莲汤可显著降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,给药组与模型组比较有显著性差别（P〈0．05）,血糖水平与药物剂量呈依赖关系,高剂量组和低剂量组比较有显著性差异（P〈0．05）。两给药组与模型组比较胰岛素抵抗指数明显降低,统计有显著性差异（P〈0．05）,胰岛素抵抗指数有剂量依赖趋势,但高剂量组和低剂量组比较无统计学意义。芪莲汤能降低2型糖尿病大鼠血清CRP含量,两给药组与模型组比较有显著性差异（P〈0．05）。免疫组化结果显示,给药组胰腺组织ICAM-1蛋白表达均低于模型组灰度值,比较有显著性差异（P〈0．05）,而给药组TGF-β1蛋白表达较模型组有升高,高剂量组与模型组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论芪莲汤对2型糖尿病大鼠有明显的保护作用,其保护机制可能与降低胰腺组织中ICAM-1及升高TGF-β1蛋白表达有关。     

天麻素对模拟高原缺氧大鼠动脉血气及脑组织损伤的影响

目的 研究天麻素对模拟高原缺氧大鼠动脉血气及脑组织损伤的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为常氧模型(N)组,缺氧模型(M)组,红景天(RC)对照组,天麻素低剂量(GAS-L)组,天麻素中剂量(GAS-M)组,天麻素高剂量(GAS-H)组,每组10只.每日定时灌胃给药,连续7d.采用低压氧舱模拟海拔8000m高原环境,缺氧12h后,测定各组大鼠动脉血气,观察大鼠脑组织病理变化,并测定脑组织相关生化指标水平.结果 与N组比较,M组大鼠氧分压(PO2)、血氧饱和度(SO2)、氧合指数(PO2/FiO2)、钠离子(Na+)、实际碳酸氢根(HCO3–)明显下降(P<0.01),乳酸(Lac)、血红蛋白(Hb)浓度明显上升(P<0.01);大鼠脑组织出现病理性损伤;脑组织中丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)含量明显升高(P<0.01),谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显降低(P<0.01).与M组比,GAS-L组PO2、SO2、PO2/FiO2明显升高(P<0.05,P<0.01);GAS三个剂量组Na+、HCO3–均明显升高(P<0.05,P<0.01);GAS-L及GAS-H组Lac含量明显降低(P<0.01,P<0.05);GAS-H组Hb明显升高(P<0.01).RC及GAS组脑组织病理损伤较M组轻.与M组相比,GAS三个剂量组脑组织MDA明显降低(P<0.05,P<0.01),H2O2有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);GSH含量及GSH-Px活性均明显升高(P<0.05,P<0.01),但无明显剂量依赖性.结论 天麻素能够对模拟高原缺氧大鼠动脉血气及脑组织损伤起到保护作用.     

后循环短暂脑缺血发作患者外周Treg、IL-17检测及意义

目的探讨后循环短暂缺血发作（TIA）患者外周血CD4。CD25’调节性T细胞（Treg）比例、白介素17（IL-17）的水平变化及意义。方法2012年9月至2013年2月纳入后循环TIA患者65例,根据ADCD2评分分为高危组（4～7分,34例）和低危组（0～3分,31例）,另取同期本院体检中心健康成人30例作为对照组。采用流式细胞分析法及酶联免疫吸附法检测各组外周血Treg占CD4＋T细胞比例及血清IL-17浓度值。结果高危组外周血Treg与CD4’细胞比值（11．38±3．58）％显著低于低危组[（14．83±4．10）％,P〈0．05]和对照组[（15．60±4．19）％,P〈0．05],低危组和对照组没有统计学差异（P〉0．05）。高危组血清IL-17浓度[（312．65~63．69）pg／m1]和低危组[（290．13＋63．65）pg／ml,P〈0．05]显著高于对照组[（207．26±63．00）pg／ml,P〈0．05],而高危组和低危组之间无统计学差异（P〉0．05）。结论高危后循环TIA患者外周血Treg减少、IL-17浓度升高,可能是导致其外周血自身免疫调节失去平衡,进而发生脑梗死的原因之一。     

成体神经干细胞培养方法的建立

目的 探讨体外建立培养成体神经干细胞(MSC)的方法.方法 从6周龄大鼠脑组织中分离神经干细胞,用神经干细胞培养液[DMEM/F12培养液添加1%N2、2%B27、20 μg/L表皮生长因子(EGF)和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]使其稳定增殖,10%胎牛血清诱导其贴壁分化.倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE,成熟神经元的特异性标志)、半乳糖脑苷脂(Galc-C,成熟少突胶质细胞的标记物)的表达.结果 分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测显示Nestin阳性细胞为97.6%,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE、Galc-C阳性细胞.结论 采用无血清的神经干细胞培养液能培养出具有分化潜能的成体神经干细胞.