构建内皮型一氧化氮合酶真核表达载体及在内皮细胞的表达

背景:内皮型一氧化氮合酶表达产物对内皮细胞的影响是血管外科基础研究中的重要课题,对于生物人工血管的研制有重要意义。目的:构建内皮型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3.1/eNOS,以脂质体为介导观察其在血管内皮细胞中的转染效率,评价表达产物内皮型一氧化氮合酶的酶学活性及其对内皮细胞生长的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2005-07/2007-05在南京大学医学院附属鼓楼医院生物化学实验室完成。材料:质粒PCMV-eNOS由勋阳医学院张群林教授惠赠。pcDNA3.1真核表达载体由南京大学博士后贾立军馈赠,pcDNA3.0/EGFP质粒由戚金亮博士提供。大肠杆菌DH5a和人脐静脉内皮细胞株(ECV304)为南京大学生物系保存。方法:采用分子生物学技术,先用限制性核酸内切酶EcorⅠ酶切质粒PCMV/eNOS,电泳回收3.6kb编码人内皮型一氧化氮合酶cDNA序列,克隆入质粒pcDNA3.1的EcorⅠ酶切位点,通过内皮型一氧化氮合酶cDNA序列中的XhoⅠ酶切位点筛选其插入载体的方向,构建pcDNA3.1/eNOS重组质粒。以Lipofec-tamine为介导将其与pcDNA3.0/EGFP共转染分离培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)。主要观察指标:①观察转染后对ECV304生长的影响,在流式细胞仪和荧光显微镜下计算转染效率。②以反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学检测内皮型一氧化氮合酶基因的表达,测定内皮型一氧化氮合酶活性以及一氧化氮产量。③观察施加不同因素(L-精氨酸、氯化钙、乙二胺四乙酸、L-NAME)对内皮型一氧化氮合酶活性及一氧化氮合成的影响;同时检测此时ECV304生长所受影响。结果:以脂质体为介导转染人脐静脉ECV304后,其转染效率为(32.6±2.6)%,反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学检测到相应的内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达,与对照组有明显差别;同时在上述不同因素影响下内皮型一氧化氮合酶活性出现明显差别;随着培养液一氧化氮浓度升高,ECV304生长曲线下降。结论:成功构建pcDNA3.1/eNOS,在脂质体介导下能高效转染ECV304并良好表达,Ca2 是内皮型一氧化氮合酶的必要激活条件,ECV304的增生受到高浓度一氧化氮抑制。     

宫腔镜切除经聚焦超声消融降型后子宫肌瘤（FIGO II-III）的疗效及安全性临床研究

目的：探究经聚焦超声消融手术（ｆｏｃｕｓｅｄｕｌｔｒａｓｏｕｎｄａｂｌａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ,ＦＵＡＳ）降型后的子宫肌瘤（ＦＩＧＯⅡ ～ Ⅲ）行宫腔镜下子宫肌瘤电切术（ｔｒａｎｓｃｅｒｖｉｃａｌｒｅｓｅｃｔｉｏｎｏｆｍｙｏｍａ,ＴＣＲＭ）的疗效及安全性。方法：通过回顾性研究, 收集遂宁市中医院 ２８例经 ＦＵＡＳ降型后再行 ＴＣＲＭ的子宫肌瘤（ＦＩＧＯⅡ ～Ⅲ）患者的数据,将同期单纯接受 ＴＣＲＭ 治疗的 ５３例子宫黏膜下肌瘤患者作为对照,比较两组患者的术中、术后并发症及疗效情况。结果：ＦＵＡＳ＋ＴＣＲＭ组 治疗前肌瘤病灶体积显著大于 ＴＣＲＭ组［３５．６５（１８．９８～７３．３８）ｃｍ３ｖｓ６．１１（１．０９～１１．８０）ｃｍ３,Ｐ ＜０．０５］,ＦＵＡＳ＋ ＴＣＲＭ组手术时间超过 ＴＣＲＭ组［５６．５０（４２．２５～７４．５０）ｍｉｎｖｓ３５．００（２８．００～４８．００）ｍｉｎ,Ｐ ＜０．０５］、ＦＵＡＳ＋ＴＣＲＭ 组术中使用膨宫液总量高于 ＴＣＲＭ组［１３．５０（４．７５～２０．００）Ｌｖｓ７．２５（４．７５～１０．００）Ｌ,Ｐ ＜０．０５］,两组患者治疗后 月经量 ＰＢＡＣ评分、子宫肌瘤生活质量评分（ＵＦＳ ＱＯＬ）均较术前显著改善,差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）;ＦＵＡＳ＋ ＴＣＲＭ组与 ＴＣＲＭ组术中出血量、临床疗效改善程度、术中及术后并发症发生情况差异差异均无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）。结论：部分不属于 ＴＣＲＭ手术适应证的子宫肌瘤（ＦＩＧＯⅡ ～Ⅲ或者肌瘤直径 ＞５ｃｍ的Ⅰ ～Ⅱ型）,ＴＣＲＭ手术 风险大,并发症多。这类肌瘤经过 ＦＵＡＳ消融降型后,有机会通过 ＴＣＲＭ完全切除,且并不增加宫腔镜并发症,术后 疗效与适合 ＴＣＲＭ治疗的黏膜下肌瘤相当,治疗方式安全可行,为临床治疗提供了新的治疗思路,值得进一步研究 及推广。